检测凝血时间方法三管法

❶ 血凝仪的测定方法

光学法血凝仪是根据血浆凝固过程中浊度的变化来测定凝血功能。根据仪器不同的光学测量原理，又可分为散射比浊法和透射比浊法两类。
散射比浊法是根据待验样品在凝固过程中散射光的变化来确定检测终点的。在该方法中检测通道的单色光源与光探测器呈90°直角，当向样品中加入凝血激活剂后，随样品中纤维蛋白凝块的形成过程，样品的散射光强度逐步增加。当样品完全凝固以后，散射光的强度不再变化，通常是把凝固的起始点作为0%，凝固终点作为100%，把50%作为凝固时间。光探测器接收这一光学的变化，将其转化为电信号，经过放大再被传送到监测器上进行处理，描出凝固曲线。
透射比浊法，是根据待测样品在凝固过程中吸光度变化来确定凝固终点的、与散射比浊法不同的是该方法的光路同一般的比色法一样呈直线安排：来自光源的光线经过处理后变成平行光，透过待测样品后照射到光电管变成电信号，经过放大后监测处理。当向样品中加入凝血激活剂后，开始的吸光度非常弱，随着反应管中纤维蛋白凝块的形成，标本吸光度也逐渐增强，当凝块完全角成后，吸光度趋于恒定。血凝仪可以自动描绘吸光度的变化曲线并设定其中某一点对应的时间为凝固时间。 磁珠法是根据血浆凝固过程中粘度的变化来测量凝血功能的。根据仪器对磁珠运动测量原理的不同，又可分为光电探测法和电磁珠探测法。
光电探测法，在磁珠法中光电探测器的作用与光学法中不同，它只测量血浆凝固过程中磁珠的运动规律，与血浆的浊度无关。在磁珠法中的一对电磁铁安放在测试杯的两端，它们产生恒定的交替磁场使磁珠在测试杯中摆动，在与磁珠摆动的垂直方向安放一对光电接收装置，当磁珠摆幅衰减到50%时确定凝固终点。
光电探测法中还有一种利用红外光反射监测器监测磁珠运动的，下面介绍BE系列半自动血凝仪中将另加介绍。
电磁探测法又可称为双磁路磁珠法，其中一对磁路用于吸引磁珠摆动，另一对磁路利用磁珠摆动过程中对磁力线的切割所产生的电信号，对磁珠摆动幅读度进行监控，当磁珠摆动幅度衰减到50%确定凝固终点。 目前市售的半自动血凝仪主要由样品、试剂预温槽、加样器、检测系统（光学、磁场）及微机组成。有的半自动仪器还配备了发色检测通道，使该类仪器同时具备了检测抗凝及纤维蛋白溶解系统活性的功能。针对光学式半自动血凝仪受人为的因素影响多、重复性较差等缺陷，仪器中应有自动计时装置，以告知预温时间和最佳试剂添加时间；在测试位添加了试剂感应器，后者感应从移液器针头滴下的试剂后自动振动，使反应过程中血浆与试剂得以很好地混合；此外，该类仪器在测试杯顶部安装了移液器导板，在添加试剂时由导板来固定移液器针头，从而保证了每次均可以在固定的最佳的角度添加试剂并可以防止气泡产生。这一系列改进，提高了光学式半自动血凝仪检测的准确性。
一般半自动血凝仪都可进行凝固法测试，而需要用其它测试方法实现的凝血项目则可用生化分析仪、酶标仪等进行。 该类仪器的基本构成包括：样品传送及处理装置、试剂冷藏位、样品及试剂分配系统、检测系统、电子计算机、输出设备及附件等。
1. 样品传送及处理装置：一般血浆样品由传送装置依此向吸样针位置移动，多数仪器还设置了急诊位置，可以使常规标本检测必要时暂停以服从免疫比浊法将被检物与其相应抗体混合形成复合物，而产生足够大的沉淀颗粒，通过透射比法或散射比浊进行测定。此法操作简便，准确性好，便于自动化。
2. 试剂冷藏位：为避免试剂的变质，仪器往往有试剂冷藏功能，一般同时可以放置几十种试剂进行冷藏。
3. 样品及试剂分配系统：样品臂会自动提起标本盘中的测试杯，将其置于样品预温槽中进行预温。然后试剂臂将试剂注入测试杯中（性能优越的全自动血凝仪为避免凝血酶对其他检测试剂的污染，有独立的凝血酶吸样针），带有旋涡混合器的装置将试剂与样品进行充分混合后将送至测试位，经检测的测试杯被该装置自动丢弃于特设的废物箱中。
4．检测系统：这是涉及仪器测量原理的关键部分。检测血浆的凝固可以通过凝固反应检测法检测，即当纤维蛋白凝块形成时，检测散射光在660nm处浑浊液吸光度的变化；或通过凝固点检测法检测，即计算达到预先设定好的吸光度值时的凝固时间；而磁珠法则是通过测定在一定磁场强度下小钢珠的摆动幅度变化来测定血浆凝固点。发色底物法及免疫法是检测反应液在405nm、575nm及800nm时的吸光度变化来反映被检测物质的活性。
5. 电子计算机：根据设定的程序计算机指挥血凝仪进行工作并将检测得到的数据进行分析处理，最终得到测试结果。计算机尚可对患者的检验结果进行储存，记忆操作过程中的各种失误，及进行质量有关的工作。
6. 输出设备：通过计算机屏幕或打印机输出测试结果。
7. 附件：主要有系统附件、穿盖系统、条码扫描仪、阳性样品分析扫描仪等。

