磷脂自由基检测方法

⑴ 自由基化学详细资料大全

研究自由基（free radical chemistry）的产生、结构及化学反应性能的有机化学分支学科。自由基是一种含不成对电游祥枯子的化学物种，它可以是原子、分子或基团。

基本介绍

• 中文名 ：自由基化学
• 外文名 ：free radical chemistry
• 领域 ：化学
• 特点 ：不含成对电子

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自由基化学

研究自由基的产生、结构及化学反应性能的有机化学分支学科。自由基是一种含不成对电子的化学物种，它可以是原子、分子或基团。原子序数为奇数的原子，如氢原子、氯原子等都是自由基。在自由基化学中，主要研究对象是有机自由基，即含不成对电子的有机化合物分子。大多数自由基都是不稳定的活泼中间体，很容易发生化学反应。只有极少数自由基是稳定的，如二苯基苦基肼（DPPH）自由基在固态时可长期稳定保存，三苯甲基自由基在溶液中能稳定存在，在生物化学及医学研究中作为自旋标记物的氮氧自由基已经是市售的化学试剂。

自由基的产生方法

自由基的产生方法主要有3种：①光照法。具有一定能量的光辐照某些化合物时，使化学键断裂，生成自由基。②氧化还原法。通过电子转移生成自由基。③热均裂法。很多过氧化物和偶氮化合物受热时均裂，生成自由基，这是最方便而且用途最多的方法。例如，偶氮二异丁腈是常用的自由基聚合引发剂，在65℃时即可分解，产生自由基。

自由基的检测方法

由于自由基不稳定，检测有一定困难。常用的检测方法有：①化学方法。利用某些能够与自由基反应生成稳定产物的试剂捕集自由基，然后对稳定产物进行分离鉴定。②电子顺磁共振法。适合对稳定自由基的检测，是鉴定自由基结构最可靠的方法。③化学诱导动态电子极化法（CIDEP）。适于检测短寿命的瞬态自由基，尤其是闪光光解自由基。

自由基反应类型

自由基具有很高的活性，可进行多种类型的反应，常见反应类型有：①化合或偶联反应。②取代反应。③歧化反应。④氧化还原反应。⑤加成反应。⑥碎裂反应（生成较小的自由基）。⑦插入反应。⑧自由基重排反应。在自由基反应中最具特色的当数自由基连锁反应，该反应分三步。即引发、链增长和链终止。以甲烷氯化反应为例：

自由基的清除

给予负离子，使生物体体内过剩的活性氧还原，就能够抑制生物体的氧化。负离子能够使生物体容易摄取维他命宴竖頪，胺基酸，矿物质等，这些成分能够分解，消除活性氧神洞，提高SOD的活性。所以负离子是生物体不可或缺的物质。负离子是唯一能够消除活性氧自由基，保护生物体的自然要素。负离子没有副作用，能够促进自然治愈力，治愈疾病，保持健康。负离子能够使血液变成弱碱性，使新陈代，生理作用旺盛，并强化免疫力，同时也能够给予生物体衰弱时增强的活性氧电子，仰制氧化，杜绝疾病的根源。氧附着于生物体的细胞组织中，当电子被夺走时，就会引起细胞组织的氧化。活性氧会从生物体的脂质（不饱和脂肪酸）或蛋白质那儿夺走电子，结果引起脑中风或心肌梗塞，动脉硬化症，癌症及糖尿病。负离子的本质是电子，因此给予生物体负离子，就能使生物体体内充满电子，代替生物体的脂质或蛋白质的电子给予活性氧，使活性氧安定，所以不会损伤生物体的细胞，同时能够抑制疾病的发生。

⑵ 抗氧化活性的实验测定方法有哪些

1、ORAC

ORAC是Oxygen Radical Absorption Capacity（氧化自由基吸收能力）的缩写，是一种测试抗氧化能力的评价方法体系。

ORAC抗氧化测试包括对：过氧化自由基（含亲水性、亲脂性）、羟基自由基、过氧亚硝基、单线态氧、超氧阴离子 这五种人体最主要的活性氧自由基进行全面的分析，能有效得出样品的抗氧化实际能力及分布情况。

