厨房细菌检测方法

‘壹’ 如何做菌落检测

菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。
基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。
国内外菌落总数测定方法基本一致，从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同，只是在某些具体要求方面稍有差别，如有的国家在样品稀释和倾注培养进，对吸管内液体的流速，稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。
检验方法参见：
GB4789.2-94 《中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验 菌落总数测定》
SN0168-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品菌落计数》
三、说明
（一）样品的处理和稀释：
1．操作方法：以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1：10的均匀稀释液。
固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理1min，制成1：10的均匀稀释液。
用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液
的试管内，振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。
另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管。
2．无菌操作：操作中必须有“无菌操作”的概念，所用玻璃器皿必须是完全灭菌的，不得残留有细菌或抑菌物质。所用剪刀、镊子等器具也必须进行消毒处理。样品如果有包装，应用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。
操作应当在超净工作台或经过消毒处理的无菌室进行。琼脂平板在工作台暴露15分钟，每个平板不得超过15个菌落。
3．采样的代表性：如系固体样品，取样时不应集中一点，宜多采几个部位。固体样品必须经过均质或研磨，液体样品须经过振摇，以获得均匀稀释液。
4．样品稀释误差：为减少样品稀释误差，在连续递次稀释时，每一稀释液应充分振摇，使其均匀，同时每一稀释度应更换一支吸管。
在进行连续稀释时，应将吸管内液体沿管壁流入，勿使吸管尖端伸入稀释液内，以免吸管外部粘附的检液溶于其内。
为减少稀释误差，SN标准采用取10mL稀释液，注入90mL缓冲液中。
5．稀释液：样品稀释液主要是灭菌生理盐水，有的采用磷酸盐缓冲液（或0.1％蛋白胨水），后者对食品已受损伤的细菌细胞有一定的保护作用。如对含盐量较高的食品（如酱油）进行稀释，可以采用灭菌蒸馏水。

‘贰’ 食品安全检验中细菌总数的测定有哪几中方法

现在一般是用平板计数法，以前的标准是用营养琼脂，新标准时用平板计数琼脂。还可以用快速测试纸检验。前者比较普遍。

‘叁’ 进行菌种质量检测的常用方法有哪些

1、直接观察。对引进菌种观察包装是否合乎要求，棉塞有无松动，试管、玻璃瓶和塑料袋有无破损，棉塞和管、瓶或袋中有无病虫侵染，菌丝色泽是否正常，有无发生变化。然后在瓶塞边作深吸气，闻其是否具备特有的香味。原种和栽培种可取出小块菌丝体观察其颜色和均匀度，并用手指捏料块检验含水量是否符合标准。

2、显微镜检验。若菌丝透明，呈分枝状、有横隔、锁状联合明显，再加上具有不同品种固有的特征，则可认为是合格菌种。

3、观察菌丝长速。将供测的菌种接入新配制的试管斜面培养基上，置于最适宜的温、湿度条件下进行培养，如果菌丝生长迅速、整齐浓密、健壮有力，则表明是优良菌种，否则即是劣质菌种。