❷ 凝血检验的知识

凝血检验的知识

你知道应该如何检验凝血吗?你知道凝血检验的技巧吗?下面是我为大家带来的关于凝血检验的知识，欢迎阅读。

(一)PT和/或APTT延长

1. 了解患者有否家族出血史、个人出血史、肝病史、病人服药情况(医疗史)。病人如有瘀点、紫癜、黏膜出血多提示血管或血小板异常;若为关节出血、胃肠道出血常提示单个因子缺乏。若病史阳性，必须请检验科做混合试验等项目以便进一步查明原因。

2. 若家族出血史、个人出血史、肝病史、病人服药情况(医疗史)等均阴性，第一步就是重新采集标本。因为标本凝固，或放置时间太长，或从用肝素的静脉采血均可影响凝血试验结果。若重新采集标本不影响结果，应进一步做混合试验。

(二)凝血酶时间(TT)延长 TT延长，除以上两点外，还应注意以下几点：

1. 注意纤维蛋白原结果：因纤维蛋白原水平高或低，或有异常纤维蛋白原均可直接导致凝血酶时间延长，所以需做纤维蛋白原定量试验。

2. FDP/fdp测定：血液中出现纤维蛋白原/纤维蛋白降解产物(FDP/fdp)。因FDP/fdp具有凝血酶抑制物样作用，使TT延长，所以需做FDP/fdp半定量试验。

3. 排除肝素：若标本为肝素污染，或病人体内存在肝素，凝血酶试验结果异常。用硫酸鱼精蛋白中和肝素后，再做TT将正常。

问：什么是混合试验

混合试验是将病人血浆和正常人血浆做50:50混合进一步试验。混合血浆试验有助于鉴别PT与APTT结果异常的原因。

1. 若50:50混合试验纠正了异常结果，说明病人多数为因子缺乏，应进一步检测是哪个因子缺乏。但也不能排除出现低浓度抑制物。

2. 若50:50混合试验不能纠正或仅部分纠正APTT结果，可能出现抑制物。若抑制物为抗体，通常是输血、药物、或某些疾病所致，有时无明显原因。在大多数病例中，这些抗体只抗单个因子。

问：卫生部[2000]412号文件规定，停止使用出血时间测定项目的Duke法，必要时可使用出血时间测定器法检测出血时间(BT)。请对后者进行介绍。

出血时间测定器法检测BT是用一次性的出血时间测定器在前臂皮肤造成一“标准”创口(成人切口通常长5mm，深1mm)，记录出血自然停止所需的时间即为BT。该法为有创性检查，不作为手术前的常规，仅在怀疑有毛细血管和血小板方面的疾病，需用此项目进行鉴别诊断时才考虑进行。

BT的临床意义：

1. 出血时间延长：血小板数量异常如血小板减少症;血小板质量缺陷如先天性和获得性血小板病和血小板无力症等;某些凝血因子缺乏，如血管性血友病(vWD)、低(无)纤维蛋白原和弥散性血管内凝血(DIC)等;血管疾病，如遗传性出血性毛细血管扩张症、单纯性紫癜、过敏性紫癜等。阿斯匹林、非类固醇抗炎药及其它抗血小板药物、抗菌素如青莓素和头孢类药物等也可使BT延长。

