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抗生素的检测方法

发布时间:2024-08-18 19:53:20

⑴ 检查牛奶中抗生素的药品在哪可以买到

1、相关的药店或者网上都可以找得到的。
2、目前抗生素的检测方法,按照检测原理和使用的仪器可分微生物法、免疫法、理化仪器法等3类:
(1)微生物测定原理是根据抗生素对微生物的生理机能、代谢的抑制作用,来定性或定量确定样品中抗微生物药物残留。微生物法的优点是费用低,一般实验室都能操作。缺点是时间长、显色状态判断通过肉眼辨别、易产生误差、对微红色者无法做出准确判断、操作复杂。

(2)免疫分析技术最突出的优点是操作简单,速度快、分析成本低。免疫测定法取样量小,前处理简单、容量大,仪器化程度低,检测牛奶的灵敏度高。是目前奶牛场和牛奶公司使用最广泛、快速、灵敏的检测抗生素残留的方法。目前部分抗生素已经建立了免疫测定法,如磺胺二甲基嘧啶、氯霉素、沙拉沙星、链霉素、四环素、莫能菌素等。该法适用于现场监控和大量样品的筛选,具有广阔的应用前景。但是免疫法直接测定也存在样本信息量太少,假阳性和理化分析技术选择性低等不足,当样品中含有与某类抗生素结构相似的化合物时,可能出现免疫交叉反应而呈现假阳性结果。
(3)最常用的理化仪器分析方法是高效液相色谱和质谱联用技术。高效液相色谱法(HPLC)是目前广泛应用的一种理化检测方法,分离速度快、效率高和操作可自动化,已成为大多数抗生素残留的常规分析方法。由于奶样品中药物残留量少,背景干扰往往很严重,因此一般都通过柱前衍生反应来提高紫外检测器检测残留的灵敏度。目前,HPLC方法已用于红霉素、庆大霉素、羧苄青霉素和吩羧青霉素残留的测定。

⑵ 请教检测食物含抗生素的简单方法(我是老师想做这方面实验)