优质菌种的标准

食用菌的种类虽然繁多，但从总体上看，每一个优良菌种均有＂纯、正、壮、润、香＂的共性。其标准是：

1、菌种的纯度要高，不能有杂菌感染，也不能有其他类似的菌种。

2、菌丝色泽要纯正，多数种类的菌丝应纯白、有光泽，原种、栽培种菌丝应连结成块，无老化变色现象。

3、菌丝要粗壮，分枝多而密，接种到培养基吃料块，生长旺盛。

4、培养体要湿润，与试管（瓶）壁紧贴而不干缩，含水适宜。

5、具有每品种特有的清香味，不可有霉、腐气味。

‘肆’ 日本食品微生物检测方法

我这里有日本方面微生物检测方法
1. 菌落总数（标准琼胶平板菌数测定法）
在无菌袋（样品均质机用无菌袋）中称量10g被检样品，加入90ML灭菌生理盐水，在样品均质机上均质30秒至1分钟.将之做为试料原液。根据情况将原液稀至100倍，1000倍等。
在各灭菌培养皿中注入各阶段的稀释液1mL。然后将事先准备好的灭菌降温至45-50℃的标准琼胶培养基12-15mL注入灭菌培养皿，立即使稀释液和培养基充分混合均匀。待琼胶培养基完全凝固后，倒置培养皿，放入35±1℃的培养箱中，培养48±3小时后，算出所得菌落数计算出1g食品相当的菌数。
计算公式：1g食品相当的菌数=所得菌落数×10×混合液稀释倍数
2. 耐热性芽孢菌数
在无菌袋（样品均质机用无菌袋）中称量10g被检样品，加入90ML灭菌生理盐水，在样品均质机上均质30秒至1分钟.将之做为试料原液。取一定量（5ml或10ml）稀释液于灭菌带栓的试管，放入沸水中水浴10min后，使之冷却。取1ml稀释液按照上述菌落总数的方法进行操作和计算。
3. 大肠菌群数：
按照菌落总数的方法将调整后的稀释液1mL放入灭菌培养皿，注入加热溶解降温至50℃的Deso琼胶培养基约12-15mL，将其混匀。待培养基琼脂凝固后，再在固体的培养基上浇上一层Deso琼胶培养基（约5ml）;待培养基凝固后将培养皿倒置，放入35±1℃的培养箱内，培养20±2小时。然后按照菌落总数的计算方法进行计算。（红色菌落）
4. 霉菌及酵母菌：
按照细菌总数的方法将调整后的稀释液1mL放入灭菌的培养皿，注入降温至45-50℃薯仔Dextrose培养基12-15ml，将其混匀。倒置放入30℃培养箱中培养72±3小时（或25℃，5天）。然后按菌落总数的计算方法进行计算。

‘伍’ 病原微生物中细菌常见检测方法有哪些

1、快速测试片技术法

快速测试片是指以纸片、纸膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过微生物在上面的生长、显色来测定食品中微生物的方法。

细菌总数检测纸片的研制始于 20 世纪 80 年代，其主要优点是简便、实用、经济、操作性强。近年来以滤纸和美国某公司的 Petrifilm 为载体的测试片已开始被广泛应用。

2、生物电化学方法

生物电化学方法是指通过电极测定微生物产生或消耗的电荷，从而提供分析信号的方法。微生物在滋生代谢过程中，培养基的电化学性质如电流、电位、电阻和电导等会发生变化，所以可以通过检测分析这些电化学参量的变化来实现对微生物的快速测定。

常见的有：阻抗分析法、电位分析法、电流分析法等。生物电化学方法具有测量快速、直观、操作简单、测量设备成本低和信号的可控性等特点。

3、微菌落技术

微菌落是指细菌生长繁殖早期在固相载体上所形成的只能借助于显微镜观察的微小菌落。微菌落技术具有快速、经济、实用的特点，其研究始于 20 世纪50年代，定量测定技术从 20 世纪 70 年代开始，国外已有报道将该法应用于水、食品中细菌总数的快速检测。

4、气相色谱法

气相色谱应用到微生物的检测中，主要是依据不同微生物的化学组成或其产生的代谢产物各异，利用上述色谱检测可直接分析各种体液中的细菌代谢产物、细胞中的脂肪酸、蛋白质、氨基酸、多肽、多糖等，以确定病原微生物的特异性化学标志成分，协助病原诊断和检测。

5、高效液相色谱法

利用高效液相色谱检测可分析各种体液中的细菌代谢产物、病原微生物等，以确定病原微生物的特异性化学标志成分，协助病原诊断和检测。

‘陆’ 食品中致病菌的检测方法

痢疾杆菌其致病作用主要是侵袭力和毒素。病菌黏附于肠粘膜的上皮细胞内，继而生长繁殖并引起炎症，在内毒素的作用下使肠壁组织坏死，肠功能紊乱，以致出现毒血症。有些痢疾杆菌能产生肠毒素，导致肠炎。
致病性大肠杆菌的污染源是带菌动物（牛、羊、猪、鸡等）和病人及隐形带菌者。主要通过摄入污染该菌的动物性食品导致发病，或者严重污染饮水和其他食品污染及食物链的交叉污染也可导致发病。
伤寒和副伤寒病人和健康带菌者是沙门氏菌的传染源。病菌随粪尿排出体外，通过污染的食物、饮水、手、食具或经蝇、蟑螂等媒介污染食物，经口感染。食物或水源污染可导致暴发流行。
霍乱弧菌的传染源是病人或健康带菌者，隐性感染者和症状较轻的患者呈间歇排菌，危害性比重症患者更大。病菌随粪便及呕吐物排出，污染饮用水、食物和环境，并通过水、手、污染的食物、食具、蝇、蟑螂等媒介而经口感染。感染人体后，能吸附于肠粘膜表面，并大量繁殖，其内毒素损害肠粘膜，外毒素引起肠液分泌过度增加，发生腹泻，大量丢失肠液，产生严重脱水、酸中毒及电解质紊乱。
炭疽杆菌其致病原因是炭疽杆菌产生的毒素（致死毒素和水肿毒素），人的皮肤伤口通过直接接触病畜的血液、分泌物、排泄物以及被污染的皮、毛、骨粉等，可引起皮肤炭疽；经口摄入病畜肉类以及被细菌污染的食物和水等，可引起肠型炭疽；吸入带有炭疽芽孢的尘埃，可引起肺炭疽。

