⑴ 代谢组学用色谱柱分离出的物质怎么检测其结构进行pca分析
靶向代谢组学新技术，区别于传统的非定向代谢组学，具有如下优势：
1.样品种类多：生物流体（血液、尿、唾液、肠道微生物）、环境样品、细胞、动植物组织、污水、药品、食品。
2.化合物涵盖广：包括脂类、维生素、核苷酸、神经递质等700种代谢产物，涵盖所有主要代谢途径。
3.分析时间短：我们的方法能在30min同时测定并准确鉴定出700种化合物。
4.复杂的数据处理：专业的数据处理方法和软件，能对所得数据进行PLS-DA,PCA,ANOVA,VIP,Biomarker等分析。
⑵ 做代谢组学检测的血液样本怎么采集与前处理
采集：
由于生物样本通常采用组内平行样本，不可避免的会由于时间、环境等因素产生“个体差异”，所以在采集动物血液时需要使用麻醉剂以减少采血过程中动物的疼痛感、不适感、创伤性，以减小应激反应造成的代谢物的变化、尽量缩短采集时间、保持一致的采集部位等细节问题；另外也考虑到样本采集或制备的原则和易实现性，操作应具有简便性和可重现性。
从生物体内采集出的血液首先会收集到专用容器，如动物实验使用注射器取血后可以直接存储在EP管内或采血管中，但若是从医院检验科采集的血液会首先存储在专用的真空采血管内，管内分别含有不同种类的抗凝剂、促凝剂等成分，适用于不同检测项目，例如血清和血浆的生化试验、免疫试验、凝血试验、红细胞沉降率试验、血常规检测、血糖检测等。常用的抗凝剂有EDTA、柠檬酸钠、肝素钠、肝素锂，这些成分在与血液混合时不可避免地会产生基质效应，如促进或抑制血液中的细胞代谢、酶代谢，造成血液中小分子的种类和含量变化。有学者在血液与抗凝剂/促凝剂的相互作用方面进行了研究，认为肝素钠相比于其他抗凝剂，与血液混合后引起的基质效应较弱，产生的杂质较少，并且也满足重现性要求，在代谢组学研究中若使用气质联用或高分辨的液质联用作为主要分析技术，建议选择含有肝素钠作为抗凝剂的采血管储存离体血液。
前处理：
血液中含有血细胞，在采血后血细胞仍有短时间的存活，所以在采集血液样本后需要尽快分离血细胞，例如高速离心可以将微小杂质及血细胞沉淀，减少离体血细胞的代谢造成的影响。若不需要第一时间进行分析，则应该尽快分装，并储存在-80℃生物低温冰箱中。从微观角度来说，借鉴化学反应速率常数随温度变化关系公式（阿伦尼乌斯公式），生物样本的代谢活动与样本所处温度成正相关，在-80℃或液氮（-196℃）这种极低温度下，血液中的酶或其他活性物质的活动才会减弱或停止，同时样本中的水以晶体形式存在，减小了流动性，分子的传输性极大减弱，避免样本变质或分解代谢，可保存数月数年。
血液样本的前处理相比于尿液等其他类型的体液样本，过程更多也更细致一些。原因是血液中含有的成分十分复杂，不同种类的化合物极性千差万别，且存在种类较多、丰度较高的蛋白质成分，通常采用一定比例的有机溶剂进行涡旋震荡萃取（有机溶剂沉淀法），使极性和非极性小分子物质充分溶解在溶剂中，经高速离心后得到的上清液和下相为小分子萃取液，沉淀物质为蛋白及杂质成分。广泛使用的溶剂包括甲醇、水、乙腈，其他如丙酮、异丙醇等等低极性和高极性的溶剂需要根据具体实验需求而单独定制设计。
总体而言，血液样本的采集与前处理看似简单，但过程中包含大量细节考虑与操作，应尽可能标准化，但一种方法不可能适用于所有实验，需要围绕实验目的进行充分的个性化实验设计，样本的采集和前处理遵循易实现性、易重现性、多组分保留等原则，在生物样本的来源、采集、前处理等源头把关，保障实验最终数据与结果的可靠性，经得起验证。
⑶ 用放射性同位素标记法为什么能追踪细胞内物质代谢途径
用放射性同位素标记法为什么能追踪细胞内物质代谢途径
同位素示踪法（isotopic tracer method）是利用放射性核素作为示踪剂对研究对象进行标记的微量分析方法,示踪实验的创建者是Hevesy.Hevesy于1923年首先用天然放射性212Pb研究铅盐在豆科植物内的分布和转移.继后Jolit和Curie于1934年发现了人工放射性,以及其后生产方法的建立（加速器、反应堆等）,为放射性同位素示踪法的更快的发展和广泛应用提供了基本的条件和有力的保障.