牛奶中抗生素残留的几种常用检测方法
随着奶牛饲养业的发展,抗生素在预防和治疗奶牛疾病方面得到广泛的应用。生鲜牛奶中抗生素的来源主要是:第一,治疗泌乳期病牛时使用的抗生素会从奶牛体内移行到乳腺残留进入牛奶中,资料表明治疗后的奶牛,其挤出的牛奶5天内都有抗生素残留;其二,为了预防奶牛疾病并提高产量,在奶牛饲料中添加抗生素也会造成牛奶中抗生素的残留;第三,由于牧场管理不善,挤奶、储奶没有严格的卫生制度和配套的设施,人为添加或造成牛奶抗生素的污染。
牛奶中含有抗生素,不仅对人的健康造成很大的危害,而且对乳品加工企业带来经济损失(因无法生成酸奶和奶酪)。因此必须严格控制牛奶中抗生素残留,除了要做好科学饲养、精心管理;正确挤奶和预防疾病外,还要规范抗生素的使用,按国标中有关规定,用药后的奶牛5天后所产的牛奶才可作为原料乳,并且要检测其残留。世界粮农组织(FAO)、世界卫生组织(WHO)、欧盟(EC)及美国的食品和药品管理局(FDA)等对食品中抗生素最大残留量都有明确的规定,我国也有鲜奶中抗生素残留量检验标准(GB4689.27—94)。
目前,鲜奶中抗生素残留的检测方法大致分为三类:生物测定法(微生物测定法、放射受体测定法)、免疫法(放射免疫法、荧光免疫法、酶联免疫法)、理化分析法(波谱法、色谱及联用技术)。下面介绍几种常用的牛奶中抗生素残留检测方法。
TTC法
TTC法是我国鲜奶中抗生素残留量检验标准(GB4689.27—94)的检测法,属生物检测法。其测定原理基于抗生素对微生物的抑制作用。如果牛奶中含有抗生素,则加入菌种(嗜热链球菌)经培育2.5~3小时后,加入TTC指示剂(三苯基四氮唑)不发生还原反应,所以样品呈无色状态;如果牛奶中不含抗生素,则样品呈红色.这样实验后样品颜色不变的为阳性,样品染成红色的为阴性。
TTC法的具体操作步骤:
1.菌液制备:将单菌种(嗜热链球菌)以脱脂乳为培养基,在36±1℃培养箱中培养15小时后,再以脱脂乳以至于1:1稀释待用;
2.取待检样液9mL,在80℃水浴加热5分钟后冷却到37℃以下,加活菌液1mL,在36℃±1℃水浴2小时,加入4%的TTC指示剂0.3mL, 36℃±1℃水浴培养30分钟;
3.若样液颜色不变为阳性,呈红色为阴性;若阳性的样液,再置于水浴中培养30分钟,不显色的为阳性,呈红色为阴性.
TTC法测定各种抗生素的灵敏度为:青霉素:4ppb,链霉素:500ppb,庆大霉素:400ppb,卡那霉素:5000ppb.它具有费用低,易开展的优点;缺点是耗时长,要求操作人员需有一定专业知识且实验过程中菌液的制备、水浴过程控制都要求严格遵守操作规程,否则易出现假阳性,以致出现检验结果的不稳定性。
Delvotest? sp法(戴尔沃检测法)
该法最早在香港传到广东的,其使用是基于20世纪80年代初香港要求广东出口的生奶必须“无抗”且要求采用Delvotest法检测。该方法也是生物测定法,其试剂是由荷兰DSM公司生产并由AOAC认证。原理是利用微生物—嗜热芽胞菌在64℃条件下培养2.5~3小时后会产酸,酸引起指示剂BCP(溴甲酚紫)变为黄色;若牛奶样品中不含抗生素,培养后样品呈黄色,如样品中含有抗生素, 嗜热芽胞菌生长受到抑制而无法产酸,指示剂将不变色.
Delvotest? sp 法的操作步骤:
1.以无菌操作将一片营养药片夹放入小试管内;
2.用微量移液管将0.1mL牛奶样品注入小试管内;
3.把小试管放入已预热至64℃的水浴箱或恒温器中培养;
4).定时3小时取出观察颜色变化.如果底部2/3的固体介质是黄色,则为阴性, 如果底部2/3的固体介质是紫色,则为阳性.
Delvotest? sp 法具有广谱性,可检测到?-内酰胺类抗生素在内的更多抗生素,如磺胺类、四环素类、大环内酯类、氨基糖苷类、氯霉素等,其中对青霉素和磺胺类抗生素特别灵敏. 其灵敏度为:青霉素:3ppb,链霉素:300ppb,庆大霉素:400ppb,卡那霉素:2500ppb。Delvotest? sp 法集操作方便,严格实用,容易判断,结果可靠,费用适中等优点;但也易出现假阳性,实验证明:当牛奶样品中添加微生物防腐剂(如乳酸链球菌素—Nisn)或样品中有足够的洗涤剂残留时,便可影响嗜热芽胞菌生长而使实验为阳性。
Snap?法
该方法是酶联免疫法,由美国IDEXX公司生产其检测分析仪及其试剂盒,均获得AOAC认证,它利用了竟争酶联免疫技术。其基本原理是用特异性抗体将固相载体激活,加入含待测抗原的溶液和一定量的酶标记抗原在45℃±5℃共同保温,使样品内的抗生素与内置抗生素标志物竟争与固定的抗体结合,然后进行洗涤和显色,内置抗生素标志物与固定的抗体结合形成的复合体,通过酶的作用分解可形成有色物质,通过测定色度并与参照物对照,就可以确定结果是阳性或阴性。
Snap?法操作步骤:
1.加入乳样于样品管中,摇匀,加热样品和检测板5分钟;
2.加入乳样于样品孔中,当激活圆环开始退却时,按Snap键;
3.反应4分钟,由Snap?读数仪读取并打印结果.检测读数小于1.05时判为阴性,大于1.05时判为阳性.
Snap?法是一种将酶化学反应的敏感性和抗原抗体免疫反应的特异性相结合的方法,其敏感性和特异性好,检测的灵敏度以普遍使用的?-内酰胺类计:青霉素:5ppb,阿莫西林:10ppb,氨苄西林:10ppb,头孢西林:8ppb.其他抗生素如四环素等的检测,则需购买相应的试剂来检测. Snap?法检测结果快速准确, 9分钟内即可检测出牛奶中?-内酰胺类、四环素类、磺胺类等抗生素的残留含量,且有半定量的读数,可监控牧场用药的情况;检测仪器稳定性良好,结果重现性高,整个检测过程简单方便;但需购置专用仪器和试剂,成本较高。
高效液相色谱检测法
它是一种理化检测方法,是利用抗生素分子中的基团所具有的特殊反应来测定其含量.检测的过程采用了气相色谱理论,通过高压液相和高灵敏度的检测器,分离速度快、效率高和操作自动化。一般要经过样品的提取、脱蛋白、离心、层析柱净化、衍生化等步骤,能检测抗生素的具体含量,敏感性较高,但检测程序复杂,费用较高,需购买色谱仪等检测设备,不适合小型检验室。
传统的抗生素检测方法不少,有的操作烦琐,有的实验条件要求高,有的检验时间太长;这些不仅会给乳制品生产企业造成经济上和时间上的损失,而且检测结果常常会被原辅材料和人为操作等因素所影响.鉴于牛奶中抗生素残留是涉及人类健康的公共卫生问题,乳品企业及牧场应重视和加强检测工作,应用一些简单、快速和准确性高的方法来监控产品的质量,保证消费者的健康。
http://szddi.com/foodonline/newsdetail.asp?id=15933

