新型冠状病毒定量检测方法

‘壹’ 核酸检测步骤

常规核酸检测样本类型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液等。权重过程如下：

在获得患者样本后，应尽快进行检测。如果样品需要运送到不能立即测试，他们应当根据指令和打包在低温送到一个特殊的测试机构测试。检测机构收到样品后，应从样品中进行核酸提取，核酸提取试剂应使用经批准的《产品规范》规定的核酸提取试剂盒。

病毒RNA需要首先转录成cDNA，然后扩增检测。PCR扩增和检测应使用批准的产品规范中规定的荧光定量PCR仪。通过荧光定量PCR获得的样本Ct值，可以判断患者样本是否含有新型冠状病毒。

(1)新型冠状病毒定量检测方法扩展阅读：

目前临床核酸检测主要采用咽喉拭子检测。步骤是让被测者用淡盐水漱口，去除口腔中的细菌，然后将标签贴在标本容器上。

通知检查员咽拭子培养的目的和方法，点燃酒精灯，检查人员收取的张开嘴巴，头发啊，完全暴露的喉咙，培养管长消毒棉签轻轻动作敏感和擦两边的腭扁桃体拱门和咽分泌物，抽样已经完成，在试管口在酒精灯火焰消毒，然后插入试管擦洗，插入后及时检验。

核酸检测是目前诊断病原体最重要的依据，是诊断病原体的重要依据。例如，对于目前COVID－19的检测，病毒核酸检测仍是诊断的金标准。

‘贰’ 核酸检测是怎样检测的新冠病毒核酸检测的原理是什么

除朊病毒外的所有生物都含有核酸，核酸包括脱氧核糖核酸（DNA)和核糖核酸（RNA)。新型冠状病毒是一种只含有核糖核酸的病毒。在新冠病毒出现后，我国科学家在短时间内完成了对新冠病毒的全基因组序列的分析。在核酸检测过程中，如果在患者样本中发现新型冠状病毒特殊的核酸序列，则说明该患者可能感染新型冠状病毒。

在临床核酸检测中，首先需要根据试剂盒的样本要求进行样本的收集。样本类型主要包括咽拭子，鼻拭子，痰液，支气管灌洗液，肺泡灌洗液等。考虑到利于操作等多种因素，核酸检测样本多为鼻拭子。鼻拭子和口咽拭子的提取方法如下：

用一根较长的棉签插入鼻孔，通过鼻腔取鼻咽后部的分泌物；口咽拭子则是从口腔进入，擦拭扁桃体和咽隐窝附近的分泌物。

核酸检测全程时间比较短，无创口，高效快速。检测完就可以离开，回去等待结果就好。考虑到新型冠状病毒 感染症状的特殊性，有条件以及所处地区有要求的人要积极配合完成核酸检测。

‘叁’ 核酸检测方法

核酸检测是确认新型冠状病毒感染的重要手段。首先，采集样本时，常用的类型有咽拭子、鼻拭子、痰液、支气管灌洗液和肺泡灌洗液，需要根据试剂盒说明书中的具体要求进行操作。

采集的样本需尽快处理，对于需要运输的样本，应按说明书低温封装并送至专门的检测机构。检测机构会使用批准的核酸提取试剂盒提取病毒RNA。随后，通过逆转录将病毒RNA转化为cDNA，再利用荧光定量PCR技术进行扩增检测。PCR扩增后，通过观察荧光Ct值来判断样本中是否存在新型冠状病毒的核酸序列。

检测的原理在于，新型冠状病毒仅含RNA，其特异性RNA序列是其识别标志。我国科学家通过全基因组序列解析，确认了这些特异序列。临床检测中，如果发现患者样本中含有与新型冠状病毒特有的核酸序列，就可能表明患者感染了该病毒。

以上是核酸检测的基本流程，这一技术对于疫情的诊断和控制至关重要。

‘肆’ 新冠状病毒怎么检验

可以告知下班主任，然后尽快去做核酸检测，是可以查出来的。

新冠病毒的核酸检测，首先是进行标本采集，之后进行实验室检测，省疾控中心病毒病预防控制所的实验室对于新冠病毒的核酸检测是依据国家方案，采用的方法是实时荧光RT-PCR。采用这种方法，半个小时是不可能的，需要2~4小时左右。

原理

检测新型冠状病毒特异序列的方法最常见的是荧光定量PCR（聚合酶链式反应）。因PCR反应模板仅为DNA，因此在进行PCR反应前，应将新型冠状病毒核酸（RNA）逆转录为DNA。

在PCR反应体系中，包含一对特异性引物以及一个Taqman探针，该探针为一段特异性寡核苷酸序列，两端分别标记了报告荧光基团和淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；如反应体系存在靶序列，PCR反应时探针与模板结合。

DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性将探针酶切降解，报告基团与淬灭基团分离，发出荧光。每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子产生。

荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数（Ct值）与病毒核酸浓度有关，病毒核酸浓度越高， Ct值越小。不同生产企业的产品会依据自身产品的性能确定本产品的阳性判断值。

‘伍’ 核酸检测是怎么做的具体是检测什么东西

核酸检测需要去正规的医院或者防疫中心进行检测。

检测步骤：

1、首先，核酸检测盒子，也就是现在用于新冠状病毒检测的方式，这个盒子中主要检测“法宝”采用咽拭子。用咽拭子擦拭咽后壁及双侧咽扁桃体处各5－10次，且不断旋转拭子。

2、医务人员进行留样，将拭子头浸入细胞保存液中，折断尾部后立即旋紧管盖子。

3、保存，将样本管放入密封袋中及时送检，而送检过程中需要严格的运输环境，2－8摄氏度保存。

4、操作核酸提取（反应管理），将灭活病毒后的样本进行核酸提取，用于后续检测。

5、荧光PCR核酸检测，也就是．上机器检测，将提取物进行荧光PCR扩曾反应，需要70－－80分钟。

核酸检测就是通过检测荧光信号的累积，来确定样本中是否有相应的基因核酸。目前核酸检测试剂盒，多数采用荧光定量PCR方法。检测原理就是，以独特的基因序列，为检测靶标，通过PCR扩增，使我们选择的这段靶标DNA序列指数级增加，每一个扩增出来的DNA序列，都可与我们预先加入的一段荧光标记探针结合，产生荧光信号，扩增出来的靶基因越多，累积的荧光信号就越强。如果没有靶基因扩增，因此就检测不到荧光信号增强。核酸检测试剂盒的组分中，检测引物和探针最为关键。灵敏特异的扩增引物，对检测结果的准确，与否发挥着至关重要的作用。

‘陆’ 核酸含量的测定方法及原理都有哪些

核酸检测的主要原理其实是反转录和聚合酶链式扩增反应。也叫做RT-PCR。目前对新型冠状病毒进行的核酸检测也主要采用此种方式。简单来说就是采取患者鼻咽拭子、痰和其他下呼吸道分泌物、血液、粪便，检测人员通过。核酸提取试剂盒提取患者标本里边儿的核酸，然后把提取到的核酸放进检测试剂中进行复制扩增。然后再根据检测结果进行判断如果是阴性代表没有感染，如果是阳性代表有感染。目前对新型冠状病毒核酸检测会存在假阴性的可能，所以可以选择多次测量。如果连续两次核酸检测为阴性，同时没有临床症状可以排除感染，并且对已经感染了新型冠状病毒肺炎的患者，如果连续两次检测核酸为阴性，注意间隔时间必须大于一天，同时临床症状缓解，影像学好转也可以解除隔离。

‘柒’ 核酸检测具体步骤

1、核酸提取使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解。DNA应置于-20℃保存，RNA和需长期保存的DNA应置于-80℃保存。

2、逆转录合成cDNA。逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs、逆转录酶、RNA酶抑制剂、DTT、缓冲液和适量无RNA/DNA酶的超纯水以及RNA模板。在扩增仪或水浴箱中，在规定的温度和时间下进行逆转录反应。

3、PCR扩增反应PCR反应需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶、缓冲液、和适量无RNA/DNA酶超纯水、以及模板。在扩增仪中，按照设定的程序进行扩增。使用二次扩增的套式PCR扩增方法。

4、扩增产物定性分析；扩增产物常用分析方法是琼脂糖凝胶电泳法，与分子量标准比较，判断扩增片段是否在预期的戚粗分子量范围内。其它扩增产物分析方法还有限制性内切酶酶切分析、特异性探针杂交分析以及DNA序列分析等。

5、结果判定和完成报告单：每一次检测需同时做两个阳性对照、两个阴性对照，只有阳性对照扩增出预期的片段、阴性对照没有扩增出任何片段、双份平行样品结果一致的情况下实验才成立，可以作出核酸阳性或阴性反应结果的判定。

(7)新型冠状病毒定量检测方法扩展阅读：

检测新型冠状病毒特异序列的方法最常见的是荧光定量PCR。因PCR反应模板仅为DNA，因此在进行PCR反应前，应将新型冠状病毒核酸逆转录为DNA。在PCR反应体系中，

包含一对特异性引物以及一个Taqman探针，该探针为一段特异性寡核苷酸序列，两端分别标记了报告荧光基团和淬灭档仔态荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信行源号被淬灭基团吸收；

如反应体系存在靶序列，PCR反应时探针与模板结合，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性将探针酶切降解，报告基团与淬灭基团分离，发出荧光。

每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子产生。荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数与病毒核酸浓度有关，病毒核酸浓度越高，Ct值越小。不同生产企业的产品会依据自身产品的性能确定本产品的阳性判断值。