诺如病毒检测方法有乳胶

⑴ 乳胶法和胶体金法的区别

二者在原理、应用和载体方面有所不同，具体如下：

1、原理不同：

普通聚苯乙烯乳胶和抗体的结合是无选择性的物理静电吸附，抗体很难结合到乳胶表面，即使致敏上的抗体也容易从乳胶微球上脱落或者变性失活，而使用多肽缩合剂或交联剂则操作过程繁琐、耗时。

胶体金法是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。

2、应用不同：

胶体金也是免疫电镜技术中较为理想的免疫标记物。胶体金技术具有方便快捷、特异敏感、稳定性强、不需要特殊设备和试剂、结果判断直观等优点, 因而特别适合于广大基层检验人员以及大批量检测和大面积普查等, 具有巨大的发展潜力和广阔的应用前景。

乳胶凝集法具有独特优点: 不需要特殊仪器、肉眼判断、操作简便、不需要专门培训；检测时间短，一般为 2 min；价格低廉，检测单份血清样品的成本比其它血清学和病原学方法低得多；适于现场检测等，在临床检验中被广泛应用。

3、载体不同：

乳胶凝集法是以乳胶颗粒作为载体的一种间接凝集试验。即吸附可溶性抗原于其表面，特异性抗体与之结合后，可产生凝集反应。

胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。

参考资料来源：网络-胶体金法

参考资料来源：网络-乳胶凝集法

⑵ 禽流感病毒和抗体的实验室检测方法分别有哪些各种方法用途分别是什么

病毒检测方法有：
（1）病毒（鸡胚、细胞）分离培养与鉴定，用途为直接分离病毒；
（2）免疫荧光法，用途为检测组织、细胞培养物中病毒抗原；
（3）免疫酶法（包括免疫酶组织化学染色法和免疫过氧化物酶细胞单层试验），用途为检测组织、细胞培养物中病毒抗原；
（4）中和试验，用已知阳性血清检测病毒，金标准方法
（5）血凝/血凝抑制试验，用已知阳性血清检测病毒
（6）乳胶凝集试验，用已知阳性血清检测病毒抗原
（7）胶体金试纸，用已知阳性血清检测病毒抗原
（8）ELISA方法，用已知阳性血清检测病毒抗原
（9）RT-PCR（含荧光RT-PCR），用途为检测病毒核酸
（10）NASBA，用途为检测病毒核酸
（11）核酸探针，用途为检测病毒核酸
（12）基因芯片，检测病毒核酸
（13）核酸序列测定，解析病毒核酸
抗体检测方法
（1）琼脂扩散试验，检测病毒NP和M蛋白抗体
（2）血凝抑制试验，检测病毒HA蛋白抗体，可用于免疫效果评估
（3）神经氨酸酶抑制试验，检测病毒NA蛋白抗体
（4）中和试验，用已知病毒检测血清，金标准方法
（5）ELISA方法，用已知病毒抗原检测特异抗体
（6）胶体金试纸，用已知病毒抗原检测特异抗体
（7）乳胶凝集试验，用已知病毒抗原检测特异抗体

⑶ 涔栾倽䦅呮瘨琛ㄩ溃鎶楀师(涔宠兑娉)阒存т粈涔堟剰镐濓纻

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⑷ 诺如病毒的实验诊断

电镜法
直接电镜法(EM)和免疫电镜法(IEM)，EM 法观察的灵敏度较低，要求每毫升粪便样品中至少有大约 106个病毒粒子，因此只能用于患病早期病毒大量排出时采集的样本检测。IEM 法比 EM 法的敏感性可提高 100 倍，主要应用患者恢复期血清捕捉同型抗原，从而增加检出率。电镜法的缺陷在于设备昂贵，不能广泛普及；检测结果与操作者的技能和经验有直接关系；灵敏度相对较低；不适于大规模流行病学调查。
免疫法
包括放射免疫法(RIA)、生物素-亲和素免疫法(Biotin-Avidin Immunoassy)和酶联免疫法(ELISA)。RIA法的灵敏度比IEM 法可 提高10～100倍，可以检测出抗体升高的水平，为流行病学提供更有参考价值的资料。RIA 法的不足之处在于它需要 6 d，且需要放射性同位素标记。为了简化方法，美国疾病预防控制中心建立了生物素-亲和素免疫法，其灵敏度与 RIA 法相当，该方法已成为美国疾病预防控制中心检测NLV抗原和抗体的标准实验方法之一。1992年Jiang 等重组杆状病毒表达NV衣壳蛋白成功后，建立起的 NV 酶联免疫检测方法快速、灵敏、经济，其不足之处是免疫反应的株型特异性太强，所以应用范围还比较窄。酶链免疫法特异性强，灵敏度高，诊断迅速，且较经济，是可广泛应用的检测方法。由于NLV培养还未成功，原来用作试剂的病毒抗原数量受到限制，用分子生物学技术已经可以人工重组NV的衣壳蛋白，从而解决了上述问题。
分子生物学检测方法
杂交技术和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)除了能更准确、灵敏地检测标本中的NV，尤其是低浓度的NV感染外，最大的优点在于可以进一步对病毒进行基因型的研究，不会受到获得分型单克隆抗体的限制，对流行病学研究具有重要意义。
等温核酸扩增法 (NASBA)直接扩增RNA 来检测 NV，样品中病原RNA得到指数级扩增，产物通过琼脂糖凝胶电泳或斑点印迹杂交鉴定结果。该方法的灵敏度略低于 RT-PCR 法；整个过程只有一步RNA扩增，避免了RT-PCR存在的RNA交叉污染；缩短了操作时间；假阳性率低。 RT-PCR检测食物中NV存在样品病毒量含量低，样品量大且成分复杂等问题，因此病毒富集浓缩、样品处理是检测的关键，其中有两个重要方面影响检测结果，一是样品中病毒浓缩后的回收率，二是抽提核酸的完整程度和纯度。
病毒浓缩
病毒浓缩 NV 浓缩方法一般分为两大类，一类为有机絮凝沉淀法，主要使用聚乙二醇（PEG）沉淀，PEG 是具有强烈吸水性以及凝聚和沉淀蛋白作用的高分子聚合物，先改变样品 pH 值，使毒粒与样品微粒分开，PEG 把病毒沉淀下来，达到浓缩的目的。目前对于固体样品 PEG 沉淀法是最有效的浓缩方法。
膜过滤法是另一类有效浓缩病毒的方法，通过改变膜的pH值使之与带有电荷的毒粒结合捕捉病毒，这种方法通常用在浓缩大体积的黏度小、内容颗粒小的液体食品或水中。检测海水、生活污水中的NV曾用过这种方法，为瓶装水和其他饮料浓缩NV提供了参考。
核酸提取
食品样品成分复杂，所含有的脂肪、蛋白质、金属离子等物质都是 RT-PCR 反应抑制因子。NV是单链RNA病毒，核酸提取方法的优劣取决于两个方面：核酸的质量和去除抑制因子的能力。应用较成熟广泛的是胍法 RNA 提取法，即（异）硫氰酸胍-苯酚-氯仿联合裂解抽提法，该方法改进后制成市售的TRIzol、RNAzol、Ultraspec 等产品，与石英砂、磁珠等多孔颗粒相结合，已结合了poly(dT) 或特异探针的磁珠能较高程度的提纯mRNA，去除反应抑制因子。石英砂或磁珠纯化 RNA与传统的有机试剂（异丙醇、乙醇）沉淀 RNA 相比起来，效果较好，只是成本偏高。