饲料中vc检测方法

1. 怎样测定果实中的维生素C（2，6-二氯靛酚滴定法）

答：维生素C又称抗坏血酸，它在动植物的新陈代谢方面起着重要作用，因为它是调节植物体细胞氧化还原过程的重要因子之一，缺乏时有机体的新陈代谢就会遭到破坏。维生素C是果实中特有的，并且有的果实中含量很高。如100克猕猴桃鲜果中高达700～1100毫克，100克鲜枣中约有350～600毫克；而柑橘仅含有55～66毫克，苹果5～48毫克，梨3～17毫克。通常情况下，随着果实的成熟，维生素C的含量达到最高。但是一采收，活性很快降低，贮藏过程中下降更快，不耐贮藏的品种更为明显。冷藏使维生素C的破坏更严重。由于维生素C极易氧化，因此它的测定应在当天进行。
（1）方法原理
抗坏血酸（Vc）结构中有烯二醇结构存在，因此具有还原性，能将蓝色染料2，6-二氯靛酚还原为无色的化合物，Vc则被氧化为脱氢Vc。2，6-二氯靛酚具有酸碱指示及氧化还原指示的两种特性；其在碱性介质中呈深蓝色，而在酸性介质中呈浅红色（变色范围pH4～5），其于氧化态时呈深蓝色（碱性介质中）或浅红色（酸性介质中），还原态时为无色。据此特性，用蓝色染料碱性的标准溶液滴定果实样品酸性浸出液中Vc到刚变浅红色为终点，用染料的用量即可计算Vc的含量。滴定终点的红色是刚过量的未被还原的（氧化型）染料溶液在酸性介质中的颜色。
通常测定Vc的浸提和滴定都是在2%草酸溶液中进行的，目的是保持反应时一定的酸度，避免Vc在pH高时易被氧化。此染料不致氧化待测液中非Vc的还原性物质，所以对Vc测定有较好的选择性。
（2）试剂配制
①2%草酸溶液：称取20克草酸（化学纯）溶于水中，稀释至1000毫升，贮于避光处。
②6%碘化钾（KI）溶液。
③1%淀粉指示剂。
④0.001摩尔/升碘酸钾（KIO3）溶液：称取1.784克在105℃下烘过24小时的碘酸钾（优级纯）溶于水，定容至500毫升，此为0.1000摩尔/升碘酸钾标准溶液。使用时将此贮备标准液用煮沸并冷却的水稀释100倍，即成0.001摩尔/升的KIO3标准液。大约每星期应重新配制一次。
⑤Vc标准溶液：称取20.0毫克Vc（分析纯），溶于2%草酸溶液，并用2%草酸溶液稀释至100毫升，此液约含Vc0.2毫克/毫升，置于冰箱中保存。临用前当天进行标定。
Vc的标定：吸取Vc液5毫升于50毫升三角瓶中，加入2%草酸溶液10毫升，6%KI溶液0.5毫升，1%淀粉溶液5滴，用0.001摩尔/升 KIO3标准液滴定至溶液突变为浅蓝色为止（应耗用0.001摩尔/升 KIO3标准液约为11毫升），计算Vc的准确浓度：
Vc溶液的浓度（毫克/毫升）＝N×V1×88/V2
式中：N——所用KIO3标准溶液的摩尔浓度；
V1——所用KIO3溶液的量（毫升）；
V2——所用Vc 溶液的量（毫升）；
88——Vc的毫摩尔质量（毫克）。
⑥2，6-二氯靛酚溶液：称取50毫克2，6-二氯靛酚钠（分析纯）溶于约200毫升含有52毫升的NaHCO3（分析纯）温水（＜40℃）中冷却后加水至250毫升。贮存于棕色瓶中，置于冰箱中保存。使用前待溶液恢复至室温后，用Vc标液标定其准确浓度，并计算其滴定度。在冰箱中贮存时，每周须标定一次。