反应原理
本产品主要是利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的基本原理来进行的。在整个反应当中,样品中氯霉素含量越多,反应呈色就越淡。反之,样品中氯霉素含量越少,则呈色越深。
试剂盒组成
1、微量测试孔:每条8孔,每板12条
2、氯霉素标准溶液:
0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35 ppb、4.05 ppb,1.5ml/瓶
3、10倍浓缩萃取稀释液:一瓶,30ml/瓶
4、10倍浓缩洗涤液:一瓶,30 ml /瓶
5、氯霉素酶标记物: 一瓶,8 ml/瓶
6、底物溶液:一瓶,12 ml/瓶
7、反应终止液:一瓶,13 ml/瓶
使用说明
A、注意事项
1、使用前先将氯霉素标准溶液6瓶,浓缩萃取稀释液,浓缩洗涤液,酶标记物,底物溶液及微量测试孔条置于室温下,回温30分钟。
2、原倍萃取稀释液及洗涤液配制
用蒸馏水将10倍浓缩萃取稀释液及浓缩洗涤液分别以1: 9的比例稀释(即1mL浓缩液+9mL蒸馏水),即可作为样品萃取稀释液与微孔板清洗液。
3、回温后,取出所需微量测试孔条,将剩余板条立即放回铝箔袋中用胶带封好,置于4oC保存。
B、样品制备
1.待测物为生乳,则依以下方法进行处理 (5倍稀释)
取100ul待测生乳加入400ul萃取稀释液,振荡混合后备用。
2.待测物为蜂蜜,则依以下方法进行处理
a.取2g蜂蜜、4ml蒸馏水与2ml 乙酸乙酯置入离心管中,震荡约5分钟,使其充分混合均匀。
b.离心10分钟(3000rpm),取0.5ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中,于50℃下氮气吹干(温度请勿超过50oC)。
c.加入0.5ml萃取稀释液,震荡约10秒钟后备用。
3. 待测物为血清、则依以下方法进行处理
a.抽取待检动物血液,离心或静置取其较透明之上层液(血清层)使用,注意不要有溶血。
b.将3ml血清加入离心管中,再加入6ml乙酸乙酯,震荡混合约30秒。
c.离心10分钟(3000rpm),取2ml上层液(乙酸乙酯)至玻璃管中,于50oC下氮气吹干。
d.于此玻璃管中加入正己烷2ml,先将残余物完全溶解后,再加入1 ml萃取稀释液,震荡约30秒钟。
e. 离心10分钟(3000 rpm),用吸管吸去上层液(正己烷) 及中间乳化层部分,弃掉。再吸取下层液(水层)备用。
f.若有乳化现象,请先将大部分上层液(正己烷)取出后,再将玻璃管置入80oC水中,隔水加热约5~10分钟,可改善乳化情形。
4. 待测物为鸡肉或鱼、虾,则依以下方法进行处理
a.将3克样品剪碎后放入50 ml离心管中,再加入6ml乙酸乙酯,并以均质机均质约1分钟,再震荡约30秒。
b.离心10分钟(3000rpm),取2ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中,于50oC下氮气吹干。
c.于此玻璃管中加入正己烷2 ml,先将残余物完全溶解后(若未能完全溶解,可能会导致回收率降低),再加入1 ml萃取稀释液,震荡约30秒钟。
d.离心10分钟(3000 rpm),用吸管吸去上层液(正己烷) 及中间乳化层部分,弃掉。再吸取下层液(水层)备用。
e.若有乳化现象,请先将大部分上层液(正己烷)取出后,再将玻璃管置入80oC水中,隔水加热约5~10分钟,可改善乳化情形。待测物为血清、则依以下方法进行处理
5.待测物为内脏(肝、心等),则依以下方法进行处理(5倍稀释)
同上述步骤a~d,但下层液吸出后,再以萃取稀释液稀释5倍(即下层液50ul加萃取稀释液200ml)。
6.待测物为饲料,则依以下方法进行处理(10倍稀释)
同上述步骤a~d,但下层液吸出后,再以萃取稀释液稀释10倍(即下层液30ul加萃取稀释液270ml)。
C、操作步骤
本产品的酶标记物与氯霉素标准溶液均直接使用,无需再稀释。
1、于适当微孔中分别加入100mL标准溶液(0,0.05,0.15,0.45,1.35和4.05ppb)。
2、在另外的微孔中加入100mL 已完成前处理的样品溶液。
3、再于每一微孔中另再加入50mL酶标记物。
4、轻敲盘子四周,使其充分混合后于室温下避光静置温育1小时。
5、将微孔中的反应液甩掉,再将洗液加满每一微孔后甩掉,重复洗3次。
6、最后一次甩掉后,在吸水纸上拍干。
7、于每一微孔中加入底物溶液100mL后,轻敲盘子四周,使其充分混合。
8、于室温下避光静置温育20分钟。
9、于每一微孔中加入100mL反应终止液。
10、用酶标仪于波长450nm下判读。
D、判定
1. 计算B/B0值。用样品或标准液吸光度值(B)除以零标准吸光度值(B0)再乘以100%。
2. 以B/B0值为纵坐标,以标样浓度的对数值为横坐标,做标准半对数曲线。
3. 根据每个样品的B/B0值就可从曲线上读出相对应样品的浓度。
4. 由于样品经过了预先稀释,因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。
E、标准曲线