‘柒’ 如何检测物体的表面细菌数量

1）先测量餐盒内的总表面积
2）在餐盒内固定大小的面积上（比如1平方厘米）用无菌棉签（先在无菌水中沾湿）取样
3）将棉签浸在固定体积的无菌水中洗脱样品中可能存在的细菌
4）利用平板计数法测定样品液中细菌数
5）37度培养后，计数平板上的细菌菌落数，并根据稀释度、取样面积、餐盒内总面积等，计算出餐盒中细菌总数

‘捌’ 食品微生物检验内容与检测技术方法

食品微生物检验内容与检测技术方法

近年来，世界各地出现了诸多严重的食品安全事故，由于食品微生物污染而造成的质量事故严重威胁着人们的身体健康，如何做好食品微生物检验，确保食品质量安全，就需要社会各界共同努力。根据国际和国内卫生组织的相关规定和要求，所有的食品生产厂商都要对食品的质量进行严格的检验，对于生产出来食品的菌落种类、细菌数量、大肠菌群、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等进行检测，必须达到要求的合格标准才能进入市场进行出售。下面是我为大家带来的食品微生物检验内容与检测技术方法的知识，欢迎阅读。

需要注意的问题

一是工作人员及活动规定。必须保证参加检测的人员具有相应的资格，并通过相关的考试后，持证上岗才能开展相关活动。同时要求工作人员不仅需要具有高超的专业技术，还应该有良好的职业道德修养，尽可能降低人为问题的制约。检测过程需要按照相关的活动规范和流程进行，使用无菌设备认真地进行抽样活动，采用先进技术获取相关信息。二是存放装置。若想检测过程顺利进行，除了确保实验室有必要的设施外，还应该重点考虑装置存放的条件和要求。三是装置和药品的配置。在各项装置进行安装时应该对气温进行调节，确保其安稳，对装置气温稳定性合乎规定要用的具体时间详细记录。同时在规定的时间内对各种装置进行消毒处理，并通过感应设备对其运作状态进行监测。对于药品的配置，培养基往往在121℃下采用高压湿热灭菌法灭菌15分钟;较为敏感的'培养基一般采用膜过滤法。四是样本的处理。在样本收集过程中，需要确保抽样活动是在无菌环境下展开的，有效避免了样本被污染。在样本输送时，应该防止样本受到光线的影响而出现污染现象，抽样之后就应该及时将其送至测试场地。一般样本输送时间要控制在3h内，如果无法及时送到，要确保在近乎之前的气温时将其完整的存放。

食品微生物检验内容

一是检验食品污染程度指示菌。细菌总数即菌落总数，是食品和生活饮用水检样处理后，在特定培养条件下，所得1g或者1mc检样中所含有的细菌菌落个数，这就是判断食品和生活饮用水污染程度的关键指标。大肠菌群系是在37℃下培养24h的一群发酵乳糖、产气、产配以及需氧或者厌氧的革兰氏染色阴性无芽胞杆菌。这种菌群主要来源于人和牲畜的粪便，因此，可以用粪便的污染指标菌对食品的卫生质量进行评价。二是检测食品中治病菌。在食品微生物相关检验标准中已经明确规定某些微生物的数量，因此在对食品污染程度指示菌检测的同时，还应该对一些治病菌进行测定，如沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等。

食品微生物检测技术方法

很长时间以来，开展的此项检测活动，是按照琼脂平板的措施来进行的，通常要两到三天的时间才可以完成。最近，许多的专家和组织都不断地对工艺以及措施进行深化分析，获取了非常高的成就，对许多措施进行了改进，切实提升了检测的精准性以及安稳性特征，而且获取了许多全新的工艺，具体有如下的措施：

1.采用电阻抗法。具体的讲，它是指细菌繁衍的时候，将会使培养基中的火分电惰性物质如碳水化合物、蛋白质和脂类等，代谢为具有电活性的小分子物质，其能增加培养基的导电性，进而导致阻抗出现改变，因此，可以通过检测培养基的电阻抗变化情况来判定细菌在培养基中的生长繁殖特性，即可检测出相应的细菌。

