检测细胞增殖的方法

A. MTS法测定细胞增殖的原理该方法与MTT法有何不同

MTS法原理：被测物质溶液的颜色或加入显色剂后生成的有色溶液的颜色，颜色深度和物质含量成正比，则根据光被有色溶液吸收的强度，即可测定溶液中物质的含量。

跟MTT法区别如下：

一、指代不同

1、MTT法：利用有色物质对特定波长光的吸收特性来进行定性分析的一种方法。

2、MTS法：是一种检测细胞存活和生长的方法。

二、原理不同

1、MTT法：为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。

2、MTS法：以生成有色化合物的显色反应为基础，比色分析对显色反应的基本要求是：反应应具有较高的灵敏度和选择性，反应生成的有色化合物的组成恒定且较稳定，它和显色剂的颜色差别较大。选择适当的显色反应和控制好适宜的反应条件，是比色分析的关键。

三、用途不同

1、MTT法：方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。

2、MTS法：采用具有分光系统(单色器)及检测器的分光光度计，使测定结果准确、省时，选择性好。

B. 检测细胞增殖的种类以及方法步骤

主要有四种，方法步骤如下

一、胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）渗入法
胸腺嘧啶核苷（TdR）是DNA特有的碱基，也是DNA合成的必需物质。用同位素3H标记TdR即3H-TdR作为DNA合成的前体能掺入DAN合成代谢过程，通过测定细胞的放射性强度，可以反映细胞DAN的代谢及细胞增殖情况。但是具有放射性。
二、MTT检测法
MTT检测法主要反映细胞的能量代谢，是检测细胞增殖活力的一种简便准确的方法，其原理是在活细胞生长和增殖过程中，线粒体内的脱氢酶可将黄色的MTT分解成兰紫色的甲（Formazan），生成的甲量的多少与细胞的数量和细胞的活力成正比
三、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）检测法
羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，使C E成为一种良好的细胞标记物。CFSE进入细胞后可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上。当细胞分裂时，CFsE标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半。这样，在一个增殖的细胞群中，各连续代细胞的荧光强度呈对递减，利用流式细胞仪在488nm激发光和荧光检测通道可对其进行分析。
四、Br检测法
Br中文全名5-溴脱氧尿嘧啶核苷，为胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期），活体注射或细胞培养加入，而后利用抗Br单克隆抗体，ICC染色，显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义。

C. 植物细胞增殖用什么方法检测

植物细胞可进行：有丝分裂、无丝分裂和减数分裂植物的大多数体细胞形成与有丝分裂有关无丝分裂在低等植物中普遍存在,在高等植物中也常见.高等植物营养丰富的部位,无丝分裂很普遍.如胚乳细胞（胚乳发育过程愈伤组织形成）、表皮细胞、根冠,总之薄壁细胞占大多数；减数分裂在形成配子的过程中发生

D. 二苯乙烯苷的细胞增殖实验能用cck检测吗

二苯乙烯苷的细胞增殖实验能用cck检测
细胞增殖的研究方法有很多，主要包括：BrdU，EdU，CCK8等方法。其中EdU检测方法是最新的细胞增殖检测方法。
EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替T渗入正在复制的DNA分子，通过基于EdU与Apollo®荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性，通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。与BrdU检测方法相比，EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内很容易扩散，无需DNA变性（酸解、热解、酶解等）即可有效检测，可有效避免样品损伤，在细胞和组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象。

E. BrdU检测细胞增殖的方法有哪些

细胞增殖的检验方法：BrdU标记法

1、细胞以1.5×105 /ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0 期。

2、终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。

3、弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。

4、甲醇/醋酸固定10min。

5、经固定的玻片空气干燥，0.3％H2 O2 -甲醇30min灭活内源性氧化酶。

6、5％正常兔血清封闭。

7、甲酰胺100℃，5min变性核酸。

8、冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠BrdU单抗（工作浓度1：50），阴性对照加PBS或血清。

9、按ABC法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数，计算标记指数（LI）。

F. MTS法测定细胞增殖的原理该方法与MTT法有何不同

MTS检测方法是检测细胞增殖、细胞毒性的常用方法。具体方法：
细胞生长检测：MTS检测法
1．培养IL-2依赖细胞株CTLL-2细胞或HT-2细胞（检测IL-2），或者IL-3依赖细胞株FDC-P1细胞或FL5.12细胞（检测IL-3）到对数生长期。
2．取96孔细胞培养板，每孔加0.1ml含1×104～2×104上述细胞之一的DMEM培养液（加10％小牛血清）。
3．每孔加0.1ml系列稀释的待测细胞因子（IL-2或IL-3）样品或细胞因子标准品，在37℃
5％
CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养24小时。
4．每孔加20μl
MTS/PMS混合液，继续培养3～4小时显色。
5．检测前摇晃培养板10秒钟，混匀颜色。在酶联检测仪上，波长570nm（或490nm，或570nm和690nm）处检测各孔的光吸收值（OD）。用样品稀释度对OD值（OD570、OD490或OD570/OD690）绘制剂量-反应曲线，根据标准品曲线计算样品中细胞因子的量。