F、灵敏度
氯霉素试剂检测盒的平均检测下限为 0.05ppb,此浓度之吸光值与阴性标准溶液(0ppb)之吸光值有明显的差异。
G、 特异性
针对以下抗生素进行交叉反应之测试,结果如下:
Chloramphenicol =100%
Chloramphenicol(free base) <0.1%
Gentamycin <0.1%
Tetracycline <0.1%
Penicillin G <0.1%
Sulfamethazine <0.1%
H、再现性
针对氯霉素检测试剂盒精密度测试,重复6次,所得不同浓度标准溶液的吸光值变异系数(%CV)如图2所示,显示氯霉素试剂盒有很高的再现性:

I、回收率
生乳(添加1.0ppb)104~117%
蜂蜜(添加0.3ppb)90~110%
虾及鱼肉(添加0.5ppb)95~110%
鸡肉(添加0.5ppb) 90~120%
血清(添加0.5ppb)100~120%
内脏(添加1.0ppb) 100~120%
饲料(添加2.0ppb)80~110%

氯霉素检测试剂盒
简介
氯霉素(Chloramphenicol)是一种广谱抗生素。由于其具有效果好以及价格低廉等优点,目前已被普遍应用于各类家禽、家畜、水产品及蜂制品的各种传染性疾病的治疗。然而氯霉素有其严重的副作用,它会抑制人体骨髓的造血功能,从而引起再生障碍性贫血和粒细胞缺乏症。目前,我国已禁止其使用。
我公司采用国内外先进的工艺与技术,研发出氯霉素ELISA检测试剂盒,简化了样品处理方式,使用简便,省时省力省钱,整个操作过程不到90分钟。本产品检测范围广(鸡肉、鱼、虾、蟹、牛奶、血清、肌肉、组织、饲料与蜂蜜等),回收率为80%-120%,灵敏度可达到0.05ppb,是各类企业及各级政府检测机构的理想产品。
简单
1. 样品提取方便快捷。
2. 90分钟得到结果。
3. 只需基本的实验室设备。
4. 操作人员只需最基本的实验知识。
准确
1. 结果重现性高。
2. 精确至0.05ppb。
3. 与其它抗体的交叉反应率极低。
技术支持
我们为用户提供最方便、快捷、周到的服务。
产品规格
包装:每包96孔
灵敏度: 0.05ppb
测试区间:0.05ppb-4.05ppb
检测时间:80分钟(提取后)
储存条件:2-8℃