一、同位素示踪法基本原理和特点
同位素示踪所利用的放射性核素（或稳定性核素）及它们的化合物,与自然界存在的相应普通元素及其化合物之间的化学性质和生物学性质是相同的,只是具有不同的核物理性质.因此,就可以用同位素作为一种标记,制成含有同位素的标记化合物（如标记食物,药物和代谢物质等）代替相应的非标记化合物.利用放射性同位素不断地放出特征射线的核物理性质,就可以用核探测器随时追踪它在体内或体外的位置、数量及其转变等,稳定性同位素虽然不释放射线,但可以利用它与普通相应同位素的质量之差,通过质谱仪,气相层析仪,核磁共振等质量分析仪器来测定.放射性同位素和稳定性同位素都可作为示踪剂（tracer）,但是,稳定性同位素作为示踪剂其灵敏度较低,可获得的种类少,价格较昂贵,其应用范围受到限制；而用放射性同位素作为示踪剂不仅灵敏度,测量方法简便易行,能准确地定量,准确地定位及符合所研究对象的生理条件等特点：
1.灵敏度高
放射性示踪法可测到10-14－10-18克水平,即可以从1015个非放射性原子中检出一个放射性原子.它比目前较敏感的重量分析天平要敏感108-107倍,而迄今最准确的化学分析法很难测定到10-12克水平.
2.方法简便
放射性测定不受其它非放射性物质的干扰,可以省略许多复杂的物质分离步骤,体内示踪时,可以利用某些放射性同位素释放出穿透力强的r射线,在体外测量而获得结果,这就大大简化了实验过程,做到非破坏性分析,随着液体闪烁计数的发展,14C和3H等发射软β射线的放射性同位素在医学及生物学实验中得到越来越广泛的应用.
3.定位定量准确
放射性同位素示踪法能准确定量地测定代谢物质的转移和转变,与某些形态学技术相结合（如病理组织切片技术,电子显微镜技术等）,可以确定放射性示踪剂在组织器官中的定量分布,并且对组织器官的定位准确度可达细胞水平、亚细胞水平乃至分子水平.
4.符合生理条件
在放射性同位素实验中,所引用的放射性标记化合物的化学量是极微量的,它对体内原有的相应物质的重量改变是微不足道的,体内生理过程仍保持正常的平衡状态,获得的分析结果符合生理条件,更能反映客观存在的事物本质. 放射性同位素示踪法的优点如上所述,但也存在一些缺陷,如从事放射性同位素工作的人员要受一定的专门训练,要具备相应的安全防护措施和条件,在目前个别元素（如氧、氮等）还没有合适的放射性同位素等等.在作示踪实验时,还必须注意到示踪剂的同位素效应和放射效应问题.所谓同位素效应是指放射性同位素（或是稳定性同位素）与相应的普通元素之间存在着化学性质上的微小差异所引起的个别性质上的明显区别,对于轻元素而言,同位素效应比较严重.因为同位素之间的质量判别是倍增的,如3H质量是1H的三倍,2H是1H的两倍,当用氚水（3H2O）作示踪剂时,它在普通H2O中的含量不能过大,否则会使水的物理常数、对细胞膜的渗透及细胞质粘性等都会发生改变.但在一般的示踪实验中,由同位素效应引起的误差,常在实验误差内,可忽略不计.放射性同位素释放的射线利于追踪测量,但射线对生物体的作用达到一定剂量时,会改变机体的生理状态,这就是放射性同位素的辐射效应,因此放射性同位素的用量应小于安全剂量,严格控制在生物机体所能允许的范围之内,以免实验对象受辐射损伤,而得错误的结果.
⑷ 研究代谢途径的互补测验是什么
需要更具体点，因为生物中的互补实验有好几个，
比如酵母双杂交的互补实验
又如蓝白斑的互补实验
又如双分子荧光互补分析技术等等 双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation，BiFC)分析技术，是由Hu等在2002年最先报道的一种直观、快速地判断目标蛋白在活细胞中的定位和相互作用的新技术。该技术巧妙地将荧光蛋白分子的两个互补片段分别与目标蛋白融合表达，如果荧光蛋白活性恢复则表明两目标蛋白发生了相互作用.其后发展出的多色荧光互补技术(multicolor BiFC)，不仅能同时检测到多种蛋白质复合体的形成，还能够对不同蛋白质间产生相互作用的强弱进行比较。目前，该技术已用于转录因子，G蛋白βγ亚基的二聚体形式，不同蛋白质间产生相互作用强弱的比较以及蛋白质泛素化等方面的研究工作上。该方法利用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)及其突变体的特性作为报告基因，将荧光蛋白分割成两个不具有荧光活性的分子片段，再分别与目标蛋白连接。如果两个目标蛋白因为有相互作用而靠近，就使得荧光蛋白的两个分子片段在空间上相互靠近，重新形成活性的荧光基团而发出荧光。在荧光显微镜下，就能直接观察到两目标蛋白是否具有相互作用，并且在最接近活细胞生理状态的条件下观察到其相互作用发生的时间、位置、强弱、所形成蛋白质复合体的稳定性，以及细胞信号分子对其相互作用的影响等，这些信息对研究蛋白质相互作用有一定意义。