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常用的pcr检测方法种类

发布时间:2024-09-16 15:55:27

A. pcr产物有无鉴定常用的方法是

PCR产物的鉴定常用的方法主要有几种。
1、单碱基改变分析,通过分析PCR产物的序列变化,哗郑来鉴定特定的基因突变。
2、凝胶电泳,将PCR产物进行凝胶电泳,以检测其大小。
3、南方杂交,PCR产物可以通过南方杂交技术来鉴定。
4、聚合酶链反应,通过比较多个PCR产物的败旅聚合酶链反应PCR,来鉴定察芦凳特定的基因。
5、序列分析,通过高通量测序技术来分析PCR产物的序列,以鉴定特定的基因。

B. PCR产物的检测方法哪些都有什么原理

1.琼脂糖凝胶电泳 同时点分子量marker,根据marker条带判断产物分子量大小,从而大致判断是不是你要的
2.酶切 已知你产物的序列,看上面有什么酶切位点,用一个酶或者两个酶切断,看与理论预测的条带数目和大小是否一致。一般检测有以上两步就行了,如果需要知道确切的需要进行3
3.测序 连接到pMD-18t 载体上,转到大肠杆菌中。拿到公司去测序,测序结果通过gene bank比对看与哪个基因一致,这种方法最准确
4.表达 pcr产物连到真核或者原核表达载体上,适宜条件表达出来以后的蛋白做质谱分析,看与理论产物表达的蛋白是否有一致的片段

C. PCR产物的检测方法有哪些都有什么原理

1.琼脂糖凝胶电泳
同时点分子量marker,根据marker条带判断产物分子量大小,从而大致判断是不是你要的
2.酶切
已知你产物的序列,看上面有什么酶切位点,用一个酶或者两个酶切断,看与理论预测的条带数目和大小是否一致。一般检测有以上两步就行了,如果需要知道确切的需要进行3
3.测序
连接到pMD-18t
载体上,转到大肠杆菌中。拿到公司去测序,测序结果通过gene
bank比对看与哪个基因一致,这种方法最准确
4.表达
pcr产物连到真核或者原核表达载体上,适宜条件表达出来以后的蛋白做质谱分析,看与理论产物表达的蛋白是否有一致的片段

D. 定量PCR的检测模式

PCR过程的监测有多种检测模式。最常用的有三种检测模式:
⑴R Green I 检测模式。温度循环为94—55—72°C三步法,只有引物,无探针,荧光染料镶嵌在双股螺旋链中间。通过对特定方向的强荧光检测获得信号,这种试剂检测模式易产生非特异信号,且本底光较大。
⑵解探针模式(Taqman)Hydrolysis Probe。温度循环为94—60°C二步法,不仅有引物,还有另外一个特异针对扩增模板的探针在引物对之间。在探针相邻两个碱基上分别结合两个荧光染料,一个染料接受激发光得到的能量传给了第二个染料,接受能量的第二个染料通过发射特征光子回到稳定态。当Taq酶在60°C延伸扩增链时,遇到探针,利用Taq酶5`—3`外切酶活性将探针水解成单个碱基,单个碱基之间距离较远,第一个染料的能量无法传给第二个染料,只好通过发射特征光子回到稳定态,通过对溶液中第一个染料的荧光检测获得信号。这种试剂检测模式增加了检测信号的特异性,但是由于利用了Taq酶5`—3`外切酶活性,一般试剂厂家只给Taq酶的聚合酶活性定标,没有同时给Taq酶5`—3`外切酶活性定标,不同批号试剂之间会给定量带来差异。另外对探针的熔点温度(Tm)仅要求其高于60°C,这就使不同试剂盒之间的特异性参差不齐,而且无法做质控检测。
⑶杂交探针(Hybridization Probes)模式。温度循环为94—55—72°C三步法,有引物,二个特异针对扩增模板相邻的探针在引物对之间,在一个探针3`碱基上结合一个荧光染料,在另一个探针5`碱基上结合第二个荧光染料。在55°C时,两个探针都刚好接合在模板上,第一个染料接受激发光得到的能量传给了第二个染料,接受能量的第二个染料通过发射特征光子回到稳定态,通过对结合在扩增模板上双探针中第二个染料的荧光检测获得信号。这种试剂检测模式中荧光信号与特定杂交温度相关,探针的浓度始终保持不变,因此可以在扩增后检测熔解曲线作为信号的特异性质控。另外这种试剂检测模式可以用于点突变检测。

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