黄曲霉素检测方法

1. 如何检测黄曲霉毒素M1

检测黄曲霉M1的方法一般就是免疫亲和层析净化高效液相色谱法和酶联免疫吸附法（试剂盒）这两种方法。前一种方法主要使用到高效液相，后一种使用的是酶标仪。由于高效液相色谱法费用高试用繁琐，所以现在市场上检测黄曲霉M1主要还是酶联免疫法。

CSY-E96H黄曲霉毒素快速检测仪 （黄曲霉素快速检测仪|黄曲霉素检测仪|黄曲霉毒素测试仪）采用固相酶联免疫吸附ELISA的原理,即酶联免疫法；可定量检测粮食、食品、饲料、油脂、乳制品、药物、饮料、牛奶、酒等产品中的黄曲霉毒素(B1，B2，G1，G2 M1 M2 AFM1、AFP1、AFQ1、AFB1-2，3-环氧化物）含量。并且可以连接食品安全监控系统，黄曲霉毒素快速检测仪、药物残留检测仪广泛应用于产品质量监督检验、卫生防疫、环境保护、工商管理、水产品批发市场、面制品生产基地、养殖场、粮库、超市、商场、各大食品安全监测系统等部门。

2. 家庭如何检验黄曲霉素

一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法是利用单克隆抗体而设计的固相免疫分析法。

由此产生的一步式黄曲霉毒素快速检测试纸可在5—10分钟完成对样品中黄曲霉毒素的定性测定，借助黄曲霉毒素标准样品这种方法能估算黄曲霉毒素的含量，非常适用于现场测试和进行大量样品的初选。

薄层分析法(TLC)是检测黄曲霉素最为经典的方法，也是以前最为常用的方法，至今仍为一些检测机构所用，也是一种国标方法。其原理是针对不同的试样，用适宜的萃取溶剂将黄曲霉素从试样中萃取出来，经柱层析净化后，再在薄板上展开后分离。

(2)黄曲霉素检测方法扩展阅读：

HPLC法是近年来发展起来的一种检测方法。其原理是在高效液相色谱仪上添加柱后衍生系统分离，再用荧光检测器测定。与其配套的柱后衍生系统有碘衍生化法、溴衍生化法及较为先进的电化学衍生化法和光化学衍生化法。当前，该方法大多用免疫亲和柱来净化、分离，其净化效果优异。

该法能准确地分离不同种类的黄曲霉素(例如：AFB1、AFB2、AFG1和AFM1等)，检测速度快且定性与定量准确，检测限低，可作为仲裁法使用，但仪器设备价格昂贵，前处理方法相对繁琐，若用到免疫亲和柱则会使试样检测费用增加，对操作人员的身体健康仍存在一定的危害。

3. 用什么样的仪器检测饲料中的黄曲霉毒素

CSY-E96H黄曲霉毒素快速检测仪采用固相酶联免疫吸附ELISA的原理,即酶联免疫法；可定量检测粮食、食品、饲料、油脂、乳制品、药物、饮料、牛奶、酒等产品中的黄曲霉毒素(B1，B2，G1，G2 M1 M2 AFM1、AFP1、AFQ1、AFB1-2，3-环氧化物）含量。并且可以连接食品安全监控系统，黄曲霉毒素快速检测仪、药物残留检测仪广泛应用于产品质量监督检验、卫生防疫、环境保护、工商管理、水产品批发市场、面制品生产基地、养殖场、粮库、超市、商场、各大食品安全监测系统等部门。

