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DNA大片段突变的检测方法

发布时间:2025-02-05 13:52:13

哪些技术可以检测DNA的单碱基的突变

DNA 序列最微小的变异也可能会造成深远的影响。这些小的改变可能是疾病的根源或是一些传染病耐受某些抗生素的原因。现代基因组学研究曾证实,成功治疗一种疾病以及让其迅速蔓延至整个身体,两者之间有可能就仅是一个突变的差异。
现在,来自华盛顿大学和莱斯大学的研究人员开发出了一种新方法,可以检测 DNA 的特定片段,并精确找到单个突变,这有可能帮助医生诊断及治疗诸如癌症和结核病等疾病。相关研究论文刊登在了近期出版的《岁斗自然-化学》(Nature Chemistry)杂志上薯高。
研究人员改进了从前的方法,新方案无需任何复杂的反应或是添加酶,它只需要利用 DNA 。这一方法能够有力地检测温度变化及其他的环境改变,这意味着它非常适用于资源缺乏环境下的诊断应用。
DNA 是一类核酸生物分子,它赋予了所有生物独特的遗传特征。在 DNA 双螺旋链中,一连串的碱基对编码着我们的遗传信息。随着基因组学研究的进展,人们清楚地了解到,仅一个碱基对的改变(突变、插入或删除)都足以引发严重的生物学后果。可以此来解释部分疾病发作,或是一些疾病对于常规抗生素治疗不产生反应的原因。
例如,众所周知耐药结核病是严重威胁人类健康和生存的危险因素之一。它对抗生素耐药通常是由于某一特异基因上的少数突变所导致。Seelig说乎手磨,如果一名结核患者对治疗不产生反应,很有可能存在有突变。
现在,研究人员已具备了检测这种突变的能力。
研究人员设计出了一些探针,它们可以辨认出靶 DNA 片段上的单碱基对突变。借助这些探针,研究人员能够更详细地寻找长达 200 个碱基对的序列中的变异,而当前的方法只能检测 20 个碱基对 DNA 片段中的突变。
这项研究表明,研究人员可以更好地提高特异性。无论最好的特异性水平是什么,他们最佳能够获得这一数值的平方。
针对一段怀疑带有突变的 DNA 序列,研究人员设计出一些测试探针。为此,他们生成了与问题双螺旋链互补的 DNA 序列。随后,他们将探针和 DNA 序列放置到有盐水的试管中混合,在那里如果碱基对完整它们会自然地彼此相互匹配。不同于以往的技术,探针分子检测的是靶 DNA 双螺旋链的突变,而非单链的突变,从而提高了特异性。
如果探针与靶 DNA 序列之间能够完美的匹配,探针就会发射荧光。如果不发荧光,则表明两者不匹配,靶 DNA 链中存在有突变。
研究人员已将该技术申请专利,并推动其商业化。他们希望能够把它转化为纸质诊断测试,使其能够应用于世界上部分缺少医疗资源的地区。

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⑵ 6,dna点突变常用的检测方法有哪些

1.限制性片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP):由DNA 的多态性,致使DNA 分子的限制酶切位点及数目发生改变,用限制酶切割基因组时,所产生的片段数目和每个片段的长度就不同,即所谓的限制性片段长度多态性,导致限制片段长度发生改变的酶切位点,又称为多态性位点.最早是用Southern Blot/RFLP方法检测,后来采用聚合酶链反应(PCR)与限制酶酶切相结合的方法.现在多采用PCR-RFLP法进行研究基因的限制性片段长度多态性.\x0d2.单链构象多态性(SSCP):是一种基于单链DNA构象差别的点突变检测方法.相同长度的单链DNA如果顺序不同,甚至单个碱基不同,就会形成不同的构象.在电泳时泳动的速度不同.将PCR产物经变性后,进行单链DNA凝胶电泳时,靶DNA中若发生单个碱基替换等改变时,就会出现泳动变位(mobility shift),多用于鉴定是否存在突变及诊断未知突变.

⑶ dna鉴定方法有哪些方法有哪些

DNA鉴定方法主要包括以下几种:


1. 聚合酶链式反应(PCR)


解释:PCR是一种在实验室中快速扩增特定DNA片段的方法。通过特定的引物与DNA模板结合,利用酶的作用,进行链式反应,将特定的DNA片段大量复制。这种方法广泛应用于DNA鉴定中,如亲子鉴定、个体识别等。


2. 限制性片段长度多态性(RFLP)分析


解释:RFLP是通过特定的限制性内切酶对DNA进行切割,产生特定的片段长度。不同的个体,由于DNA序列的差异,切割产生的片段长度和数量会有所不同,从而形成独特的DNA图谱。这种方法常用于遗传病分析、种群遗传学研究和法医学中的个体识别。


3. 单核苷酸多态性(SNP)检测


解释:SNP是指DNA序列中单个核苷酸的变异。通过对特定位置的SNP进行检测,可以确定个体的基因型。这种方法在基因组关联研究中广泛应用,也用于法医学中的DNA鉴定,特别是复杂混合样本的鉴定。


4. 序列分析


解释:序列分析是通过测定DNA的碱基序列来确定其特定的基因序列。这种方法可以用于鉴定特定的基因变异、基因突变等,对于遗传病的诊断和法医学中的个体识别具有重要意义。随着测序技术的不断进步,序列分析在DNA鉴定中的应用越来越广泛。


以上四种方法是目前DNA鉴定中常用的技术手段,每种方法都有其特点和适用范围,根据具体的需求和样本情况选择合适的鉴定方法。

⑷ 基因突变检测方法

基因突变检测方法:
1.
PCR-SSCP法是在非这性聚丙烯酰胺凝胶上,短的单链DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同构象,一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。其基本原理为单链DNA在中性条件下会形成二级结构,这种二级结构依赖于其碱基组成,即使一个碱基的不同,也会形成不同的二级结构而出刺同的迁移率。由于该法简单快速,因而被广泛用于未知基因突变的检测。
2.
异源双链分析法(HA)
HA法直接在变性凝胶上分离杂交的突变型一野生型DNA双链。由于突变和野生型DNA形成的异源杂合双链DNA在其错配处会形成一突起,在非变性凝胶中电泳时,会产生与相应的同源双DNA不同的迁移率。该法与SSCP相似,所不同的是SSCP分离的是单链DNA,HA法分离的是双链DNA,也只适合于小片段的分析。
3.
突变体富集PCR法(mutant-enriched
PCR)本法的基本原理是利用ras基因家族某个密码子部位存在已知的限制性内切酶位点,如K-ras基因第12密码子的BstNI位点,第13密古巴子有BgⅠⅡ位点。用链续二次的巢式PCR来扩增包括K-ras第12、13密码子的DNA片段,在两次扩增反应之间用相应的内切酶消化扩增的DNA片段,野生型因被酶切而不能进入第二次PCR扩增,而突变型则能完整进入第二次PCR扩增并得到产物的富集。

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