Ⅰ 求教各位关于乙酰胆碱酯酶的提取和纯化
石杉碱甲
1、从中草药千层塔中提取石杉碱甲的方法
2、石杉碱甲及其衍生物或其盐的注射用缓释微球及其制备方法
3、石杉碱甲衍生物,其制备方法和用途
4、乙酰胆碱酯酶抑制剂石杉碱甲的提取方法
我公司与中国农业大学的专家合作，历时3年研制开发的农药残毒快速检测仪，以及与其配套的试剂乙酰胆碱酯酶和酶片、显色片日前获国家专利。
这种农药残毒快速检测仪，采用酶抑制法检测有机磷及氨基甲酸酯类农药残留。运用固态可变光及样液脱色去杂技术，使检测误差大大降低，所用酶源是山东京蓬生物药业股份有限公司独自从敏感家蝇头部提取的乙酰胆碱酯酶，检测成本较进口酶低50%以上，仪器采用文字和语音双重提示操作，使用简便；四个检测通道均能独立检测，互不影响，单独检测一个样品只需10分钟，如果连续检测时间不超过2分钟，农药残毒快速检测仪，电源为3节一号干电池，打破了一般仪器不能用于田间地头的情况。
检测使用试剂（酶片、显色片）采用了一系列新处理技术，使之常温下即可储存，使用起来也非常方便（用时剪下一片即可）。酶片中的乙酰胆碱酯酶为我公司独自从敏感家蝇中提取制做的（注：本公司为中国大陆唯一一家生产乙酰胆碱酯酶的厂家），其敏感性和稳定性皆优于进口酶源
Ⅱ 生物利用度有哪两种测定方法
目的：(1)建立和验证同时测定人血浆中二甲双胍、格列齐特浓度的LC/MS/MS方法。 (2)以深圳市中联制药有限公司研制的二甲双胍格列齐特片为受试制剂，以市售格列齐特片(深圳市中联制药有限公司生产)及盐酸二甲双胍片(中美上海施贵宝制药有限公司生产)为参比制剂，应用LC/MS/MS法，研究受试制剂与参比制剂的二甲双胍、格列齐特人体生物利用度和生物等效性。 方法：(1)LC/MS/MS方法建立与确证：以乙腈为血浆蛋白沉淀剂对人血浆样本进行处理，选用石杉碱甲为内标物，以甲醇/水(含1％甲酸)/乙腈(30/31/39，v/v/v)为流动相、HypersilBDSC18为色谱柱；通过电喷雾电离(ESI)源正离子选择反应监测(SRM)扫描方式进行LC/MS/MS分析，同时测定人血浆中二甲双胍、格列齐特的浓度，并根据相关指导原则进行特异性、标准曲线、回收率、精密度与准确度、稳定性等方面的方法学确证。 (2)二甲双胍格列齐特片人体生物利用度和生物等效性试验研究：20例健康成年男性受试者随机分组，自身对照，单次空腹口服药物(盐酸二甲双胍片500mg及格列齐特片80mg或二甲双胍格列齐特片500mg/80mg×2)。应用已确证的LC/MS/MS法测定受试者血浆中二甲双胍和格列齐特的浓度，根据所得血浆浓度-时间数据计算各主要药代动力学参数。 结果：(1)建立了同时测定人血浆中二甲双胍、格列齐特浓度的LC/MS/MS方法，方法学验证结果表明，该方法特异性好，无内源性杂质干扰。二甲双胍在7.8～4678.9μg/L范围线性良好，定量下限为7.8μg/L；格列齐特在10～10000μg/L范围线性良好，定量下限为10μg/L。二甲双胍批内RSD为5.8％～8.2％，批间RSD为5.1％～7.3％；格列齐特批内RSD为7.5％～10.7％，批间RSD为8.1％～12.5％。二甲双胍的平均提取回收率为71.0％～83.6％，平均相对回收率为96.1％～109.4％；格列齐特的平均提取回收率为88.1％～104.0％，平均相对回收率为91.5％～103.7％。血浆样品在室温放置4h，二甲双胍偏差为-11.0％～-6.5％，格列齐特偏差为7.9％～10.6％。血浆样品冻融2次，二甲双胍偏差为-2.1％～2.7％，格列齐特偏差为10.0％～11.3％。血浆样品提取液在室温放置12h，二甲双胍偏差为0.8％～5.6％，格列齐特偏差为-3.5％～1.8％。血浆样品冰冻(-30℃)39d，二甲双胍偏差为-16.7％～7.4％，格列齐特偏差为-1.6％～11.8％。 (2)二甲双胍格列齐特片人体生物利用度和生物等效性试验研究结果：参比制剂与受试制剂二甲双胍的Cmax分别为1161.7±307.9μg/L及1264.4±275.0μg/L；Tmax分别为1.9±1.0h及2.0±0.8h；t1/2分别为4.6±0.9h及4.1±0.6h；AUC0-t分别为7132.9±1956.1μg/L·h及7758.5±2096.4μg/L·h；AUC0→∞分别为7287.3±1988.9μg/L·h及8063.6±2069.0μg/L·h；受试制剂相对于参比制剂的生物利用度为111.2％±23.6％；90％可信限：Cmax为101.7％～119.4％，AUC0-t为99.8％～118.5％，AUC0→∞为99.9％～123.3％。参比制剂与受试制剂格列齐特的Cmax分别为4958.8±771.2μg/L及5266.7±880.2μg/L；Tmax分别为3.9±0.8h及3.5±1.0h；t1/2分别为12.6±4.8h及12.4±4.4h；AUC0-t分别为75804.7±34103.4μg/L·h及76752.9±33971.9μg/L·h；AUC0→∞分别为82114.4±43993.4μg/L·h及81567.9±44203.9μg/L·h；受试制剂相对于参比制剂的生物利用度为103.4％±16.6％；90％可信限：Cmax为100.5％～111.8％，AUC0-t为95.5％～109.2％，AUC0→∞为92.4％～107.4％。 结论：(1)建立和确证了一种能同时测定人血浆中二甲双胍、格列齐特浓度的LC/MS/MS方法。方法学确证结果表明，该方法简便可靠，具有特异性强、精密度与准确度高、灵敏度好等特点。 (2)等剂量下二甲双胍格列齐特片(受试制剂)与参比制剂(盐酸二甲双胍片)的二甲双胍具有生物等效性，二甲双胍格列齐特片(受试制剂)与格列齐特片(参比制剂)的格列齐特具有生物等效性。