① 植物激素提取的方法
例如:
提取与测定激素时称取0.5 g玉米叶片,去中脉,加2 mL样品提取液(80%甲醇,内含1.0 mmol·L-1二叔丁基对甲苯酚),在冰浴中研磨成匀浆,转入10mL试管,再用2 mL提取液分次将研钵冲洗干净,一并转入试管中,摇匀放在4 ℃冰箱中静置4 h后,以1000×g离心15min,取上清液过C-18固相萃取柱,再将过柱后的样品转入10mL塑料离心管中,氮气吹干后储于-20℃下备用。测定参照何钟佩(1993)书中方法用间接酶联免疫吸附分析法检测脱落酸(ABA)、玉米素核苷(ZR)、生长素(IAA)茉莉酸甲酯(MeJA)和赤霉素(GA3)的含量。
酶联免疫吸附分析间接法常用于检测抗体,一般之操作步骤为:
将已知之抗原固着于塑胶孔盘上,完成后洗去多余之抗原加入待测检体,检体中若含有待测之一次抗体,则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结洗去多余待测检体,加入带有酵素之二次抗体,与待测之一次抗体键结洗去多余未键结二次抗体,加入酵素受质使酵素呈色,藉仪器(ELISA reader)测定塑胶盘中的吸光值(OD值),以评估有色终产物的含量即可测量待测抗原的含量。
② 植物RNA提取方法有哪些
植物提取物的提取方法
目前提取植物提取物常用的方法有溶剂提取法、超声波提取法、微波提取法和酶提取法,而超临界流体萃取法、微波辅助提取法等则作为新的提取技术被广泛使用。
溶剂提取法
溶剂提取法是用溶剂从固体原料中提取有效成分,所用的溶剂必须具备与所提取的溶质互溶的特性。将植物材料粉碎后,放入适合的容器内,加入数倍量溶剂,可采用浸渍、渗漉、煎煮、回流和连续提取法进行提取。巴科的丹参提取物就是用溶剂提取法提取的,精油类物质就是用溶剂提取法。
在溶剂提取法的提取工艺过程中,溶剂的浓度、料液比、提取温度、提取的时间会直接影响有效成分的提取率。Cristina Juan等人通过溶剂萃取法提取大米中的赭曲霉素A,用荧光探测法和液相色谱法确定OTA的含量,研究表明在最适宜的料液比、提取温度和提取时间的情况下,提取物OTA含量最高为4.17ng/g。Monte D. Holt等采用溶剂萃取法从生的和熟的小麦种提取烷基间苯二酚,实验表明采用溶剂萃取法能够节约提取时间。
超声波提取法
超声波提取是利用超声波产生的强烈振动和空化效应加速植物细胞内物质的释放、扩散并溶解进入溶剂中,同时可以保持被提取物质的结构和生物活性不发生变化。超声波提取原理主要为物理过程,是近年来逐渐受到重视的一个较新的提取方法。对多数成分来说,超声波提取方法较常规的溶剂提取能大幅地缩短提取时问,消耗溶剂少,浸出率高,因此具有较高的提取效率。
在超声波法提取工艺过程中,溶剂的选择和浓度、料液比、提取温度、提取的时间会直接影响提取率。Ling Zhou等人利用超声波提取法提取五味子,主要研究了超声提取率的影响因素,实验研究得出,提取率随着温度的升高而升高,随着功率的增大而增大。Hong Van Le等利用超声波提取樱桃中的维生素E和酚类化合物,主要比较了超声提取法和酶提取法在提取时间、提取率上的差异,实验结果表明超声波提取法时间上比酶提取缩短了6倍,超声波提取的提取率是酶提取的2~3倍。钟爱国等利用超声波萃取鲜竹叶中叶绿素的方法,用分光光度计来定量测定所萃取的叶绿素的含量。结果表明:与常用的有机溶剂提取法相比,超声波萃取法不仅萃取率高、速度快、效率高,而且是室温提取,无需加热,节约能源。
③ 如何鉴别掺假的植物提取物产品
1、添加提取自其他植物的成分 产品举例:大豆提取物 通过添加染料木素的方法使低含量产品达到40%总异黄酮的规. 有感于近年来植提产品造假越来越严重,市场形象很差的现状,本人根据自己的一些经验,谈一些常见的造假手段,希望能帮助大家一起提高。 1、添加提取自其他植物的成分 产品举例:大豆提取物 通过添加染料木素的方法使低含量产品达到40%总异黄酮的规格 也有加廉价的芦丁提高总黄酮含量的(如:山楂果提取物、水皂角提取物) 鉴别方法:紫外检测的总黄酮类产品尽量采用 hplc 进行定性,多组分的物质需要确定各组分的峰比值,最后还可以采用红外光谱分析特征峰。这几个方法都鉴别不出来?这产品别做了,寿命到头了。 2、添加人工合成的成分 产品举例:石榴皮提取物等多酚类产品 添加人工合成的鞣花酸提高多酚含量 鉴别方法:比较难,不同的产品有不同的方法。 3、钻检测方法的漏洞 产品举例:贯叶连翘提取物 贯叶连翘提取物经过简单的处理(成本很低),紫外法测定的总金丝桃素含量可以提高一倍左右。 鉴别方法:高效液相色谱法进行测定,可以发现金丝桃素含量极低。 4、糊精问题 产品举例:多糖类产品、比例提取物等 多糖类产品、比例提取物勾兑糊精大家都知道,可是企业也有难处,多糖产品如果不勾兑糊精,产品的引湿性、色泽都很差,勾兑恰好还增加了多糖的含量。比例提取物有时收率极低,为了满足客户的比例要求,只好加糊精。 但有的产品纯粹是为了降低成本进行勾兑的,如当归提取物采用糊精拌当归油,锯叶棕提取物也是一样,糊精成了产品的主要构成,那就有点说不过去了。 鉴别方法:过去由于检测手段的欠缺,糊精不太好鉴别,现在通过红外光谱可以实现对糊精的定性。 个人认为:最好的办法还是建立原料及其各规格提取物的指 纹图谱,真伪立判。但只是空想,实施太难。 总之,随着技术的进步,造假的水平越来越高,但鉴别的手段也会不断提高,同时也要考虑依靠技术人员的专业能力、经验,仪器水平等因素,拿在手里看肯定是看不出来的。