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荧光免疫微球检测方法

发布时间:2025-02-10 04:31:26

‘壹’ 发光氧通道免疫分析技术(LOCI)

发光氧通道免疫分析(Luminescent Oxygen Channeling Immunoassay,简称“LOCI 分析技术”)是一种新型的均相免疫分析技术。该技术最早由德灵诊断(Behring Diagnosis Inc.)的 Edwin F. Ullman 等学者提出并开发,相关研究成果发表在 PNAS1 及 Clinical Chemistry2 等期刊上。

LOCI 分析技术的工作原理主要依托“受体微球”与“供体微球”两种聚合物纳米微球实现检测。当检测体系中存在待测物时,两种微球表面修饰的抗体与待测物发生免疫反应,形成免疫复合物。经激发光照射检测体系,复合物中的供体微球产生的单线态氧扩散至受体微球,受体微球中的化学发光试剂捕获单线态氧后产生光信号。由于单线态氧活性高、半衰期短,只有当供体微球和受体微球距离足够接近(形成免疫复合物)的情况下,供体微球释放的单线态氧才能有效地到达受体微球,从而产生一系列化学反应,发射出反斯托克斯光信号。当体系中不存在待测物时,即不形成免疫复合物,游离供体微球产生的单线态氧快速在体系中耗散,几乎不产生 LOCI 信号。这就是 LOCI 分析技术的简要工作原理。

LOCI 分析技术的优势包括:1.均相免洗;2.抗干扰。LOCI 检测反应为均相反应模式且游离的标记物不产生检测信号,因此不需要多次洗涤去除游离的标记物,反应过程无需清洗和分离,只需检测试剂与待检测样本充分反应后,使用光激发,测定光信号的强度即可完成检测。LOCI 分析技术利用单线态氧介导的能量传递过程,实现了“长波激发-短波发射”的反斯托克斯发光,几乎完全消除了基质中背景荧光物质对检测分析的干扰,从而大大提高了 LOCI 分析技术的检测性能。

LOCI 技术的前沿应用包括:1.细胞外囊泡分析;2.微流控芯片。Takahiro Ochiya 等学者利用 LOCI 技术构建了一种免纯化的细胞外囊泡分析方法,通过在供体微球和受体微球表面修饰特定抗体,当目标细胞外囊泡存在时即会形成可有效进行单线态氧传输的免疫复合物,不需要复杂而冗长的纯化过程,即能产生 LOCI 信号实现检测目标。Katsuo Kurabayashi 等学者通过将 LOCI 技术与微流控芯片技术相结合,简化了微流控芯片的结构和检测流程,实现了一种可批量制造、可大规模生产且坚固耐用的免疫分析微流控装置。

作为一种新型的化学发光免疫分析方法,LOCI 分析技术相对传统免疫分析技术(如 ELISA、流式分析等)具有均相免洗、高灵敏、操作简便、易于自动化等诸多优势。其在国内的受关注度也持续提高,国内已有多家知名厂商在积极布局 LOCI 相关原材料、仪器的研发,相信这会是一项改变未来免疫检测市场格局的革命性技术。

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