⑴ 流式细胞术检测：细胞凋亡、细胞自噬、细胞因子、外泌体
流式细胞术(flow cytometry，FCM) 是一种高级细胞定量分析技术，以其快速、高精度、多参数和高通量的特点，广泛应用于生物学和医学研究中。以下是流式细胞术在细胞凋亡、细胞自噬、细胞因子检测以及外泌体检测中的应用。
在检测细胞凋亡中，流式细胞术主要通过线粒体膜电位检测和Caspase-3活性检测来实现。线粒体膜电位检测原理是利用荧光探针 JC-1 的聚集特性，正常细胞线粒体膜电位较高，JC-1形成聚合物并产生红色荧光，而凋亡细胞线粒体膜电位降低，JC-1为单体，产生绿色荧光。通过检测绿色和红色荧光，可以定量分析线粒体膜电位的变化。Caspase-3活性检测则是基于细胞内蛋白酶的级联活化，通过检测活化状态的Caspase酶使底物发出荧光，以此量化凋亡细胞。
对于细胞因子的检测，Cytometric Bead Array (CBA)技术被广泛应用。CBA技术基于流式细胞检测系统，能同时对单个样品中的多个指标进行多重定量分析，实现样本中细胞因子的精确检测。
在细胞自噬检测中，LC3-II作为自噬的生物学标记，其在自噬发生时位于自噬小体内。通过对比同型对照，分析平均荧光强度，可确定自噬的发生。
外泌体检测则主要关注其特有的四次跨膜蛋白，如CD9、CD63和TSG101，外泌体表达的定性定量分析通过包被了抗体的珠子进行流式检测实现。
最后，流式细胞术在科研和医学研究中的广泛应用，包括对照设置、仪器优化、阳性确定、实验流程、标准化操作指南以及科研工具推荐等。这些内容涵盖了流式细胞术的基本原理、应用技巧以及支持工具，是科研工作者不可或缺的知识库。
⑵ 如何使用JC-1检测线粒体膜电位
博凌科为生物科技-为你解答：线粒体膜电位的降低是凋亡的一个早期事件，5,5,6,6-tetrachloro-1,1,3,3- iodide (JC-1)可用于流式细胞术检测线粒体膜电位的变化。正常细胞的线粒体膜电位电压较高，可形成JC-1的聚集体，发出红色荧光，而线粒体膜电位降低的细胞，则会形成JC-1单体，发出绿色荧光。材料： 细胞悬液 完全细胞培养基 去极化药物：如0.1mM valinomycin或0.25mM carbonyl cyanide m-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone (FCCP) in DMSO 1mg/ml JC-1储存液（溶于DMSO），分装成小包装，在－20℃可保存1年。 PBS 具有488nm激发光源的流式细胞仪，配备525－590nm带宽的滤镜。JC-1染色： 收集2105的细胞，用预温到37℃的新鲜完全培养基调整至1ml。制备阳性对照（以去极化药物处理过的细胞）。标本和阳性对照的染色步骤相同。 融化1管JC-1储存液，每1ml细胞悬液中通过边振荡边加的方式加入2.5L（终浓度：2.5ug/ml）。振荡细胞悬液直至标本形成均一的红紫色。 JC-1在水相容易形成聚集体，所以需要边振荡边加。未用完的JC-1不要再保存至－20℃。 37℃避光保存10分钟。 加入2ml PBS至细胞悬液中，500g室温离心5分钟，去上清。 以0.3ml PBS重悬细胞。上机取样，注意获取细胞的速度不要250至300细胞/秒。Fig1 HL-60 cells, (A) control and (B) depolarized (treated with 100 nM valinomycin), stained with 2.5 g/ml JC-1. Note the shift to the bottom and to the right by cells with depolarized mitochondria.Fig2 After incubation with 2.5 g/ml JC-1 at 37C, peripheral blood mononulear cells usually show a single population of monocytes, while here lymphocytes give rise to two separate peaks. This could indicate the presence of a functional heterogeneity within lymphocytes (A). Such a phenomenon, however, is not always present. Treating cells with valinomycin results in a loss of orange signal either from lymphocytes or from monocytes (B).
⑶ 流式细胞仪检测线粒体膜电位如何分析
一般是使用JC-1或者rhodamin123来测量的，前者是看红绿的比值，而后者是看绿色的强度。