A. 大肠菌群检测方法
GB4789.3-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》中的规定操作步骤：
1、乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。
2、分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。
3、证实试验：挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。
SN0169-92《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法》规定操作：
1、推测试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管LST肉汤。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。
2、证实试验：将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中，36±1℃培养48±2h，观察是否产气。以BGLB产气为阳性。查MPN表，报告每ml(g)样品中大肠菌群的MPN值。
大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。
粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在，因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。
B. 食品卫生微生物学检验.大肠菌数测定
微生物
一、大肠菌群的检测GB4789.3-2010
第一法 大肠物宽察菌群MPN计数法 第二法 大肠菌群平板计数法
1.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤:称取35.6g溶于1000ml蒸巧拆馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10ml，121℃高压灭菌15min后备用。双料除蒸馏水外其他成分加倍。
1.2煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤：称取30g溶于1000ml蒸馏水中分装 ，经115℃15min高压灭菌备用。
1.3无菌生理盐水：称取8.5gNaCl溶于1L蒸馏水中。分装于250ml的锥形瓶中，121℃高压灭菌15min后备用
1.4结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）：称取41.6g溶于1L蒸馏水中，充分摇匀，加热煮沸2min冷却至50℃，倾注平板。
无菌 1 mol/L NaOH：称取40 g氢氧化钠溶于1 000 mL蒸馏水中，121 ℃高压灭菌15 min。
无菌 1 mol/L HCl：移取浓盐酸90 mL，用蒸馏水稀释至1 000 mL，121 ℃高压灭菌15 min。
二、大肠菌群的检测GB4789.3-2003 第一法 大肠菌群MPN计数法
2.1称取乳糖胆盐发酵培养基35.0g溶于1000ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10ml，115℃高压灭菌15min后备用。双料除蒸馏水外其他成分加倍。
2.2伊红美蓝琼脂平板：称取伊红美蓝琼脂37.5g溶于1000ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装、115℃高压灭菌15min后备用。
2.3乳糖发酵管：称取乳糖发酵培养基35.0g溶于1000ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10ml，115℃高压灭菌15min后备用
2.4无菌生理盐水：称取8.5gNaCl溶于1L蒸馏水中。分装于250ml的锥形瓶中，121℃高压灭菌15min后备用
2.5革兰氏染色按GB/T4789-2003中罩茄2规定。
C. 筷子检测出大肠菌群需要隔几天
筷子检测出大肠菌群需要一天。
1、根据查询相关资料信显示，采样方法：每次采样6～10件，每件贴纸片两张，每张纸片面积25cm2(5cm╳5cm)用无菌生理盐水湿润大肠菌群检测用纸片后，立即贴于食具内侧表面，30s后取下，置于无菌塑料袋内。筷子以5只为一件样品，用毛细吸管吸取无菌生理盐水湿润纸片后，立即将筷子进口端约5cm)抹试纸片，每件样品抹拭两张，放入无菌塑料袋内。
2、检验方法：将已采样的纸片置37℃培养16～18h，若纸片保持紫蓝色不变或有红色斑点但斑点周围无黄晕为大肠菌群阴性，在红色斑点周围有黄晕或纸片变黄并在黄色背景上呈现红色斑点或片状红晕为阳性。
D. 大肠菌群检测方法
结论：本文详细描述了大肠菌群检测的严格步骤和实验过程，确保结果的准确性。以下是改写后的部分：
大肠菌群检测是一个严谨的实验室操作，首先，进入无菌室需要进行一系列的消毒程序。步骤如下：打开紫外灯灭菌0.5-1小时，待灯熄灭0.5小时后方可进入。在更衣间更换专用装备后，进行手部消毒，使用75%酒精棉签。
实验步骤主要包括准备样本和培养基。从原液中取10ml放入双料管，1ml分别放入单料管和培养皿，形成不同梯度的样液。接着，分别在盐水管和培养皿中制备空白对照，如空气空白、琼脂空白和盐水空白。
将样本和对照放入恒温培养箱，设定温度36℃±1℃，培养时间分别为大肠菌24小时±2小时，菌落48小时±2小时。在检测过程中，若观察到大肠菌发酵产生气泡，还需在伊红美兰平板上进行进一步观察和接种。
最后，通过镜检判断样本的合格性，只有当镜检结果显示样本呈现紫红色和乳糖复发酵管产气时，才能确认为不合格。在处理样本之前，务必对试管进行彻底的消毒，确保无菌操作。
整个过程要求高度精确，以确保大肠菌群检测的科学性和准确性。