① 内毒素测定内毒素测定方法
内毒素测定方法主要包括凝胶法和多种定量检测方法。
首先,凝胶法是基于鲎试剂与内毒素之间的凝集反应。通常,鲎试剂的规格为0.1ml/支或0.5ml/支,使用时需用除热原水溶解。操作时,通过观察是否有凝胶形成来判断反应终点。这种方法简便易行,经济实惠,无需专用设备,适用于定性或半定量检测。
其次,动态浊度法和终点浊度法是通过测量内毒素对光或光线的散射程度,随时间变化的浊度变化来定量检测内毒素。这种方法提供了连续的测量过程,精度较高。
动态显色法与终点显色法则利用内毒素与特定试剂反应后产生的颜色变化,通过对比标准曲线来确定内毒素的含量,是一种更为精确的定量检测手段。
总的来说,以上这些方法各有特点,凝胶法适合初步筛查,而动态浊度法和显色法则适用于需要精确定量的数据分析。
细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖(LipopolySaccharide,LPS)和蛋白的复合物,当细菌死亡或自溶后便会释放出内毒素。内毒素大量进入血液就会引起发热反应—“热原反应”。内毒素与多种感染疾病密切相关,病情恶化往往伴随着内毒素含量的增加,病情缓解也常伴随着内毒素含量的减少。因此,快速检测(1小时)血液、脏器内毒素含量可以为临床相关疾病的诊断预后提供参考。
② 鲎试验试验方法
鲎试验是通过一系列方法来检测内毒素,主要有以下几种:
1. 凝胶法:基于鲎试剂与内毒素的凝集反应。常用规格有0.1ml/支或0.5ml/支,需用除热原水复溶后使用。其特点是操作简便,经济,无需专用设备,可进行定性或半定量测定。
2. 浊度法:包括动态浊度法和终点浊度法,通过检测浊度变化测定内毒素。动态浊度法要求特定的浊度上升到预设吸光度所需的时间或速度。目前,终点浊度法尚未商品化。
3. 显色基质法:如终点显色法和动态显色法,利用凝固酶产生的颜色变化来确定内毒素含量,厦门鲎试剂厂的鲎试剂盒具有高灵敏度和国际领先质量。显色法需要酶标仪或可见分光光度计进行检测。
对于内毒素限量检测,可以选择凝胶法,通过样品干扰试验确定鲎试剂的灵敏度;如需定量测定,显色基质鲎试剂盒或动态浊度法更为适合。动态浊度法和显色法需要动态光度测定仪器,如微板鲎试仪ELx808配合软件,操作简便且线性范围宽。
鲎试剂是从栖生于海洋的节肢动物“鲎”的兰色血液中提取变形细胞溶解物,经低温冷冻干燥而成的生物试剂,专用于细菌内毒素检测。鲎试剂因能与细菌内毒素及β-葡聚糖反应形成凝胶而被广泛用于检测食品、水源、药品、医疗器械、动物体液等不同样品中的内毒素。使用鲎试剂检测的试验称为鲎试验。
③ 细菌内毒素的检测方法和原理是什么
我国药典收载的细菌内毒素检测方法为鲎试验法,包括2种方法,即凝胶法和光度测定法,后者又包括浊度法和显色基质法。当各种检测法得到的检测结果不一致时,以凝胶法的检测结果为准。
鲎试验法有定性和定量之分,其按试验方法还可进一步分为凝胶法、动态浊度法、终点浊度法、动态显色法和终点显色法。
原理:
凝胶法是应用鲎试剂可与内毒素发生凝集反应的原理来定性或半定量检测内毒素的一种鲎试验法,检测时鲎试剂需以除热原水(内毒素检查用水)复溶后使用,通过观察有无凝胶形成作为检测终点。
浊度法是通过检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化来检测内毒素含量的鲎试验法,其中动态浊度法检测反应混合物浊度升高至某一预先设定的吸光度时所需的时间或浊度升高的速率。
动态显色法和终点显色法都属显色基质法。显色基质法是通过检测鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶使特定底物游离出生色团的多少来检测内毒素含量的鲎试验法,根据产物色度计算内毒素水平,又被称为比色法。
④ 细菌内毒素国家药典是怎么检测的
10版国家药典
检测内毒素可以用凝胶法
凝胶法是通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素的方法。
鲎试剂灵敏度复核试验
在本检查法规定的条件下,使鲎试剂产生凝集的内毒素的最低浓度即为鲎试剂的标示灵敏度,用EU/ml表示。当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时,应进行鲎试剂灵敏度复核试验。
以上摘自2010版中国药典《细菌内毒素检查法》