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丙氨酸氨基转移酶检测方法速率

发布时间:2023-10-14 20:31:02

1. 丙氨酸转氨酶(ALT)的实验室检测方法

ALT即是以前的谷氨酸丙酮酸转移酶(GPT)是肝功能检查的项目。方法有:1、终点法(Karmen法)2、速率法(37度)

2. 丙氨酸底物法原理

丙氨酸氨基转移酶活性的测定方法有丙氨酸底物法、丙氨酸底物-丙酮酸氧化酶法和2,4-二硝基苯肼法等[1]。
丙氨酸氨基转移酶活性的测定方法目前主要为丙氨酸底物法。本法采用的原理是在ALT的催化下,L-丙氨酸的氨基转移至α-酮戊二酸,生成丙酮酸和L-谷氨酸。丙酮酸与NADH在LDH的催化下反应生成乳酸和NAD+。NADH在特定波长(如:340nm处)有特异吸收峰,其氧化的速率与血清中ALT的活性成正比,在此波长处测定NADH吸光度下降的速率,即可计算出ALT活性。
丙氨酸底物-丙酮酸氧化酶法采用的原理为[2]:
2,4-二硝基苯肼法采用的原理为:
丙氨酸氨基转移酶催化丙氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移反应,二硝基苯肼与α-酮酸反应,生成相应的二硝基苯腙,在碱性条件下,二硝基苯腙的吸收光谱有差异,通过酶标仪检测在500-520nm处差异最大,以等摩尔浓度计算出丙酮酸的生成量,进而计算酶的活性。

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