http://www.practical-bio.com.cn/htm/procts_05.htm

如何检测牛奶中的抗生素

如果饮用含有抗生素的牛奶,可能会引起饮奶者出现过敏反应,长期饮用,还可能引起细菌的耐药性,造成人体肠道内菌群失调,抑制一些有益菌的生长。此外,含有抗生素残留的牛奶,可以抑制乳酸菌的生长繁殖,这样的牛奶就不能加工发酵乳制品。测定奶中残留抗生素常用TTC法,其原理和方法如下。
(1)原理 指示剂2,3,5-氯化三苯基四氯唑加入接种菌群的奶中进行培养,有抗生素,则奶不显色,因为细菌不繁殖,TTC指示剂不被还原;反之,则TTC还原显红色,说明奶中无抗生素存在。
(2)方法 取奶样9毫升注入试管内,于80℃水浴5分钟,冷却至37℃以下,加菌液1毫升,于37℃水浴中保温培养2小时。加TTC 0.3毫升(浓度为4%左右),于37℃水浴中继续培养30分钟,观察其颜色变化,如奶变红色,则为阴性;若奶仍为原色,则继续培养30分钟,进行第二次观察,仍为原色者,则为阳性;由淡红色→桃红色→红色为阴性。用此法检测各种抗生素的敏感度(指最低检测量)如下:青霉素0.004国际单位/毫升奶;链霉素0.5国际单位/毫升奶;庆大霉素0.4国际单位/毫升奶。
现在,已经开发出了抗生素快速测定仪,检测牛奶中的抗生素。

⑷ 乳品最好的抗生素检测方法是什么啊,急求!!

目前,鲜奶中抗生素残留的检测方法大致分为三类:生物测定法、免疫法、理化分析法。下面介绍几种常用的牛奶中抗生素检测方法。
(1)TTC法属生物检测法:
如果牛奶中含有抗生素,则加入菌种(嗜热链球菌)经培育2.5~3小时后,加入TTC指示剂(三苯基四氮唑)不发生还原反应,所以样品呈无色状态;如果牛奶中不含抗生素,则样品呈红色.
(2)戴尔沃检测法:
该法也是生物测定法,是利用微生物—嗜热芽胞菌在64℃条件下培养2.5~3小时后会产酸,酸引起指示剂BCP(溴甲酚紫)变为黄色;若牛奶样品中不含抗生素,培养后样品呈黄色,如样品中含有抗生素, 指示剂将不变色.
(3)Snap法
检测结果快速准确, 9分钟内即可检测出牛奶中B-内酰胺类、四环素类、磺胺类等抗生素的残留含量,且有半定量的读数,可监控牧场用药的情况;检测仪器稳定性良好,结果重现性高,整个检测过程简单方便;但需购置专用仪器和试剂,成本较高。
(4)高效液相色谱检测法
它是一种理化检测方法,一般要经过样品的提取、脱蛋白、离心、层析柱净化、衍生化等步骤,能检测抗生素的具体含量,敏感性较高,但检测程序复杂,费用较高,需购买色谱仪等检测设备,不适合小型检验室。
(5)纳米胶体金层析法
该方法是基于竞争法胶体金免疫层析技术,将检测液加入试纸卡上的样品孔,检测液中的抗生素与金标垫上的金标抗体结合形成复合物,若抗生素在检测液中浓度低于100ng/mL,未结合的金标抗体流到T区时,被固定在膜上的抗生素BSA偶联物结合,逐渐凝集成一条可见的T线;若抗生素浓度高于100ng/mL,金标抗体全部形成复合物,不会再与T线处抗生素BSA偶联物结合形成可见T线。未固定的复合物流过T区被C区的二抗捕获并形成可见的C线。C线出现则表明免疫层析发生,即试纸有效.结果解释
阴性:C线显色,T线肉眼可见,无论颜色深浅均判为阴性。
阳性:C线显色,T线不显色,判为阳性。
无效:C线不显色,无论T线是否显色,该试纸均判为无效。
保存和稳定性
4-30℃阴凉干燥处保存,不可冷冻,避免阳光直晒,生产日期起18个月内有效。
纳米胶体金层析法适用于样品的初筛,检测时间短,出结果速度快,且能在常温下保存18个月之久,操作简单,无需任何专业的技术,没有检测环境的需求不管是奶农还是奶站工作人员还是专业的检测人员,都可以方便使用。

对比的话最后这个方法好些(纳米胶体金层析法), 抗生素检测卡只需要9分钟就搞定价格还算不错给你个网址看看:
http://www.hzluheng.com/proctsshow.asp?did=645
我再补充一下,我可不是做广告啊!希望我的回答能对你有所帮助!

