真菌总数检测方法国标

❶ 关于食品中微生物的检测

我国卫生部颁布的食品微生物指标有菌落总数、大肠菌群和致病菌三项。

你已经做过菌落总数，那就只需下面两个了。都是很普通的仪器，但是试剂的话比较多，需要特别购买，不过也是很普通的试剂，在一般的试剂商店能买到。

其实你可以外送检测，不会很贵。如果自己做，就比较烦了。

一、食品中大肠菌群的测定

1、实验材料：温箱、水浴锅、天平、显微镜、均质器或乳钵、温度计、平皿、试管、发酵管、吸管、载玻片、接种针、乳糖—胆盐发酵管、乳糖发酵管、蛋白胨水、靛基质试剂、麦康凯、伊红美蓝琼脂（EMB）、远腾氏琼脂、革兰氏染色液

2、实验方法与步骤

2.1采样及稀释

(1)以无菌操作将检样25g（或25ml）放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。固体检样最好用无菌均质器，以800r/min～1000r/min的速度处理1min，做成1：10的稀释液。

(2)用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇混匀，做成1：100的稀释液，换用1支1ml灭菌吸管，按上述操作依次作10倍递增稀释液

(3)根据食品卫生要求或对检验样品污染情况估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。也可直接用样品接种。

2.2乳糖初发酵试验

即通常所说的假定试验。其目的在于检查样品中有无发酵乳糖产生气体的细菌将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管；1ml及1ml以下者，用单料乳糖发酵管。每一个稀释度接种3管，置（36±1）℃温箱内，培养（24±2）h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产生者，则按下列程续进行。

2.3分离培养：将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂板或麦康凯琼脂平板上，置（36±1）℃温箱内，培养18h～24h，然后取出，观察菌落形态并作革兰氏染色镜检和复发酵试验。

2.4乳糖复发酵试验：即通常所说的证实试验，其目的在于证明从乳糖初酵管试验呈阳性反应的试管内分离到的革兰氏阴性无芽胞杆菌，确能发酵乳糖产生气体。在上述的选择性培养基上，挑取可疑大肠菌群1～2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置（36±1）℃的温箱内培养（24±2）h，观察产气情况。凡乳糖发酵管产气，革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，即报告为大肠杆菌阳性；凡乳糖发酵管不产气或革兰氏染色为阳性，则报告为大肠杆菌为阴性。

3报告：根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100ml（g）食品中大肠菌群的最可能数。

二、食品中病原菌的检验：主要有沙门氏菌属、志贺氏菌属、霍乱弧菌属、霉菌真菌等等。国内主要是指沙门氏和志贺氏，试剂主要为SS琼脂。将样品（增菌后）稀释涂布在SS琼脂上面，然后看长出的菌落，找一些图片做对照，一致的话说明有致病菌，没有的话就说明PASS。一般沙门氏或志贺氏菌落是无色透明或粉红色菌落，表面光滑，产硫化氢的菌落中心有黑点。

❷ 细菌总数怎么检测

细菌总数检测目前国标规定的方法为平板计数法，其检验方法是：

在玻璃平皿内，接种一毫升水样或稀释水样于加热液化的营养琼脂培养基中，冷却凝固后在37°C培养24小时，培养基上的菌落数或乘以水样的稀释倍数即为细菌总数。

有的国家把培养温度定为35°C或其他温度，也有把培养时间定为48小时的。这种方法精度高，但耗时长，难以满足实际工作需要。

为了简化检测程序、缩短检测时间，国内外学者进行了大量的快速检测方法的研究，提出了阻抗检测法、Simplate TM全平器计数法、微菌落技术、纸片法等检测方法，取得了一定的成果，但检测时间仍在4 h以上。

本研究在分析了已有研究成果的基础上，提出了在滤膜上染色后，直接计数的细菌总数检测方法，具体步骤为：

用集菌仪进行细菌收集→在膜上进行染色→在油镜下计数→按公式计算出菌液浓度。实验结果表明，该方法与传统的平板培养法无显着性差异，检测时间约1 h，是一种快速的细菌总数检测方法。

(2)真菌总数检测方法国标扩展阅读：

水中通常存在的细菌大致可分为三类：

1、天然水中存在的细菌。普通的是荧光假单孢杆菌、绿脓杆菌，一般认为这类细菌对健康人体是非致病的。

2、土壤细菌。当洪水时期或大雨后地表水中较多。它们在水中生存的时间不长，在水处理过程中容易被去除。腐蚀水管的铁细菌和硫细菌也属此类。

3、肠道细菌。它们生存在温血动物的肠道中，故粪便中大量存在。水体中发现这类细菌，可以认为已受到粪便的污染。致病性肠道细菌有沙门氏杆菌（伤寒和副伤寒菌）、B型炭疽菌、痢疾志贺氏菌和霍乱弧菌等。

❸ 如何测量微生物的菌数

日常生活中我们需要进行菌落总数检测的除了我们关心的各种食物外，还有水、化妆品、空气等。每种都有对应的检测标准和方法。此外，还有关于公共场所的卫生标准里也有一些物品是需要进行菌落计数的，比如旅馆里的浴缸，毛巾，拖鞋，卧具，茶具，理发店的理发用具等等，对于这些物品的菌落计数，我们一般会采用用无菌生理盐水湿润的棉拭子在相应位置涂抹一定面积（如茶具是在内、外缘涂抹50平方厘米），然后放入10毫升生理盐水内，振荡混匀后1:10稀释（通常会做1:10,1:100和1:1000三个稀释度），吸取1毫升稀释后的检样注入灭菌平板。平板放在适宜的温度培养，等平板上长出来菌落进行菌落计数也是有一套标准来进行判读和计算的（内容还是比较多的，手懒不想打了。）总之，这样计数出来的结果，我们称之为菌落总数。

其实，在评价卫生质量尤其是食品的卫生质量时，还有一个重要的指标——大肠菌群：一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌，因为主要来源是人畜粪便，因此能作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有无污染肠道致病菌的可能。食品中的大肠菌群数以100毫升（克）检样内大肠菌群最可能数（MPN）表示。最后，卫生部门还会对相应的致病菌进行专门的检测，沙门菌、志贺菌、副溶血弧菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、蜡样芽孢杆菌等等都有一套完整的检测流程和标准。

❹ 牙刷微生物的检测方法

1.方法:检测细菌总数、大肠菌群、真菌和HBsAg 四项指
标。
2. 细菌菌落总数：用浸有生理盐水的棉拭子在5 x 5cm2灭
菌规格板内涂抹受检物品表面10 次，将棉拭子放入10ml 灭菌
生理盐水中。按部颁《消毒技术规范》（1991）方法检验。
3.大肠杆菌：按上法采样将棉拭子放入胆盐乳糖管中。按
卫生部《消毒技术规范》（1991）方法检验，记录阳性、阴性数。
4 真菌：按（2）方法采样，将样品按1:10稀释，用H-92
微型混合器震荡30min，使真菌孢子充分散开，接种于马铃薯
葡萄糖琼脂培养基，28°C培养7d，记录平皿阳性、阴性数。
5 HBsAg:用蘸有1%血清磷酸盐缓冲液（0.01M,pH 7.2-7.4）棉拭子在5 x 5cm2规格板内涂抹物体表面10次，浸入1ml
磷酸盐缓冲液中。按部颁《消毒技术规范》（1991）方法检验.

注:王云峰，王有森，白竟玉，等.消毒技术规范〔M〕. 北京：卫生部，1991:100-113