4. 高效液相色谱仪测定茶叶中黄曲霉毒素B1的方法是什么

楼主你好：
高效液相色谱仪测定茶叶中黄曲霉毒素B1的方法
1.适用范围本方法适用于出口茶叶中黄曲霉毒素B1含量的检验。
2.原理概要样品用三氯甲烷提取，提取液经硅胶柱净化，净化后的提取液用三氟乙酸衍生，用配有荧光检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。
3.主要试剂和仪器3.1.主要试剂三氯甲烷；正己烷；苯；甲醇：紫外光谱级；乙腈：紫外光谱级；三氟乙酸；乙腈-水溶液（1＋1）；三氯甲烷-甲醇溶液（95＋5）；苯-乙腈溶液（98＋2）；黄曲霉毒素B1标准品：纯度≥99%；黄曲霉毒素B1标准溶液：准确称取适量的黄曲霉毒素B1标准品，以苯-乙腈溶液于棕色容量瓶中，配成浓度为10μg/mL标准贮备液。根据需要，再配成适当浓度的标准工作溶液。3.2.仪器高效液相色谱仪，配有荧光检测器；天津恒奥硅胶小柱；天津恒奥振荡器：HMS系列；天津恒奥超声波：HU、HS系列；
天津恒奥氮吹仪；天津恒奥滤膜：有机系用，0.45μm；天津恒奥微孔滤膜过滤器
旋转蒸发器；微量注射器；离心管：5mL具塞磨口；粉碎机。
4.试样的抽取与制备4.1.抽样方法从整批产品堆垛的上下不同部位随机抽取2.2规定的件数，逐件开启。分别倒出全部茶叶于塑料布上，用取样铲从每件中各取出有代表性的样品约500g。将所取样品充分混匀，用四分法或分样器逐步缩分出500g，装入洁净密封的样品筒内，加封后，标明标记，及时送实验室。4.2.试样制备将所取回样品全部磨碎，通过20目筛，混匀，均分成两份试样，装入洁净容器内，密封，标明标记。4.3.试样保存将试样于室温下保存。注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。更多质量检测、分析测试、化学计量、标准物质相关技术资料请参考国家标准物质药检所标准品目录，药品对照品请参考 http://www.rmhot.com/plist_3/plist_3_0_0_1.html
5.过程简述5.1.提取称取试样5.0g（精确到0.1g）置于100mL具塞锥形烧瓶中，加入15mL三氯甲烷，于振荡器上提取30min，然后经垫有玻璃纤维的漏斗过滤。收集滤液于旋转蒸发器的具尾管圆底烧瓶内，并用三氯甲烷洗涤滤渣，收集滤液至约20mL。5.2.净化用旋转蒸发器将上述滤液在50℃水浴中浓缩至约1mL，经0.45μm滤膜过滤后，注入硅胶小柱中。用2～4mL正己烷洗涤烧瓶后淋洗小柱，弃去流出液。然后用3～4mL三氯甲烷-甲醇溶液以每秒钟2滴的流速洗脱，收集洗脱液于离心管中。用氮气仪缓缓吹干，供衍生用。5.3.衍生5.3.1.试样加200μL正己烷和50μL三氟乙酸于上述离心管中，盖紧磨口塞，超声振荡1min，静置10min，用氮吹仪缓缓至干。用乙腈-水溶液（1＋1）定容至1.0mL，超声1min，用0.5μm滤膜过滤，滤液供液相色谱用。5.3.2.标准工作溶液取1.0mL标准工作溶液，用氮吹仪缓缓吹干，按5.3.1步骤操作。5.4.测定5.4.1.色谱条件色谱柱：NOVA PAKc18，300mm×3.9mm（内径）；流动相：甲醇-水溶液（42＋58）；流速：0.8mL/min；荧光检测器：激发波长375 nm，发射波长425 nm；色谱柱温度：室温。5.4.2.测定根据样液中黄曲霉毒素B1的含量情况，选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中黄曲霉毒素B1衍生物的响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液的衍生物溶液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，黄曲霉毒素B1衍生物保留时间约为8min。5.4.3.空白试验除不加试样外，按上述测定步骤进行。
6.结果计算用色谱数据处理机进行数据处理
7.低限和回收率测定7.1.低限本方法的测定低限为0.001mg/kg。7.2.回收率回收率的实验数据：黄曲霉毒素B1的添加浓度在0.001～0.5mg/kg范围内，回收率为89.1%～104.9%。