⑸ 抗生素微生物检定方法在药典哪部里

抗生素微生物检定管碟法在中国药典中的应用及操作要点
录入时间:2010-11-18 10:29:10 来源:青岛海博

抗生素微生物检定法可分为:(1)稀释法;(2)比浊法;(3)琼脂扩散法(管碟法和打孔法)。各国药典通常采用后两种方法测定抗生素的效价。
管碟法:利用抗生素在摊布特定试验菌的固体培养基内成球面形扩散,形成含一定浓度抗生素球形区,抑制了试验菌的繁殖而呈现出透明的抑菌圈。
此法系根据抗生素在一定浓度范围内,对数剂量与抑菌圈直径(面积)呈直线关系而设计,通过检测抗生素对微生物的抑制作用,比较标准品与供试品产生抑菌圈的大小,计算出供试品的效价。
原理:利用抗生素在固体培养基中的平面扩散作用,依据量反应平行线原理并采用交叉实验设计方法,在相同实验条件下通过比较标准品(已知效价)和供试品两者对所接种试验菌产生的抑菌圈(直径或面积)大小,来测定供试品效价的一种方法。
管碟法的操作步骤:
1、预试验:确定最佳的试验条件:调整试验菌的浓度、使用量、抗生素终浓度、培养基等,使抑菌圈的大小符合规定:一剂量法中心点的抑菌圈直径应在16~17.5mm,二剂量法高剂量浓度标准品溶液所致的抑菌圈直径在18~22mm,三剂量法中间剂量浓度标准品溶液所致的抑菌圈直径在15~18mm。
2、试验准备:双碟、钢管、毛细滴管、吸管的清洗及灭菌;容量瓶、定量吸管的清洗;培养基、缓冲液的准备、半无菌间的紫外消毒等。
3、双碟的制备:每只双碟加底层培养基约20ml,待培养基凝固后,将双碟放入35~37℃培养箱中,待用。
4、供试品、标准品溶液的制备:估计供试品的效价,根据试验要求设计供试品、标准品溶液稀释步骤,平行制备供试品、标准品相关剂量的溶液。
5、菌层的制备:注意菌层培养基温度;根据预试验确定加入菌层培养基的菌液量,注意制备菌层的速度和平整度。
6、滴加抗生素溶液:注意标准品、供试品高、低剂量溶液滴加顺序,保证滴加速度和加量的均匀一致。 7、双碟的培养:根据培养温度的要求在培养箱中进行培养,培养箱中水平碟放的双碟数以不超过三层

为宜。
8、抑菌圈的测量:抑菌圈测量仪的使用,每组试验双碟应在相同的测量参数下进行测量。手工测量:游标卡尺
9、结果的可靠性检验及效价测定:抑菌圈测量仪提供计算结果或手工计算结果。 操作要点
第一步一般应制成500或1000单位/毫升的溶液,以后逐步稀释至供试浓度的溶液,稀释步骤应为3~4步。
溶解:对于需用乙醇溶解的样品,由于溶解样品时所用乙醇量较大,加灭菌水后溶液放热,因此需充分摇匀后加灭菌水至接近容量瓶刻度,待冷至室温后再稀释至刻度。
标准品溶液与供试品溶液浓度的比值D应控制在±5%以内,以保证两者浓度的偏差在一定范围内。 试验菌的菌龄对抑菌圈有一定影响。故检定时应保持菌种及菌液的新鲜。
一般菌种一月转种一次,冰箱冷藏保存。对易变异的菌株,如藤黄微球菌等在制备菌悬液前进行单菌分离;其他菌株可半年分离一次。
试验菌传代最好不超过5次,以防止菌种老化变异。芽孢杆菌培养物用灭菌水洗下后,应在65℃加热30分钟,使菌体的菌龄一致,用革兰氏染色,应有芽孢85%以上。
加入菌悬液的体积,一般不少于0.3ml,并且不大于上层培养基体积的2%。如果加入菌悬液的体积过小,则在同次实验中,不同次加入菌悬液的体积相差较大,造成实验误差;如果加入菌悬液的体积过大,则会使上层培养基变稀,并且因菌悬液的温度较低,加至培养基中可能造成培养基结块,影响测定结果。对于加入菌悬液体积的控制,可通过调节菌悬液的浓度来实现。
在制备菌层培养基时,将菌液加入菌层培养基后,立即充分摇匀,但应避免产生气泡。
加入芽孢悬液时,菌层培养基的温度为65℃,对非芽孢悬液时,菌层培养基的温度一般为48~50℃。 放置孵箱培养时排放应不得超过三层,避免因培养温度不均匀而导致各双碟中抑菌圈大小不一。
抗生素原料药:不含辅料的药物制剂原料,一般其效价以纯度(u/mg或?g/mg)表示。检验时,可参考该品种的药品标准纯度限度规定或厂方提供的纯度估计效价,取样试验,如估计效价与实际效价相差较远时,即测定所得效价超出估计效价的±10%时,则重新估计效价,再做准确测定。