标定方法：吸取5毫升已标定的Vc标液（含Vc约1毫克）于50毫升三角瓶中，加入2%草酸溶液10毫升，摇匀，用2，6-二氯靛酚溶液滴定至溶液呈浅红色，约在15秒内不褪色为止（应用染料溶液约10毫升），计算每毫升染料溶液相当于Vc的毫克数，即滴定度T（应约为0.1毫克Vc/毫升）：
T＝（C×V1）/V2
式中：C——所用Vc标准液的浓度（毫克/毫升）；
V1——所用Vc标准液的量（毫升）；
V2——所用2，6-二氯靛酚标准溶液的量（毫升）。
（3）样品的测定
①样品处理：选取新鲜果实样品10～15个，洗净擦干，每个果实取中部纵横剖面各一薄片，用不锈钢刀迅速切碎，称取样品50.0～100.0克鲜样，将样品打成浆状。处理样品的过程应在10分钟内完成，以免还原性Vc在空气中曝露太久而被氧化。用小烧杯称取20～40克匀浆状样品（实际样品重为其重的1/2，应含还原性Vc1～5毫克）洗入100毫升容量瓶中，用2%草酸溶液定容（若有泡沫可在定容前加2滴辛醇除去）。过虑，若滤液色深，影响滴定终点的判定时，可加1～2勺白陶土（须测定其对Vc的回收率）脱色，过滤后再滴定。若样液不易过虑，可用离心机分离。对于色泽较浓的山楂等样品尚无合适的脱色方法，可用2%草酸稀释10倍再进行滴定。
对于多汁果实样品，如葡萄、柑橘等，可以直接压汁后量取10～20毫升汁液（含Vc1～5克），立即用2%草酸溶液定容至100毫升。对于干样品，可直接称取1.0000～4.0000克（含Vc1～5克范围）放入研钵中，加入2%草酸溶液研磨成浆液，洗入100毫升容量瓶中，用2%草酸溶液定容。含有还原性物质的样品如含有较多Fe2+，可用8%醋酸溶液代替2%草酸溶液为浸提剂。
②样品的测定：用吸管吸取以上制取的无色滤液5.00～10.00毫升（使含Vc约0.2～1克范围），放入50毫升三角瓶中，用棕色半微量滴定管中装的2，6-二氯靛酚标准溶液滴定至呈浅红色，约在15秒内不褪色为终点。同时做试剂空白试验，即取与待测液等量的2%草酸代替样品液，用2，6-二氯靛酚标准溶液滴定。此空白值通常不得超过0.08～0.10毫升。
（4）结果计算
维生素C（毫克/100克样品）＝（V-V0）×T×取用量倍数×100/W
式中：V——滴定样品滤液消耗的2，6-二氯靛酚标准溶液的量（毫升）；
V0——空白试验所用2，6-二氯靛酚标准溶液的量（毫升）；
T——2，6-二氯靛酚的滴定度，即1毫升此液所相当于还原型抗坏血酸的毫克数；
W——测定时样液中样品重量（克）；
取用倍数——样品定容体积与测定体积之比。
（5）注意事项
①偏磷酸是Vc最佳稳定剂，且具有沉淀蛋白质的作用，但其价格较贵，而且在室温下放置易转化为正磷酸盐，降低对Vc的稳定性，草酸廉价易得，有与偏磷酸相近的稳定性。而醋酸适于浸提含有Fe2+的样品。
②处理样品时应先加入草酸，可阻止氧化酶氧化Vc，而增加其在提取液中的稳定性。草酸溶液不应置于日光下，以免产生过氧化物。当有催化剂（如有金属离子Cu2+）存在时过氧化物能破坏Vc。
③2，6-二氯靛酚呈氧化型时有色，还原型时无色，固体试剂有时含有分解产物，染料溶液长期贮存后也会生成分解产物，从而使滴定终点不敏锐。因此须在使用前检查。检查方法：取15毫升染料液加入过量的Vc溶液，若还原后的溶液带有颜色，表示此染料溶液已不能使用。