5. 怎样测试自制樱桃酒中黄曲霉素

黄曲霉素（AF)的检测方法从最初以薄层层析法为主，发展到高效液相色谱法、微柱法、酶联免疫吸附法等多种方法普遍应用，其进展与新的化学检测手段和新仪器的出现密不可分。这些新方法、新手段的快速应用，为黄曲霉毒素的检测提供了更广泛的选择余地，适应了不同的检测目的和要求。

薄层层析法
薄层层析法（TLC）是测定AF的经典方法，其原理是将样品经过提取、柱层析、洗脱、浓缩、薄层分离后，在波长365nm紫外光下产生蓝紫色或黄绿色荧光，并根据其在薄层上显示的最低检出量来确定其含量。

高效液相色谱法
HPLC具有高分辨率，分析时间较短等优点。它的原理是样品溶液中欲分离的几种化合物在流动相和固定相之间有不同的分配量，从而达到分离的目的。AF经柱后电化学衍生化后，能发射特征性荧光，被荧光检测器捕获后而得到检测，最后经化学工作站处理数据。这一检测方法，将化学分析试验与领先的计算机技术结合，使自动化程度得到极大的提高，在试验空间、人力和仪器都保持不变的情况下，能检测更多的样品。HPLC是近几年发展起来的检测AFB1的方法，主要是用荧光检测器检测。该法快速而准确，但需要昂贵的仪器设备，未能广泛使用。

微柱法
微柱法测定AF，是利用微柱管内的硅镁型吸附剂吸附AF并在365nm紫外光下显示荧光，其强度与一定浓度的AF含量成正比关系，由此可简略定量AF。

酶联免疫吸附法
酶联免疫吸附法（ELISA）是抗原（或抗体）吸附剂和用酶标记的抗体（或抗原）与标本中的待测物（抗原和抗体）起特异的免疫学反应，用测定酶活力的方法来增加测定的敏感度，是一种定性或半定量的方法。大致采用两种方法检测AF：一种是用双抗体夹心法；另一种是用竞争法。免疫吸附法测定的试剂盒及配套仪器、方法被列入国家标准（GB/T5009 22-1996第二法）。
关于运用酶联免疫法检测AFB1的检测报道也较多，目前国外已有较成熟的检测食品及饲料中AFB1等真菌毒素的ELISA试剂盒出售，我国自20世纪90年代以来也有一些以ELISA检测食品及饲料中AFB1的研究报道。

其他方法
（1）溴化荧光分光光度法（SFB）
样品经甲醇-水混合溶剂提取后，部分提取液通过固相分离进行柱前处理，500μL纯化的提取液用溴试剂衍生化后，用荧光检测计中检测，样品荧光吸收度与硫酸喹啉液的吸收度比较可直接换算成AF的总含量。该法已通过AOAC和美国农业部联邦谷物检测中心的认证。
（2）超光谱方法（HS）
超光谱法是基于反射能基础上的一种非侵入无破坏的映像技术，用于农产品检测中，能够快速地提供该产品的有关化学和其他方面的内部细节。另据研究报道，培训黄蜂可用于AF检测。由于AF主要是由黄曲霉产生的，寄生黄蜂通过培训能把黄曲霉的气味和糖水联系起来，并对这些气味产生有区别的行为反应，借此来识别目标气味的存在。这种培训反应正在应用于储藏玉米、花生的AF监控和检测实践当中，目前还未给出有关的结果评定。

