❶ DNA检测的方法都有哪些
DNA检测
技术有很多,主要分为定性和定量方法。给你举几个:1,分子杂交技术,(包括southern杂交,northern杂交,基因芯片等)分子杂交分析的基本原理是基于DNA探针检测变性而且固定在硝酸纤维素膜上的宿主细胞DNA。这些探针可以不依赖宿主细胞DNA来制备,例如用随机引物制备探针。探针上标记酶﹑生物素﹑放射性同位素﹑地高辛(Dig)等。由于地高辛标记核酸探针,操作方便、灵敏度高,已标记的探针在4℃贮存可达两年之久,方便随时应用,所以现在常采用地高辛标记核酸探针,用光标记法将光敏Dig标记到探针上,制成光敏-Dig-核酸探针,再与固定在硝酸膜上的靶核酸进行靶DNA分子杂交,使之与抗Dig-碱性磷酸酶结合,最后可用不同的检测方式进行检测,
发光检测
和显色检测均可,灵敏度可达10pg以下2,基于DNA结合蛋白的方法Threshold®
Immunoassay分析系统是基于两种DNA序列非特异性蛋白,单链DNA(ssDNA)结合蛋白(SSB)和抗ssDNA
的单抗。检测的基本过程是当生物素—DNA单链结合蛋白和尿素酶—抗ssDNA
的单抗与变性的宿主细胞DNA结合最终形成复合物,通过亲合素将此复合物连接到生物素—硝酸纤维素膜,在通过洗涤所有非特异性的被洗脱掉,最后放于有
尿素溶液
的读数仪,尿素酶催化尿素分解成NH3和CO2
导致PH值发生变化,读数仪根据PH值的变化换算成DNA的量,从而达到检测残余DNA含量的目的。3,PCR法,其中以实时定量PCR法最为突出荧光定量
PCR是基于PCR扩增时,在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,产物的增加可以通过荧光信号指示,通过实时监控PCR体系中的荧光信号,对样本中初始模板进行定量分析。定量PCR可实时检测产物量,通过加入已知浓度的
标准样品
绘制标准曲线,然后根据待测样品在标准曲线中的位置推算初始模板的浓度,从而达到检测残余DNA含量的目的。此外,对DNA的定量技术也有很多,可以看下这篇文章《核酸定量技术及其在生物检测中的应用》