大肠杆菌检测微生物方法

① 食品中大肠杆菌的检测

用大肠杆菌显色培养基，检测原理：蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化钠可维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂;十二烷基硫酸钠抑制革兰氏阳性菌;混合显色底物分别与大肠菌群和大肠杆菌所对应的酶发生特异性反应，水解底物，释放出显色基团，在淡黄色平板上大肠菌群产生橙红色的菌落，大肠杆菌产生蓝绿色的菌落。
资料出自环凯官网。

② 菌落总数大肠杆菌和致病菌的检测方法

菌落总数用平皿法,单位是个/ml(每毫升或毫克里面有多少的完整的菌落),方法是:在无菌操作的前提条件下,吸取1ml的原液加入到9cm的平皿里,在倒入3-5ml(37℃)的营养琼脂,在37℃的温箱里培养24小时,取出来计算它的菌落单位总数就行.
大肠杆菌用发酵法,单位是MPN/100ml(每100毫升或毫克的样品里面最大可能菌落形成单位)方法是15管法(适合食品)或9管法(适合非食品如游泳池水),用乳糖胆盐发酵管
致病菌用培养法,只要符合相应的化学，生物试验就可以判断为某致病均阳性

③ 大肠杆菌检测方法国标是用什么方法检测的

大肠杆菌检测方法分为三种：

1、细菌分离鉴定法

分离培养与鉴定：粪便标本直接接种肠道杆菌选择性培养基。血液先经肉汤增菌，然后转种血琼脂平板。其他标本同时接种血琼脂平板和肠道杆菌选择性培养基。

37℃孵育18～24小时后，观察菌落涂片染色镜检。肠致病性大肠杆菌须先作血清学定型试验。必要的时候检定肠霉毒素。

2、卫生细菌学检查法

大肠杆菌会不断随粪便排出体外，污染周围环境水源、食品等。取样检查时，样品中大肠杆菌越多，则表示样品被粪便污染的越严重，表明样品中存在肠道致病菌的可能性也就越大。

大肠菌数指数：指每立升中大肠菌群数，采用乳糖发酵法检测。中国卫生标准是每1000ml饮水中不得超过3个大肠菌群，瓶装汽水和果汁中每100ml大肠菌群不能超过5个。

3、全自动微生物定量分析仪（TEMPO）检测法

全自动微生物定量分析（TEMPO）仪大肠杆菌群计数检测有TEMPOTC和TEMPOCC两种方法。

TEMPOTC的开发是为获得NF ISO4832标准相当性能水平。

TEMPOCC法是TEMPO仪器上根据BAM方法专门用于24h计数食品中大肠杆菌群方法。

(3)大肠杆菌检测微生物方法扩展阅读：

大肠杆菌在生物技术中的应用

这些菌株由于失去了细胞壁等重要组分，所以在自然条件下已无法生长。甚至普通的清洁剂都可以轻易地杀灭这类菌株。即便由于操作不慎导致活菌从实验室流出，也不易导致生化危机。

生物工程用的菌株基因组都被优化过，使之带有不同基因型（例如β半乳糖苷酶缺陷型），可以更好的用于分子克隆实验。

真核基因在大肠杆菌中表达，必须有合适的表达载体(Vector),常用载体：pBV220,pET系统。

目的基因在大肠杆菌中表达的情况：

大肠杆菌更适合原核基因的表达，外源基因表达产量与单位体积产量是正相相关的，外源基因拷贝数和表达 产物产量之间存在动态平衡，单个细胞的产量又与外源基因拷贝数，基因表达效率，表达产物的稳定性和细胞代谢负荷等因素有关。

④ 食品卫生微生物学检验.大肠菌数测定

微生物
一、大肠菌群的检测GB4789.3-2010
第一法 大肠物宽察菌群MPN计数法 第二法 大肠菌群平板计数法

1.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤:称取35.6g溶于1000ml蒸巧拆馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10ml，121℃高压灭菌15min后备用。双料除蒸馏水外其他成分加倍。

1.2煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤：称取30g溶于1000ml蒸馏水中分装 ，经115℃15min高压灭菌备用。