各方法对比
薄层层析法对样品处理繁琐，实验过程复杂，所需时间多，易受杂质干扰，较适合于对AF的定性检测，是研究AF初期所使用的主要方法。今后，虽然薄层层析法在不断地改进，并在一般实验室均可完成操作，但由于它复杂的前处理过程致使在应用中仍然会受到一定程度的限制。
高效液相色谱法测定AF，技术水平要求较高，目前采用这种方法检测AF较多，但具体一次实验所使用的化学药剂和处理途径差别很大，对实验结果的精度造成影响，这种方法还应在实践中进一步改进。但总体上说高效液相色谱法操作较为简便，同时可检测多个AF种类，适于大批量样品的分析。将免疫亲和柱与高效液相色谱法结合应用，是目前采用较多的一种方法，今后将被广泛应用。
微柱法测定AF，主要是用来检验AF的存在与否以及快速筛选出超标样品，而要对AF种类进行区分定量检验，则需要对不同AF组分进行分离，再利用其他方法检测。因此，微柱法并不能完成整个AF检测过程，仅适用于定性检验。
酶联免疫吸附法操作简便，使用较为安全，但由于酶本身的不稳定性，用此方法检验AF有可能带来假阳、阴性结果，而且研制出的AF快速测试盒多以测定最具毒性的种属为主，食品和饲料工业上利用它来界定食品或饲料中AF的超标问题。酶联免疫吸附法的检测精度还有待于提高。
溴化荧光分光光度法的最大优点是检测时不使用AF对照品，同时快速、灵敏，适合大批量样品普查，仪器价格也较低，张雪辉等比较了用SFB法和溴衍生HPLC检测中药中AF的结果，发现SFB法在测定中药时可能出现许多假阳性结果。

6. 黄曲霉素可以用紫外线灯检测吗

可以。

饲料是否被黄曲霉毒素污染可以用LEA-160L紫外线灯快速检测，取饲料放在LEA-160L紫外线灯下观察，若能看到黄绿色荧光，即为有毒，若看不到荧光，可将饲料压碎后再放到LEA-160L紫外线灯继续观察，若仍看不到荧光，说明不带黄曲霉毒素。

当饲料中黄曲霉毒素含量大于1ppm时，可使所饲喂的畜禽中毒死亡，黄曲霉毒素中毒症以猪、鸡多见，其次为鸭和牛。黄曲霉毒素是黄曲霉菌和寄生曲霉菌的一种代谢产物，它普遍存在于自然界中，黄曲霉毒素也是是目前世界上最知名和最被深入研究的霉菌毒素之一。

(6)黄曲霉素检测方法扩展阅读：

黄曲霉素的去除措施：

1、碾磨搓洗

黄曲霉素在食品中分布极不均匀，在花生样品中以霉变、破损、长芽、皱皮及变色花生粒最为集中，只要将其拣除，毒素含量将大大降低，甚至低到无毒。碾磨加工可将大部分集中于米糠层和谷皮、胚层的黄曲霉素去除一大部分；搓洗可去除粮食表面的大量毒素。

2、吸附法

常用的吸附剂有沸石、活性白陶土、活性碳等。含有黄曲霉素的植物油可加活性白陶土或活性炭等吸附剂，毒素可被吸附而去毒，如广西用此法处理花生油，加入1.5%的白陶土，可使花生油中黄曲霉素由原来的100μg/kg降至10μg/kg。

3、辐射处理

黄曲霉素在紫外光照射下不稳定，可用紫外光照射去毒。该法去毒对植物油等液体食品效果较好，而对固体食品效果不明显。应用辐射法，必须注意照射的剂量和照射时间，以不影响食品的感官和理化性质为宜。

4、碱处理法

碱炼是油脂精炼的一种加工方法，在油脂中加入1%NaOH溶液，黄曲霉素内酯环即可破坏，形成香豆素钠盐。后者可溶于水，故加碱后再用水洗可将毒素去除。加碱水洗可使油中黄曲霉素降至标准以下，甚至不能检出。

5、有机溶剂萃取法

黄曲霉素为脂溶性毒素，易溶于有机溶剂，可用水合乙醇、异丙醇、丙酮、正己烷和水的混合物等进行提取分离、去毒。提取需反复3～5次，去毒效果可达90%以上，其中以丙酮和水（90∶ 100）混合液效果最好。处理后的粮油制品，必须将溶剂彻底挥干，方可食用。