4羟基香豆素检测方法

‘壹’ 香豆精苷的鉴别

1、异羟肟酸铁反应：香豆素具有内酯环，能与异羟肟酸铁反应，产生紫红色，可被用来鉴别和比色测定。药材粉末用甲醇提取，滤液中加7%盐酸羟胺的甲醇溶液与10%NaOH的甲醇溶液各数滴，水浴微热，冷后，用稀盐酸调节pH至3～4，加1%三氯化铁试液，溶液显红色或紫色。
2、酚类试剂反应：该类化合物多具酚羟基，能和常规酚类试剂反应，如三氯化铁、硝酸银的氨溶液、三氯化铁-铁氰化钾。如果香豆素化合物的C6位上（即酚羟基的对位）没有取代基，则能和Emerson试剂反应现橙-红色；与Gibbs试剂反应现蓝色。Emerson反应是将香豆素类化合物溶于碱性溶液中，加入2% 4-氨基安替比林溶液数滴及8%铁氰钾溶液2～3滴即可显色。
主要定量分析方法：
该类化合物在紫外光的照射下显蓝色荧光，不仅作为定性鉴别而且作为定量测定依据。羟基香豆素在紫外光下有强的荧光，呋喃香豆素较弱，但也能在紫外光下显示蓝、紫、棕、绿、黄等色。必要时可喷10%KOH醇液，或20%SbCl3氯仿液以显色。另外，香豆素类化合物羟基和芳环形成的共轭体系具较强的紫外特征吸收，不同的香豆素化合物在不同pH条件下表现不同的光谱特性，对该类成分的分析具重要意义。
含香豆素成分的中药很多，该类成分的定量测定方法有比色法、荧光法、极谱法、紫外分光光度法、薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法等。每种方法都有其特点，有的简单，有的操作麻烦，有的则需要一定的仪器设备。比较而言，薄层扫描法测其紫外吸收或荧光的方法较简便快速；高效液相色谱法对复杂的中药样品很合适。

‘贰’ 香豆素类化合物常用的鉴别方法有哪些

1、异羟肟酸铁反应
由于香豆素类具有内酯环，在碱性条件下可开环，与盐酸羟胺缩合成异羟肟酸，然后再在酸性条件下与三价铁离子络合成盐而显红色。
2、三氯化铁反应
具有酚羟基的香豆素类可与三氯化铁试剂产生显色反应，通常为蓝绿色。
3、Gibb’s反应
Gibb’s试剂是2,6-二氯（溴）苯醌氯亚胺，它在弱碱性条件下可与酚羟基对位的活泼氢缩合成蓝色化合物。
4、Emerson反应
Emerson试剂是氨基安替比林和铁氰化钾，它可与酚羟基对位的活泼氢生成红色缩合物。

‘叁’ 4-羟基香豆素的介绍

4-羟基香豆素物理性质：白色针状结晶，熔点210～216℃。工业品为白色或浅黄色固体粉末，熔点210～216℃。工业品为白色或浅黄色固体粉末，熔点210～212℃。微溶于冷水，溶于热水、乙醇、乙醚等多种有机溶剂。4-羟基香豆素合成路线颇多，工业上常用的生产方法有：乙酰水杨酸甲酯在碱性催化剂条件下进行克莱逊缩合；乙酰乙酸酯与乙酰水杨酰氯反应并缩合。

‘肆’ 如何证明药材中含有香豆素成分

将药材粉碎，用有机溶剂提取，将提取液点于薄层色谱上，用石油醚-氯仿系统展开，在紫外光灯下检视，如有荧光斑点，即可确认。