⑴ 细胞生物学实验中细胞增殖的检测方法
细胞生物学实验中，细胞增殖的检测方法多种多样，主要可以分为四类：检测细胞代谢活性、检测ATP含量、活细胞荧光标记、增强标记检测。
首先，检测细胞代谢活性是反映细胞增殖的重要指标。乳酸脱氢酶在细胞增殖过程中活性增加，活性脱氢酶能将外源性四唑盐或者阿尔玛蓝还原，形成带有颜色的还原产物。通过分光光度计或酶标仪读取含染料培养基的吸光度，以衡量细胞的代谢活性。四种常用的四唑盐包括MTT、XTT、MTS和WST1，其还原产物为甲瓒。MTT商品名为噻唑蓝，是黄色染料，具有广泛的细胞类型适用性，但其生成的甲瓒晶体需要溶解在DMSO中，MTT主要作为终点检测方法。XTT是MTT类似物，具有快速、简便、敏感的优点，但其水溶液不稳定，需要低温保存。MTS是一种新型的MTT类似物，具有无放射性、快速、安全、方便、灵活及特异性强的特点，克服了MTT、XTT的缺点。WST-1是水溶性四唑盐试剂，与MTT或其他MTT类似产品相比具有更明显的优点，如更稳定的甲瓒产物、更宽的线性范围、更高的灵敏度和更强的溶解性，以及更灵活的检测时间。CCK-8试剂则含有WST-8，更稳定、灵敏度更高、溶解性更强，更适合悬浮细胞和高通量药物筛选。
其次，检测ATP含量也是反映细胞增殖的有效方法。ATP是细胞能量的直接来源，其含量受到严格的调控。在细胞溶解物或提取物中测得的ATP浓度与细胞数之间存在严格的线性关系。ATP检测方法包括成色反应、荧光、化学发光或同位素等，目前最广泛使用的是基于萤火虫荧光素酶的方法，荧光素酶催化荧光素氧化，消耗ATP，如果有ATP存在，则荧光素就会发光，发光效率极高，发光量与ATP含量呈良好的线性关系。
此外，活细胞荧光标记可以准确追踪细胞增殖过程。羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)是一种可穿透细胞膜的荧光染料，能够在活细胞内聚积并与胞内蛋白共价结合，水解后的CFSE释放出荧光物质。当细胞分裂时，CFSE标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，荧光强度降低。利用流式细胞仪分析荧光强度，可以追踪细胞群体的增殖动态。
最后，增强标记检测是利用特异性单抗来识别细胞增殖标志。例如，在人体细胞中，Ki-67、PCNA等蛋白可以作为细胞增殖的标志，但这种方法需要组织切片，适用于高通量分析的限制性较大。然而，这一方法在癌症研究领域受到青睐，因为它能够检测体内肿瘤细胞的增殖。