ORAC抗氧化生物测试是比普通抗氧化测试的更高一层的测试方案。利用人体细胞有效测试出样品的抗氧化力（生物利用度）。

2、其他评价方法

抗氧化不仅仅是一个概念，对生物体抗氧化的效果是可以量化测定的，作为动物实验一般是服用抗氧化剂一定时间后，测定血液中的酯质过氧化产物丙二醛变化、以及肝脏匀浆中超氧化物歧化酶SOD和谷胱甘肽过氧化物酶GSH-PX的活力变化。

从上述两种酶和MDA的变化状况来判定抗氧化的强度及效果。作为人体不可能测肝脏匀浆，可以测定血液或者尿液中的MDA，以及血液中的SOD、GXH-PX来判定抗氧化的效果。

3、抗油脂过氧化力测定

脂类包括的范围很广，构成生物膜的主要成分，脂类中的不饱和脂肪酸可以过氧化，脂类过氧化过程中会产生L、LO、LOO-等自由基以及LOOH，这些产物会损伤生物细胞。因此，能够抑制脂类过氧化具有重要的生物学意义。

A硫氰酸铁法FTC：硫氰酸铁盐(FTC)比色法是基于在酸性条件下，脂质氧化形成的过氧化物可将Fe2+氧化成Fe3+，然后Fe3+与硫氰酸根离子可形成在480-515nm内有最大吸收的红色络合物。通常用500nm处吸光值的高低表示物质抗脂质过氧化的能力，吸光值越小，表明物质的抗脂质过氧化能力越强。

B硫代巴比妥酸反应物TBARs法：是评价油脂的氧化程度的常用方法。油脂或者亚油酸氧化后的终产物主要是丙二醛，这些过氧化产物与硫代巴比妥酸作用生成有色化合物，该有色化合物在530 nm左右有吸收。

4、清除DPPH能力的侧定

DP是一种早期合成的有机自由基，常用来评估抗氧化物的供氢能力，它在有机溶剂中非常稳定，呈紫色，而且在处有一个特征吸收峰，当遇到自由基清除剂时，DPPH的孤对电子被配对而使其退色，也就是在最大吸收波长处的吸光值变小。因此，可通过测定吸光值的变化来评价样品对DPPH自由基的清除效果。

5、还原能力的测定

还原力的测定是检验样品是否是良好的电子供体的方法，还原力强的样品应该是良好的电子供应者，它供应的电子不仅能使Fe3+还原为Fe2+，也可以与自由基反应。还原力的测定是用来评价抗氧化剂活性的常用方法。

6、抑制 LOX酶实验

脂肪氧化酶LOX在植物中分布广泛是一种非血红素铁蛋白，分子量为90一100KD。这种酶蛋白有多个多肤链组成，含有三价铁离子金属辅基则有活性，而包含二价铁离子的金属辅基则缺乏活性。

在生物体内的主要作用是，专一催化含有顺，顺一戊二烯结构的多元不饱和脂肪酸的加氧反应，生成具有共扼双键的多元不饱和脂肪酸的氢过氧化物。

在生物体内的主耍底物是甘油脂类〔如磷脂）释放的游离不饱和脂肪酸，其中动物体内的主要底物是花生四烯酸，植物体内的主要底物是亚油酸和亚麻酸，主要产物为过氧羚基型脂肪酸。

(2)磷脂自由基检测方法扩展阅读

在机体内抗氧化活性成分发挥作用主要通过两个机制：第一是链的中断机制，主要中断自由基的链式反应，例如多酌类化合物、VE、VC等天然抗氧化物质可向自由基提供一个电子来中断链式反应。第二是促使产生自由基的催化剂失活而达到抗氧化的目的。

抗氧化物质可与超氧化物歧化酶等酶类或抗氧化物质协同构成抗氧化联合系统，增强机体的抗氧化能力，修复损伤的DNA，使体内的基因能够正常的表达。对于食品而言，食品中的抗氧化活性成分不但可以防止食品自身的腐败变质还可以生产加工为抗氧化剂。

田迪英等对41种果蔬进行了抗氧化活性的研究，发现其中大部分果蔬具有较强的抗氧化能力。谢天柱等对添加包括茶多酷在内的多种抗氧化剂的苹果酒的抗氧化能力的比较，结果发现，添加0.1%的茶多酷可提高果酒的抗氧化能力，并可有效减轻果酒的褐变程度。