血浆八因子和九因子检测方法

⑴ 第八因子的测定法

根据中华人民共和国药典三部 附录X N 人凝血因子VIII测定法（一期法）
本法系用人凝血因子VIII缺乏血浆为基质血浆，采用一期法测定供试品人凝血因子VIII效价。
试剂
⑴3.8%枸橼酸钠9.5g，加水溶解并稀释至250ml。
⑵咪唑缓冲液（pH7.3）取咪唑0.68g和氯化钠1.17g，加水使溶解成100ml，加入0.1mol/L盐酸溶液42.2ml，再加水稀释至200ml，即得。
⑶稀释液 取一体积的3.8%的枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合，加适量20%人血白蛋白至终浓度为1%
⑷激活的部分凝血活酶（APTT）试剂
⑸人凝血因子VIII缺乏血浆 为人凝血因子VIII含量低于1%的人血浆或人工基质血浆
⑹0.05mol/L氯化钙溶液 取氯化钙（CaCl2·2H2O）147g，加水溶解并稀释至1000ml，配制成1mol/L的氯化钙贮存液，用前用水稀释20倍，配制成0.05mol/L氯化钙溶液。
标准液的制备
用人凝血因子VIII缺乏血浆将标准品稀释成每1ml含1IU凝血因子VIII，再用稀释液分别进行10倍、20倍、40倍和80倍稀释，置冰浴待用。
供试品溶液的制备
用人凝血因子Ⅷ 缺乏血浆将标枝皮准品稀释成每1ml含1IU凝血因子Ⅷ，再用稀释伍猛液进行10倍和20倍或40倍稀释，置冰浴待用。 取激活的部分凝血活酶试剂0.1ml，置37℃水浴保温一定时间（一般4min），加入凝血因子Ⅷ缺乏血浆0.1ml、供试品溶液0.1ml，混匀，置37℃水浴保温一定时间（一般5min），加已预热至37℃ 0.05mol/L氯化钙溶液0.1ml，记录凝固时间。
用不同稀释度的人凝血因子Ⅷ标准猛橘差溶液0.1ml替代供试品溶液，同法操作。
将标准溶液人凝血因子Ⅷ效价（IU/ml）的对数对其相应的凝固时间（秒）的对数进行直线回归处理，求出直线回归方程。计算供试品溶液人凝血因子Ⅷ效价，再乘以稀释倍数，即为供试品人凝血因子Ⅷ效价（IU/ml）。

⑵ 常用的细胞因子检测方法有哪些

（1）生物学检测法：又称生物活性检测，是根据细胞因子特定的生物活性而设计的检测法。生物活性检测法又可分为： 1、细胞增殖法； 2、靶细胞杀伤法； 3、细胞因子诱导的产物分析法； 4、细胞病变抑制法。
（2）免疫学检测法：细胞因子均为蛋白或多肽，具有较强的抗原性，可利用抗原抗体特异性反应的特性，用免疫学技术定量检测细胞因子，常用的方法包括ELlSA、RlA及免疫印迹法
（3）分子生物学方法：目前公认的细胞因子的基因均已克隆化，较容易地得到某一细胞因子cDNA探针或根据已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探针。常使用斑点杂交、Northernblot、逆转录PCR，细胞或组织原位杂交等。具有灵敏、快速等优点，甚至从l～10个细胞中就可检出其中的特异mRNA