鉴别蛋白质的方法及其原理

‘壹’ 双缩脲试剂鉴别蛋白质的原理！

蛋白质的肽键与双缩尿类似，可与铜离子在碱性环境下(双缩尿试剂)生成紫色络合物.稀氢氧化铜溶液(斐林试剂)有弱氧化性可与还原性糖中的醛基发生反应，生成砖红色的氧化亚铜沉淀。

双缩脲试剂是一种用于鉴定蛋白质的分析化学试剂。它是一种碱性的含铜试液，呈蓝色，由0.1 g/mL氢氧化钠或氢氧化钾、0.01 g/mL硫酸铜和酒石酸钾钠配制而成。

(1)鉴别蛋白质的方法及其原理扩展阅读

双缩脲反应主要涉及肽键，因此受蛋白质特异性影响较小。且使用试剂价廉易得，操作简便，可测定的范围为1～10mg蛋白质，适于精度要求不太高的蛋白质含量的测定，能测出的蛋白质含量须在约0.5mg以上。可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。

双缩脲法的缺点是精确度低、所需样品量大。干扰此测定的物质包括在性质上是氨基酸或肽的缓冲液，如TrIs缓冲液，因为它们产生阳性呈色反应，铜离子也容易被还原，有时出现红色沉淀。

参考资料来源：网络-双缩脲试剂

‘贰’ 鉴别蛋白质的方法

先用双向电泳，分离目的蛋白，然后打质谱，通过打出来前面几个氨基酸序列，到蛋白质数据库和蛋白组数据库上比对，就能知道是什么目的蛋白了。如果是新发现蛋白，可以比对est数据库，得到该基因序列，然后再克隆出来。

‘叁’ 双缩脲试剂鉴定蛋白质的原理

鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂，发生的是双缩脲反应。双缩脲反应实质是在碱性环境下的铜离子与双缩脲试剂发生的紫色反应。而蛋白质分子中含有很多与双缩脲（h2noc－nh－conh2）结构相似的肽键，所以蛋白质都能与双缩脲试剂发生颜色反应，可以用双缩脲试剂鉴定蛋白质的存在。

‘肆’ 蛋白质的检测方法及原理

1
磷酸化检测可以用二级质谱啊，在正离子模式下，经过collision
cell后中性丢失了98dalton（ser和thr）或216dalton（tyr）的肽段就可能是含一个磷酸化位点的磷酸化肽段。
2
基本原理就是设计个t将目的蛋白留在柱子上或沉淀下来。

‘伍’ 检测食品中蛋白质含量的原理和方法是什么

一、蛋白质的检测原理：

基于食品中蛋白质含量与食品中氮含量的比例关系换算的。如乳中蛋白质与氮含量的比值为6.38，大豆中蛋白质与氮含量的比值为5.71，普通食品中蛋白质与氮含量的比值为6.25。因此是通过测定食品中氮含量后再根据换算系数得到食品中蛋白质含量。

二、蛋白质的检测方法：

1、凯氏定氮法：样品在高温浓硫酸的消化作用下，将样品中的有机氮转化为无机铵，待消化液冷却后，加入过量的碱，使无机铵转化为挥发性的氨，再将氨蒸出后，利用盐酸标准溶液滴定，最后根据消耗的盐酸标液体积推算样品中的氮含量。

2、杜马斯定氮法：样品在高纯氧中充分燃烧的过程中，将氮元素转化为氮气或氮氧化物，再经过高温铜的还原，使所有的氮转化为N2，然后利用热导检测器检测N2的含量来推算样品中氮含量。因此杜马斯定氮法也称为杜马斯燃烧法或燃烧定氮法。

(5)鉴别蛋白质的方法及其原理扩展阅读：

凯氏定氮法通过硫酸高温消化，只能将有机氮转化为无机铵，而对于硝态氮（如硝酸盐、亚硝酸盐）则不能转化。因此凯氏定氮法适用于不含硝态氮的食品、农产品、化妆品、医药等。凯氏定氮法是由丹麦化学家凯道尔于1883年率先提出，由于设备要求简单，自提出后便成为蛋白质测定的经典方法，广泛运用于蛋白质检测中。

杜马斯燃烧法既能将有机氮转化为N2,又能将无机的硝态氮转化为N2。因此，杜马斯的应用更为广泛。杜马斯定氮法是由法国化学家杜马斯在1831年提出，虽然该法比凯氏定氮法早半个世纪提出，但由于当时设备条件难以满足杜马斯定氮法的要求，限制了其发展。

‘陆’ 测定蛋白质含量的方法有哪些,其原理各是什么.

Bradford法测定蛋白质浓度
（一）实验原理
双缩脲法（Biuret法）和Folin—酚试剂法（Lowry法）的明显缺点和许多限制,促使科学家们去寻找更好的蛋
白质溶液测定的方法.
1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法（Bradford法）,是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的.这种蛋白
质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用.这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定
法.
考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置（max）,由465nm变为595n
m,溶液的颜色也由棕黑色变为兰色.
在595nm下测定的吸光度值A595,与蛋白质浓度成正比.
Bradford法的突出优点是：
（1）灵敏度高,据估计比Lowry法约高四倍,其最低蛋白质检测量可达1g.这是因为蛋白质与染料结合后产生
的颜色变化很大,蛋白质－染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的
多.
（2）测定快速、简便,只需加一种试剂.完成一个样品的测定,只需要5分钟左右.由于染料与蛋白质结合的
大约只要2分钟即可完成,其颜色可以在1小时内保持稳定,且在5分钟至20分钟之间,颜色的稳定性最好.
因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间.
（3）干扰物质少.如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不
干扰此测定法.

‘柒’ 鉴别蛋白质的方法有哪些，简述其原理

遇盐凝固，遇酸分解

‘捌’ 鉴定蛋白质有哪些方法

蛋白质含量的测定：
1 凯氏定氮法
根据氮在蛋白质分子中含量恒定（平均占16%），因此测定出样品中氮的含量后，即可求出样品中蛋白质含量。
2 双缩脲法
3 福林-酚试剂法
福林-酚试剂包括两种试剂：碱性铜试剂，磷钼酸及磷钨酸的混合试剂。碱性铜试剂与蛋白质产生双缩脲反应。这种被作用的蛋白质中的酚基（酪氨酸），在碱性条件下易将磷钼酸和磷钨酸还原成蓝色的钼蓝和钨蓝，所生成蓝色的深浅，与蛋白质的含量成正比。在650nm和660nm波长下测定光吸收值，即可测定蛋白质含量。
4 紫外吸收法
酪氨酸，色氨酸在280nm处左右具有最大吸收。由于在各种蛋白质中这几种氨基酸含量差别不大，所以280nm的吸收值与浓度呈正相关。可用于蛋白质浓度的测定。