2. 水果中维生素c含量的测定方法有几种

水果中维生素c含量的测定方法有三种，分别为原子吸收分光光度法、紫外可见分光光度法、高效液相色谱法。

1、原子吸收分光光度法
利用原子吸收分光光度法问接测定维生素C的含量，是利用维生素C可以与一些金属离子发生氧化还原反应，通过测定反应掉的金属离子的量，进而间接计算出维生素c的含量。

2、紫外-可见分光光度法

利用紫外-可见分光光度法测定维生素C的含量是基于维生素c在紫外光区有特征吸收，但是因为维生素C结构中具有不饱和键，具有还原性，不易稳定存在，直接测定误差较大。所以在利用紫外分光光度法测定时，维生素标准溶液和待测样的配制条件非常重要。

3、高效液相色谱法

高效液相色谱法是以液体为流动相，采用高压输液系统，将维生素C的溶剂装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而测量出维生素c的含量。

(2)饲料中vc检测方法扩展阅读

维生素c含量的测定方法对比：

由于维生素C自身的不稳定，导致了很多方法测定结果误差较大，所以对维生素C稳定存在条件的探索非常重要。高效液相色谱法因为测定较准确、灵敏度高、选择性好，有较好的发展前景，是目前发展较快的一种方法。

3. 怎样测定蔬菜中的维生素C

1.滴定法测定维生素C
1.1测定原理
2，6一二氯靛酚法和碘量法是较常见的滴定测定维生素C的方法。还原型抗坏血酸还原染料2，6一二氯靛酚，该染料在酸性中呈红色，被还原后红色消失。还原型抗坏血酸还原2，6一二氯靛酚后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准2， 6-二氯靛酚的量与样品中所含维生素C的量成正比。
碘量法的原理：维生素C包括氧化型、还原型和二酮古乐糖酸三种，当用碘滴定维生素C时，所滴定的碘被维生素C还原为碘离子，随着滴定过程中维生素C全被氧化，所滴入的碘将以碘分子形式出现。碘分子可以使含指示剂（淀粉）的溶液产生蓝色，即为滴定终点。
1.2测定操作
2，6一二氯靛酚法：取适量的样品可食部，加入100 mL 2%草酸溶液，制成匀浆。取同一样品匀浆10g，加入1%草酸溶液20 mL，摇匀，用滤纸过滤，取5mL过滤液于锥形瓶中，用2，6一二氯靛酚钠盐溶液滴定(1 mL≈0.02 mgVitC)，以淡红色存在30 s内不褪色为滴定终点。记录2，6-二氯酚靛酚钠盐溶液的消耗量，根据结果计算出样品中维生素C含量(mg/100 g)。
碘量法：将果蔬洗净，用纱布拭干其外部所附着的水分，若样品清洁可以不必洗。样品可以先纵切为4~8等份，分别称取20g可是用食部分，置于研钵中加入2% Hcl 15~10ml，研磨至浆状，移于 100ml 容量瓶中，用2% HCl 加至刻度线处，混匀，过滤，记录滤液总体积。样品液的测定: 在50ml 烧杯中，用移液管注入10% KI 溶液0．5ml，0.5% 的淀粉溶液 2ml，样品液 5ml，蒸馏水 2.5ml，用0.001N KIO3 液滴定，要一滴滴加入，并时时摇动烧杯，至微蓝色不褪色为终点( 一分钟不褪为止) 。记录所用 KIO3 液毫升数，计算维生素C含量。
1.3测定方法评价
2，6-二氯酚靛酚滴定法具有简便、快速、比较准确等优点，适用于许多不同类型样品的分析。缺点是不能直接测定样品中的脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的含量，易受其他还原物质的干扰，如果样品中含有色素类物质，将给滴定终点的观察造成困难。碘酸钾滴定法较便宜，使用碘酸钾滴定法测定蔬菜中维生素C含量较为简便易行，而2，6一二氯靛酚法相对复杂。总的来说，滴定法操作简便、快速，无须特殊仪器，但在测定深色样品时，准确度和精确度欠佳。
2.荧光法测定维生素C
2.1测定原理
Deutsch和Weeks曾经报道过一种检测维生素C的荧光分析法(OPDA)，并被指定为维生素C的经典荧光分析法。在该方法中，维生素C先被活性炭(Norit)氧化为脱氢抗坏血酸(DHAA)，DHAA再与荧光底物邻苯二胺(OPDA)结合生成荧光产物，通过对该荧光产物的检测实现对维生素C的定量分析。孙振艳等[1]提出了一种新的测定维生素C的荧光分析方法。基于维生素C被Cu2+氧化为DHAA，DHAA进一步与苯甲酸及十六烷基三甲基溴化铵产生荧光协同增敏作用，通过对体系荧光强度的测定进行维生素C的定量分析。
2.2测定操作
荧光分析法(OPDA)的测定方法：称取一定量样品，研磨后用水浸泡，取清液加入适量1%草酸溶液，振摇约3min，加入0.2g已处理好的活性炭再充分振摇约3min后过滤，滤液加于两个25mL比色管再加入5.0mL缓冲溶液,，其中一管加入2.0mL硼酸溶液(即空白)摇匀，放置15min后，两管均加入邻苯二胺溶液10mL，避光放置30min待测。样品荧光强度减去空白荧光强度值即为样品相对荧光强度值。