粉针剂:指注射用无菌粉末或冻干品,用西林瓶橡胶塞铝盖封装或熔封在安瓶内,一般测定其纯度(u/mg或?g/mg)或整瓶效价。
取装量差异项下的内容物,称取适量(50mg以上,根据标示量及平均装量折算估计效价,并按估计效价及量瓶体积计算取样量),置量瓶中,加标准中规定的溶剂溶解,稀释,测定,计算出1mg的效价单位数,再根据平均装量及标示量计算平均每瓶的百分含量。
水针剂(注射液):即抗生素的灭菌水溶液,标示量一般按每毫升含效价单位计。
效价测定时,量取平均装量项下的内容物或5~10支的内容物,混匀,用干燥的刻度吸管吸取一定量的供试品,将吸管外壁用滤纸拭净,再弃去多余的溶液,使供试品至吸管刻度,沿量瓶颈部内壁缓缓流入已盛有一定量溶剂(以免抗生素结晶析出)的量瓶内,混匀,继续加溶剂至刻度,摇匀,再量取适量稀释至规定的浓度。
素片、薄膜衣片:称取20片的总量,求出平均片重,研细混匀后,精密称取适量(约相当于1片的重量或根据标示量按平均片重及所用量瓶体积折算取样量),置量瓶中,用标准中规定的溶剂溶解,并稀释至刻度,摇匀。再量取适量稀释至规定浓度。
注意点:研磨时应注意环境干燥,可在干燥操作柜内操作,研磨要迅速,避免吸湿,因片剂内含辅料较多,辅料可能漂浮于溶液表面,稀释时量取供试溶液应读取辅料下层的溶液切面;如沉淀较多,须待其下沉后再量取上层液;有些辅料吸附抗生素,应加以注意。为节约供试品,可与重量差异检查结合进行。 糖衣片、肠溶片:取标准中规定的片数,置于乳钵中,研细,分次加入规定的溶剂,研磨使其溶解,将研磨液转移至瓶口放有小漏斗的量瓶中,量瓶体积根据供试品标示量、所取片数及抗生素储备液浓度(一般为1000单位/ml)选定,用规定溶剂稀释至刻度,摇匀,静置,使辅料下沉而抗生素已溶解在溶液内,精密吸取量瓶中的上层液适量,作进一步稀释。个别品种标准如同时收载了糖衣片和薄膜衣片,可能规定薄膜衣片也取整片制备供试溶液。
胶囊剂:取装量差异项下的内容物,混合均匀,研细,根据平均装量,精密称取约相当于1粒胶囊的量或按标示量、量瓶体积及抗生素储备液浓度等计算的取样量,置于量瓶中,加规定的溶剂溶解并稀释至刻度,摇匀,如供试品含有较多的辅料,则照片剂项下的方法进行。
颗粒剂、干混悬剂:取装量差异项下的内容物,混匀,根据平均装量,精密称取约相当于1袋(包)的量或按标示量、量瓶体积及抗生素储备液浓度等计算的取样量,置于量瓶中,加规定的溶剂溶解并稀释至刻度,摇匀。量取适量稀释制成供试品溶液。测得效价后,再根据装量差异项下的平均装量,计算出平

均每袋(包)的效价,根据标示量即可算出含量。
软膏剂、眼膏剂:擦净软膏剂或眼膏剂软管的外壁,切开封口,置于干燥器内约1小时,取干燥的洁净分液漏斗,带手套操作,将膏剂软管连同内容物在天平上称重,取出,将内容物挤入分液漏斗,量约2g,再称取膏剂软管的重量,按减重法以前后称量之差计算分液漏斗内膏剂供试品的量,以不含过氧化物的乙醚或石油醚等作溶剂溶解基质,但基质中的抗生素则应不溶于或几乎不溶于该有机溶剂中,以避免提取过程中抗生素的损失。按标准中的规定加提取溶剂至分液漏斗中,振摇,使基质溶解,用规定的缓冲溶液提取抗生素至水相中,用缓冲溶液提取3次,合并3次的提取液,置量瓶中,加缓冲溶液至刻度,依法操作,计算效价。 实验要点
磷霉素钠,磷霉素钙,磷霉素氨丁三醇 主要问题:抑菌圈偏小 解决:
1. pH9.0抗Ⅱ号培养基(pH7.8~8.0)
2. 滴加药液后,室温放置1小时后,放入孵箱内培养。
3. 培养时间以24小时为宜,培养时间短,抑菌圈清晰度不好,培养24h后如抑菌圈仍不清晰,应室温放置一段时间待清晰后再测量。
啤酒酵母菌的培养 主要问题:生长不良
CP2005:抗Ⅴ号琼脂斜面及抗Ⅳ琼脂斜面
解决:1. 采用沙氏或YPD酵母菌培养基;2. 32~35℃培养24小时
沙氏培养基 蛋白胨10g 葡萄糖40g 琼脂13g 水1000ml 调节灭菌后pH5.4~5.8