2.采用快速酶触反应及代谢产物的检测。细菌在生长繁殖过程中可合成和释放某些特异性的酶，所以根据其特性来选用相对应的底物和指示剂，而且合理的记载信息。

3.采用分子生物学技术。它涵盖两项内容：1)核酸探针技术。结合碱基互补相关的概念，使用独特的措施来对物体进行标注。2)聚合酶链式反应(PCR)技术。其原理为通过加热使双链DNA经裂解成两条单链，成为引物和DNA聚合酶的模板;接下来把气温变低，使寡聚核苷酸引物与DNA分子上的互补序列退火。通常状态中，当退火的气温非常高的话，它的扩增特性就十分的优秀。

4.采用免疫学方法检测细菌抗原和抗体的技术。具体有三项措施：1)荧光抗体检测技术(IFA)，它又有两种，分别是直接的以及间接地。其中第一种是直接在样本上滴加已知特异性荧光标记的抗血清，然后对其清洗，进而获取信息。而后一种措施是在检样上滴加已知细菌特异性抗血清，等到发生反映之后再仔细地清洗，再加入荧光标记的抗体后在荧光显微镜下观察结果。2)免疫酶技术(EIA)，其是将抗原、抗体特异性反应和酶的高效催化作用原理结合，此法非常的独特，而且功效非常好。通过共价结合将酶与抗原或抗体结合，形成酶标抗原或抗体，或通过免疫方法使酶与抗酶抗体结合，形成酶抗体复合物。3)免疫磁珠分离法(IMS)，即应用抗体包被的免疫磁珠，用一个磁场装置收集铁珠。

5.采用仪器法。1)微型全自动荧光酶标分析仪(Mini-VIDAS)，其主要采用具有优异的敏感性和特异性的酶联荧光技术(ELFA)，得到的荧光和抗原的比例是一种顺向的关系。2)全自动微生物分析系统(Vietk-AMS)。它能够一次对非常多的样本开展分析，而且检测的时间不需要非常久，通常在两到三个小时即可，此法的效率非常好，同时也将成为检测行业全行的发展趋势。

‘玖’ 评价食品卫生质量的细菌污染指标及检测方法

食品中的细菌(包括非致病菌、 条件致病菌和致病菌)，有些是造成食品腐败变质的直接因素。因而常把污染食品的细菌总数、大肠菌群或大肠杆菌、肠球菌作为评价食品卫生质量的重要指标。
细菌总数，是指该食品上每个活菌细胞在培养基上生成肉眼可见的菌落。即菌落总数来表示。这种“细菌总数”实际上仅指活的杂菌，它可以作为食品污染的程度和新鲜度指标，是判断食品卫生质量的一项重要依据。
大肠菌群或大肠杆菌:大肠菌群以大肠杆菌为主，包括产气肠细菌和一些中间类型的细菌。大肠菌群来自人和温血动物的肠道，一般无病原性。据估计，成人每日从粪便中排出的大肠菌群细菌多达每克粪便中含有1千万≈1万万个。若水或食品中发现大肠菌群的细菌，则表示水或食品被人和温血动物粪便所污染，而有粪便的污染就可能有肠道病原菌(伤寒杆菌、痢疾杆菌等)。因此大肠菌群或大肠杆菌可以作为肠道致病菌污染食品的指标菌。食品中大肠菌群的污染程度常用菌量表示。
肠球菌:肠球菌是链球菌属中一群革兰氏阳性球菌，呈长链状或短链状。与食品有关的链球菌，主要是粪链球菌和粪渣链球菌。肠球菌主要来源于粪便。过去和现在，大肠菌群或大肠杆菌长期以来作为粪便污染的指标细菌，广泛应用于一-般食品的常规细菌检验。但是这类细菌是嗜温菌，在低温、冰冻状态下容易死亡，这就降低了它应有的指标作用。将具有抵抗冰冻力的肠球菌作为指标细菌，用于冷冻食品的细菌检验，指标效果要优于大肠菌群，但检验方法要复杂得多食品卫生标准中，这三种不同的细菌指标，其卫生学意义不同，它们既有联系，又有区别，应根据实际情况加以应用，以对食品卫生质量作出正确的判断。
针对这一系列食品安全卫生标准检控，冠宇仪器微生物致病菌检测箱是我公司根据市场需求设计的一种专门针对微生物致病菌研制的检测箱，箱内配有齐全的采样工具、各类细菌类检测速测盒（菌落总数测试片、大肠杆菌大肠菌群测试片、食品大肠菌群测试片、餐饮具大肠菌群检测是纸片、霉菌、酵母菌测试片、沙门氏菌测试片、金黄色葡萄球菌测试片、大肠杆菌O157测试片、副溶血弧菌测试片、阪崎肠杆菌测试片、蜡样芽胞杆菌测试片、水中大肠菌群检测试剂盒等）、以及加厚铝合金外框，坚固耐用满足食品微生物采样检测需求。