1.3无菌生理盐水：称取8.5gNaCl溶于1L蒸馏水中。分装于250ml的锥形瓶中，121℃高压灭菌15min后备用
1.4结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）：称取41.6g溶于1L蒸馏水中，充分摇匀，加热煮沸2min冷却至50℃，倾注平板。

无菌 1 mol/L NaOH：称取40 g氢氧化钠溶于1 000 mL蒸馏水中，121 ℃高压灭菌15 min。

无菌 1 mol/L HCl：移取浓盐酸90 mL，用蒸馏水稀释至1 000 mL，121 ℃高压灭菌15 min。

二、大肠菌群的检测GB4789.3-2003 第一法 大肠菌群MPN计数法

2.1称取乳糖胆盐发酵培养基35.0g溶于1000ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10ml，115℃高压灭菌15min后备用。双料除蒸馏水外其他成分加倍。

2.2伊红美蓝琼脂平板：称取伊红美蓝琼脂37.5g溶于1000ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装、115℃高压灭菌15min后备用。

2.3乳糖发酵管：称取乳糖发酵培养基35.0g溶于1000ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10ml，115℃高压灭菌15min后备用

2.4无菌生理盐水：称取8.5gNaCl溶于1L蒸馏水中。分装于250ml的锥形瓶中，121℃高压灭菌15min后备用
2.5革兰氏染色按GB/T4789-2003中罩茄2规定。

⑤ 鸡大肠杆菌病微生物学诊断方法

实验室诊断
１．２．１
普通营养琼脂平板，３７℃培养１８～２４ｈ，而后进行纯化培养。挑取分离培养的单菌落，进行革兰氏染色、镜检。用灭菌接种环勾取少许纯培养物接种于各种生化培养基中，３７℃培养１８～２４ｈ后观察结果。将细菌纯培养物用无菌生理盐水洗下，稀释成３×１０１１个／ｍｌ的菌悬液，用无菌棉拭子蘸取稀释液均匀涂布于普通平板，经室温干燥３～５ｍｉｎ后，每块平板贴药敏纸片３片，３７℃培养１８～２４
２２．１
ｈ。
结果
剖检病变
剖检可见病鸡胸腔、腹腔内有大量
黄色干酪样渗出物；心包积液，心脏有纤维素性渗出物；肝脏肿大，表面瘀血，有纤维素性渗出物；肺脏瘀血，表面的纤维素性渗出物明显；气囊混浊、变厚；肾瘀血、质脆，一触即烂；脾脏瘀血。
２．２病理组织学变化镜下观察，可见肝脏有蛋白质纤维膜，肝细胞变性，窦状隙内红细胞增多，肝脏瘀血（图１）；肾脏病变比较严重，肾小管上皮细胞坏死，脱离基底膜，肾小管管腔内混有脱落的上皮细胞和渗出物（图２）；肺表面肺泡细胞塌陷，外有蛋白质纤维膜，肺血管内有大量红细胞聚集，肺瘀血
（图３）。
病理剖检对送检的２５只病死鸡进行了病
取病死鸡心、肝、脾、肺、
理剖检及大体病变的观察。１．２．２组织病理学检查
肾等器官病健交界处部分组织块，置于１０％福尔马林中固定，经乙醇脱水后，二甲苯透明、浸蜡，将组织在ＢＭＪ一１生物组织包埋机下包埋成石蜡块，用ＡＯ一８２５０型组织切片机切片，厚度为５肛ｍ，ＨＥ染色，显微镜观察并照相。

⑥ 求教 大肠杆菌 和 金黄色葡萄球菌 的一般的实验室检测方法

大肠杆菌：
大肠杆菌也是有MPN法的，方法是GB5750.12-2006，见“大肠埃希氏菌多管发酵法”，定性也可以参照。如果你只是要鉴定大肠杆菌，不考虑一定要使用国家标准方法，就用普通的办法，分离单个菌落然后生化鉴定吧。

金黄色葡萄球菌：
这个检测标准很多呀，比如GB4789.10-2010（定性定量都有）、GB/T18204.7-2000（定性）、GB15892-2012（定性）