孙振艳等的荧光分析法：在25 mL比色管中依次加入0. 6 mL CuSO4溶液，2. 0 mL十六烷基三甲基溴化铵溶液，2. 0 mL苯甲酸溶液，一定体积的维生素C标准溶液，，5. 0 mLNaOH-邻苯二甲酸氢钾缓冲溶液，用蒸馏水定容，摇匀。在35℃恒温水浴中加热30 min，将溶液流水冷却至室温，激发波长为308 nm，在发射波长408nm处，测量荧光强度F，以不含维生素C的试剂空白为F0，计算ΔF=F-F。
2.3测定方法评价
荧光分析法测定维生素C具有操作简单，精密度高，检出限低等优点，该法可以应用于水果、蔬菜和药物中维生素C的检测，适于推广。
3.光度分析法测定维生素C
3. 1测定原理
2，4-二硝基苯肼法和钼蓝比色法是常见测定维生素C的一种光度分析法。2，4-二硝基苯肼法的原理是总维生素C包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸，样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与2，4-二硝基苯肼作用生成红色脎，脎的含量与总抗坏血酸含量成正比，进行比色测定。钼蓝比色法是测定果蔬中还原型维生素C含量的一种常用方法，因偏磷酸和钼酸铵反应生成的磷钼酸铵经还原型的维生素C还原后生成亮蓝色的络合物，通过分光比色可以测定样品中还原型维生素C的含量。
3.2测定操作
2，4-二硝基苯肼法：取适量的样品可食部，加入100 mL 2%草酸溶液，制成匀浆。取匀浆20 g (含1~2 mg抗坏血酸)置入100 mL容量瓶中，用1%草酸溶液定容，混匀后过滤。取25 mL过滤液放入有2 g活性炭的25 mL比色管中，振摇1 min，过滤。然后取10 mL此氧化提取液，加入10 mL 2%硫脲溶液，混匀。按照GB12392-90中呈色反应方法，用分光光度计进行比色，根据结果计算出样品中抗坏血酸含量。按下式计算样品中Vc的含量:X=c·Vm×F×1001000。
X—样品中总抗坏血酸含量，mg/100g；
c—由标准曲线查得或回归方程算得“样品氧化液”总抗坏血酸的浓度，μg/mL； V—试样用1%草酸溶液定容的体积，mL； F—样品氧化处理过程中稀释倍数； m—试样质量，g。
钼蓝比色法：准确称取 100 g 样品， 加入草酸－EDTA 溶液， 经捣碎后移入 100 mL 容量瓶，定容，过滤，吸取 2 mL 上清液于 50 mL 容量瓶中，加入 1 mL 的偏磷酸－醋酸溶液，5％的硫酸 2．0 mL，摇匀，加入 4 mL 钼酸铵，以去离子水定容至 50 mL，20 min 后测定吸光度。
3.3测定方法评价
钼蓝比色法测定果蔬中还原型维生素C含量数据稳定性、准确性较好，是一种快速、准确、灵敏度高的测定方法，而且不受样液颜色的影响。2，4-二硝基苯肼比色法测定总VitC (还原型和氧化型)，特异性较好，但操作复杂，是我国食品中VitC测定的标准方法，此方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定。
4.高效液相色谱法
4.1测定原理
高效液相色谱法是近年来发展起来的一种测定维生素 C 含量的方法，测定维生素 C 含量通常采用 C18柱或 C8柱，由于维生素 C 对紫外光有吸收，故检测器常用紫外检测器。
4.2测定操作
称取维生素C标准样品0.1000 g.转移至100 ml容量瓶中，用双蒸水定容，得到1.0mg·ml-1的维生素C标准溶液。参考Nisperos-Carriedo等的方法。准确称取果肉1.00 g，用5 ml 0.2%偏磷酸冰浴研磨， 10000 g离心15 min，残渣加入4 ml 0.2%偏磷酸再提取，合并上清液，定容至10 ml，经0.45μm滤膜过滤后待测。每个样品重复5次。维生素C在240 nm波长时有最大吸收峰，故以240 nm作为检测波长。以0.2%偏磷酸为流动相。分别吸取标准溶液1 ml、2 ml、4 ml、6 ml、8m，l各自定容至10 m，l从中分别吸取10.0μl进样分析，以峰面积(mv)为纵坐标，标样浓度(mg·ml-1)为横坐标，绘制标准溶液曲线，计算线性回归方程的回归系数和截距。将样品溶液分别进样10.0μl进行液相色谱分析，测定维生素C的色谱峰面积，代入标准曲线计算出维生素C含量。
4.3测定方法评价
高效液相色谱法具有高效、快速、稳定、结构准确、操作简便等特点。该法分离时间短，对结构不稳定的维生素C尤为适合，还特别适用于颜色较深的提取液样品的测定，成为近年来较受欢迎的维生素C测定方法。缺点是所用仪器较为昂贵。