YPD培养基 蛋白胨10g 葡萄糖40g 酵母粉5g 琼脂13g 水1000ml
管碟法特点:
优点:基本操作和设计适用于各种抗生素,试验结果较稳定;样品用量少,灵敏度高;适合于大批样品的测定。
缺点:凡具有抗菌活性的物质都会干扰测定结果;试验过程长,需第二天才有结果;操作手工化,需熟练人员才能得到较正确的结果;受扩散因素的影响,如培养基原材料的质量,一般琼脂中的杂质可能影响扩散速度及效价强度
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⑹ 抗生素检测的主要方法

由于抗生素在废水中的浓度相对较低,所以抗生素的检测一般都是微量或是痕量分析,常采用具有高灵敏度的仪器进行检测。各研究机构对畜禽废水中抗生素的检测技术主要有色谱法和其联用技术、酶免疫分析法、毛细管电泳法等。 液相色谱法(LC)在废水抗生素的检测中是最常见的,LC具有分离效能好,检测速度快且重现性好的特点。LC法所用的检测器有紫外检测器(UV),荧光检测器,以及二级管阵列检测器。
高效液相色谱-紫外检测器
高效液相色谱-紫外检测器联用检测技术是最早用于环境中抗生素的分离检测,由于其操作简便以及成本低,被用于畜禽废水中抗生素的检测。
液相色谱-荧光检测器
液相色谱-荧光检测器因为其检测限低所以也被用于畜禽废水中抗生素的检测,通常对本身具有荧光性的抗生素液相色谱-荧光检测器可以直接检测出,但是对于本身不具有荧光性或荧光性差的抗生素,需要对其衍生化来提高目标物的荧光特性以便检测。
液相色谱串联质谱技术
色谱可以用于多组分混合物的分离和分析,可以对有机化合物进行定量分析,但是定性较困难,质谱仪能够对单一组分提供高灵敏度和特征的质谱图,但对复杂化合物无分析能力。所以将色谱与质谱进行联用(或是串联质谱),对复杂化合物中微量和痕量组分的定性和定量分析具有重要的意义。
由于畜禽废水中有多种类的抗生素同时存在,利用色谱和质谱的联用技术可以提高抗生素的定性、定量分析的可靠性、准确性、灵敏度。 酶免疫分析方法具有操作简单,前处理简化,分析成本低、灵敏、特异性强、检测快速,不需要昂贵的仪器等,而且可以同时测定几个样品,但是酶免疫分析方法对试剂的选择性高,很难同时分析多种成分,对结构类似的化合物有一定程度的交叉,分析分子量很小的化合物和不稳定的化合物有一定的困难。
用酶免疫分析方法试剂盒检测地表水、地下水中的四环素和泰勒菌素,检测分别为0.05μg/L,0.1μg/L。其结果表明,该方法成本低、检测快,可用于水中的四环素、氯四环素、泰勒菌素的初筛检测。 经典的放射免疫测定基本原理和酶免疫分析是相同的,但所不同的是反应的放大指示系统不是酶和底物,而是放射性同位素。用于抗原或抗体标记的同位素通常是放射性较小的β放射原,最常用的是同位素是3H和14C,放射性不强、用量也极微小,比较安全。

⑺ 采用抗生素微生物检定法检测的药物是

正确答案:C
解析:布洛芬的原料、片剂采用酸碱滴定法,缓释胶囊采用HPLC外标法
。肾上腺素的原料采用非水溶液滴定法;注射液采用反向离子对HPLC
。硫酸庆大霉素采用微生物检定法
。阿莫西林采用HPLC
。头孢羟氨苄采用RP-HPLC

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