2. 出血时间缩短：见于某些严重的高凝状态和血栓形成。

❸ 凝血时间的测定方法

根据标本来源有：毛细血管采血法：可用玻片法或毛细血管法测定。由于采血过程易混入较多组织液因而即使有内源性凝血因子缺乏，也仍发生外源性凝血，使本该异常的结果变为正常。本法极不敏感，仅能检测出Ⅷ：C水平<2%的血友病患者，漏检率达95%故属于淘汰的方法。
静脉采血法：由于血液中较少的混入组织液，因此对内源凝血因子缺乏的第三性比毛细血管采血法要高。目前有3种检测法：（1）普通试管法（Lee-White法）：仅能Ⅷ：C水平<2%的患者，本法不敏感也趋于淘汰。（2）硅管法（SCT）：本法与普通试管法的测定方法基本相同，唯一的区别是采用涂有硅油的试管。由于硅管内壁不易使内壁凝血因子接触活化，故凝血时间比普通试管法长，也较第三可检出因子Ⅷ：C水平45%患者。
活化凝血时间（activated clotting time,ACT）法：本法是在待检全血中加入白陶土部分凝血活酶悬液，先充分激活接触活化系统的凝血因子Ⅶ、Ⅺ等，并为凝血反应提供丰富的催化表面，从而提高了试验的第三性，是内源性系统第三的筛选试验之一，能检出Ⅷ：C水平<45%亚临床血友病。ACT法也是监护体外循环肝素用量的较好的指标之一。以上测定凝血时间的各种方法，在检测内源性凝血因子缺乏方面，无论敏感性或准确性均不如活化部分凝血活酶。

❹ 新生儿采集动脉血气分析，毛细玻璃管里面的血多长时间凝

方法:

1. 桡动脉、肱动脉、股动脉采血方法：（桡动脉和股动脉常用,肱动脉和手足背动脉不常用）。

(1)用器抽取6250U/ml肝素钠0.2ml，转动针栓使整个器内均匀附着肝素，针尖向上推出多余液体和器内残留气泡，也可应用BD动脉血气穿刺针直接抽取。

(2)选动脉穿刺部位，触摸动脉搏动最明显处，用碘伏棉签消毒穿刺部位(5cm)和术者左手食指和中指。

(3)用左手食指和拇指固定动脉(因人而异)，右手持器与皮肤呈40-60度穿刺，若取股动脉穿刺采血则垂直进针,穿刺成功则血自动流入针管内,色鲜红,采血1-2ml即可。

(4)取血后立即拔针，将针头斜面刺入橡皮塞内，以免空气进入影响结果，若器内有气泡，应尽快排出。将器轻轻转动，可用手搓动1分钟，使血液肝素充分混合，防止凝血，用无菌干棉签压迫穿刺点，力度以摸不到动脉搏动为准，按压10-15分钟。

2.采取末稍动脉血：

(1)部位：常用耳垂、手指及足跟部的动脉末稍血。

(2)采血前局部热敷5分钟，使局部轻度充血。

(3)用75%酒精消毒局部，用三梭针快速刺入皮内约3mm，勿用手挤压使血液自溢，随即接上肝素化的毛细玻璃管，吸满血后用橡皮泥封闭两端，同时用棉球压迫穿刺部位。

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❻ 出凝血时间的测定方法

出血时间测定有三种方法：即，Duke法、Ivy法、出血时间测定器法。
Duke法：操作虽简单，但穿刺深度，宽度难以标准化，且受穿刺部位毛细血管分布及血管收缩程度的影响，致使实验的敏感性很差。文献记载，血小板低于3×109/L的患者阳性率仅为4 2%，遗传性假血友病(VWD)患者阳性率为32%，而测定器法分别为92%和67%。
Ivy法：虽较Duke法敏感，操作繁琐，又是损伤性的，切口难以标准化，也不易住推广。
出血时间沉定器法：由于刀片埋装在仪器内部，由弹簧快速弹出,使切口深度，宽度易于控制，可标准化且灵敏度高。因此，文件中规定出血时间测定实验应使用出血时间测定器法，而废除Duke法。
临床意义
1.当血小板数目减少或功能缺陷时，不能形成血栓，出血时间即延长。常见于血小板减少性紫癜、急性白血病、再生障碍性贫血等。严重的凝血酶原减少亦可引起出血时间延长。
2.出现时间除了与血小板的数量与机能有关外，还与毛细血管的收缩和粘合能力以及血清素等物质的释放有关。如毛细血管病变，收缩功能障碍出血时间也延长。
3.由于毛细血管原因所引起的出血时间延长，如血管性假血友病，常常是在身体某一部位出血时间延长，而其他部位正常，因此，必须同时做两侧耳垂或手指的出血时间测定，以资鉴定。