菌落总数是指样品经过处理，在一定条件下培养后所得1mL(g)检样或单位面积样品中所含菌落的总数，是最常用的微生物检测项目。（FilmplateTM Aerobic BB202）是一种预先制备好的一次性培养基产品，含有标准的营养培养基，冷水可溶性的吸水凝胶和脱氢酶指示剂氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在测试片上呈红色，这样可缩短计数时间和增强计数效果。本产品适合于各类食品及食品原料中菌落总数的测定，也可用于检测食品加工容器、操作台和其他设备表面的菌落总数。执行标准3方方圆生物：食品安全国家标准 食品微生物学检验菌落总数测定（GB 4789.2）。
操作方法:
1、样品处理：取样品25mL（g）放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水）的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，必要时用1mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液调节样品匀液pH至6.6～7.2。用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，注入含有9mL稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液，以此类推，做出1:1000等稀释度的样品匀液，每次换一支吸管。
2、接种：一般食品选2～3个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。将菌落总数测试片（BB202）置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固，每个稀释度接种两片。同时做一片空白阴性对照。
3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。一般食品培养温度为36℃±1℃，培养15～24h；水产品培养温度为30℃±1℃，培养48h。
Ⅱ 菌落总数检测的注意事项与快速检测技术！
食品安全事件频发，民众对食品安全的关注度日益提高，确保食品安全的关键在于建立科学的食品安全检测技术。检测方法的规范性是保障食品安全的重要环节，它要求检测数据具有高准确度和可信度。食品中菌落总数反映了食品在生产过程中的卫生状况，是判断食品被细菌污染程度的重要指标。本文将分析国标法微生物检测中菌落总数测定的传统方法的注意事项，并重点介绍快速检测技术在菌落总数检测中的应用。
一、传统检测方法
在传统检测方法中，菌落总数的检测流程和注意事项如下：
1. **流程图**：具体流程图请参考相关文献或资料。
2. **注意事项**：
- **器皿及稀释液**：所有用于检验的玻璃器皿必须彻底灭菌，并在灭菌前清洗干净，避免残留抑菌物质。每批样品稀释液需有空白对照，以检测平皿、培养基或空气污染的可能性。
- **样品稀释**：
- 样品应无菌称取或量取，并与灭菌稀释液混合，充分振摇，制成1:10的稀释液。对于固体样品，最好剪碎后与稀释液研匀。
- 根据食品卫生标准要求，将1:10稀释液进行10倍系列稀释，每一步都应确保菌体均匀分散，特别是在酸度较高的样品中，需先调节PH值至中性。
- **平板接种与培养**：选择适宜的稀释度，将稀释液加至灭菌平皿内，培养温度应根据食品种类而定，一般为37℃或30℃，培养时间为48±2小时。
- **菌落计数**：在计数时应区分样品残渣与菌落，可向培养基中添加TTC染剂，便于观测和计数，但浓度不宜过高，以免抑制菌落生长。
- **结果报告**：依据不同情况，报告平均菌落数乘以稀释倍数，或根据菌落分布情况作相应调整。
二、快速检测新技术
1. **3M测试片快速分析技术**：
- **概念**：3M测试片是一种便捷可再生的水化干膜，适用于细菌和真菌的计数。
- **检测步骤**：只需三步即可实现快速准确测定，例如，通过计算红色菌落的数量来评估菌落数。
- **结果判读**：测试片上菌落的数量、分布及颜色深浅用于计数，包括无菌落、少量菌落、菌落数在特定范围内的计数、菌落数超过计数范围时的处理方法。
- **特点**：
- **工作效率提升**：显着提高实验室工作效率，带来生产力的提升和效益的增加。
- **标准化方法**：品质稳定的快速测试片克服传统方法的差异性。
- **国际认证**：得到全球权威机构的认可，确保检测结果的可靠性和广泛认可。
- **快速响应**：缩短检测时间，快速提供测试结果。
- **HACCP认证**：适用于食品生产工艺中的关键控制点检测，提供全面的解决方案。
2. **ATP荧光法**：
- **检测原理**：利用生物发光法检测总菌落数，基于萤火虫的发光反应原理。
- **特点**：成本低、操作简单、响应速度快，已广泛应用于食品中菌落总数的测定。
3. **MTT法**：
- **检测原理**：基于活体微生物线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原MTT形成结晶，间接反映活菌细胞数量。
- **应用实例**：用于巴氏消毒奶中活菌素的快速检测，操作快速、灵敏度高。
- **特点**：检测快速、灵敏度高。
4. **流式细胞术**：
- **检测原理**：通过激光照射标记后的细胞产生特异荧光信号，对这些信号进行检测和定量计算得出菌群总数。
- **特点**：快速、便捷、结果可靠、易于操作。
总结**：菌落总数检测在食品安全中占据重要地位，传统方法虽基础但繁琐，快速检测技术提供了更为便捷、高效、经济的解决方案。不同方法各有优势，适用于不同场景，应根据实际情况选择最适合的检测技术。积极关注新技术的应用，将有助于实现检测的精确、经济、便捷和可靠。