G. 怎样检测细胞的生长，存活及增殖

BrdU标记法
1．细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％ FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0期。
2．终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。
3．弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。
4．甲醇/醋酸固定10min。
5．经固定的玻片空气干燥，0.3％H2O2-甲醇30min灭活内源性氧化酶。
6．5％正常兔血清封闭。
7．甲酰胺100℃，5min变性核酸。
8．冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠BrdU单抗（工作浓度1：50），阴性对照加PBS或血清。
9．按ABC法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数，计算标记指数（LI）。
结晶紫法
1．体外细胞培养结束后，去培养液，加入11％的戊二醛固定，置于振荡器上摇20min。
2．固定细胞用去离子水洗涤至戊二醛液洗净。
3．置空气或烘箱37℃彻底干燥。
4．加入0.1％的结晶紫液对细胞染色，振摇30min。
5．用蒸馏水洗涤，至多余的结晶紫液冲洗干净。
6．置空气或37℃烘箱中彻底干燥。
7．加入10％的乙酸对细胞吸收的结晶紫进行提取。
8．1h后在酶标仪上测定光吸收度，波长595nm。
酸性磷酸酶法
1．96孔细胞培养板中培养细胞，去培养液。用0.01mol/L PBS洗涤1次（如为悬浮细胞则用离心洗涤）。
2．去洗涤液后加入磷酸酶底物100μl/孔。
3．37℃，孵育1～4h。
4．加入0.1mol/L氢氧化钠10μl/孔。
5．在多孔酶标仪上405nm处测光吸收度，将细胞培养板其中不含细胞，同样处理过的一孔作为空白对照，所测的每孔光吸收度可间接反应每孔中的细胞数。如在同样条件下作一细胞数的系列标准对照，以细胞数为X轴，光吸收度为Y轴，可作直线回归，可推算出每孔中的细胞。

H. 成骨细胞增殖分化的检测方法有哪些

成骨细胞增殖分化的检测方法有哪些
(1)骨髓克隆形成单位(成纤维细胞集落形成单位，CFU-F)；
(2)骨软骨祖细胞，可分化成骨祖细胞和前软骨细胞谱系，常位于骨髓腔中，有很强的自身增殖能力；
(3)前成骨细胞，即骨祖细胞，能定向分化成成骨细胞，具有合成和增殖能力[1，2]。成骨细胞由多能的间质干细胞在体内的各种调控因素的调节下发展而来，调控因素主要有BMP-2，BMP-2能诱导基质细胞向成骨细胞分化，具体就是诱导间质干细胞分化形成骨祖细胞进而形成前成骨细胞。

I. 检测细胞增殖的方法有哪些

一、MTT比色：
MTT比色是一种目前被广泛采用的检测细胞生长和存活的方法，其原理是外源性MTT（四唑盐）可被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原成难溶的蓝紫色结晶物并沉淀在细胞中，而死细胞无此功能，DMSO（二甲基亚砜）能溶解细胞中的紫色结晶物，用酶联检测仪在490nm波长处检测其光密度值，可间接反映活细胞数量。在一定范围内，MTT结晶物形成的量与细胞数成正比，此方法已广泛用于检测细胞活力、观察细胞生长等方面，具有灵敏度高、重复性好、操作简便、经济、快速、易自动化、无放射性污染等特点，与细胞计数有良好的相关性。
二、rdU标记法
1．细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％ FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0期。
2．终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。
3．弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。
4．甲醇/醋酸固定10min。
5．经固定的玻片空气干燥，0.3％H2O2-甲醇30min灭活内源性氧化酶。
6．5％正常兔血清封闭。
7．甲酰胺100℃，5min变性核酸。
8．冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠BrdU单抗（工作浓度1：50），阴性对照加PBS或血清。
9．按ABC法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数，计算标记指数（LI）。
三、结晶紫法
1．体外细胞培养结束后，去培养液，加入11％的戊二醛固定，置于振荡器上摇20min。
2．固定细胞用去离子水洗涤至戊二醛液洗净。
3．置空气或烘箱37℃彻底干燥。
4．加入0.1％的结晶紫液对细胞染色，振摇30min。
5．用蒸馏水洗涤，至多余的结晶紫液冲洗干净。
6．置空气或37℃烘箱中彻底干燥。
7．加入10％的乙酸对细胞吸收的结晶紫进行提取。
8．1h后在酶标仪上测定光吸收度，波长595nm。
四、酸性磷酸酶法
1．96孔细胞培养板中培养细胞，去培养液。用0.01mol/L PBS洗涤1次（如为悬浮细胞则用离心洗涤）。
2．去洗涤液后加入磷酸酶底物100μl/孔。
3．37℃，孵育1～4h。
4．加入0.1mol/L氢氧化钠10μl/孔。
5．在多孔酶标仪上405nm处测光吸收度，将细胞培养板其中不含细胞，同样处理过的一孔作为空白对照，所测的每孔光吸收度可间接反应每孔中的细胞数。如在同样条件下作一细胞数的系列标准对照，以细胞数为X轴，光吸收度为Y轴，可作直线回归，可推算出每孔中的细胞。

J. 检测细胞增殖的实验方法的选择

1、灵敏度高，增殖是DNA才复制增多，检测DNA含量变化最可靠。