‘壹’ 胆固醇测定及游离胆固醇测定方法
（一）胆固醇概况
1.存在形式：血浆胆固醇包括胆固醇酯和游离胆固醇两种，前者约占70%，后者占30%。
2.来源：食物、体内合成。（提供内源性胆固醇的90%）
肝脏是合成胆固醇的主要器官，合成的原料是乙酰CoA,合成的关键酶是HMGCoA还原酶，临床治疗所用的他汀类药物主要是抑制该关键酶。
血浆和组织中所含胆固醇经常处于交换状态，其交换率因不同组织而异，由于医学.育网收集整理胆固醇不断进、出血液，所以血浆胆固醇不仅反映胆固醇摄取与合成的情况，还反映携带胆固醇的各种脂蛋白的合成速度，以及影响脂蛋白代谢的受体的情况。
血浆胆固醇主要存在LDL中，其次为HDL和VLDL，CM中含量最少。
3.主要功能：
①是所有细胞膜和亚细胞器膜上的重要组成成分；
②是胆汁酸的唯一前体；
③是所有类固醇激素（性激素、肾上腺皮质激素）的前体等。
④是维生素D合成的前体。
（二）检测
1.方法：
化学法曾于很长一段时间用于常规检查，医学.育网收集整理一般包括：①抽提；②皂化；②毛地黄皂苷沉淀纯化；④显色比色四个阶段。其操作复杂，干扰因素多，现多已不用，代表性的方法是省去③步骤的Abell-Kendall法，现作为标准参考方法予以利用。现临床应用胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶及过氧化物酶的方法，快速准确，标本用量小，可完全在自动生化分析仪上操做，适于大批量标本的检查。
胆固醇酯首先在胆固醇酯酶的催化下水解成游离胆固醇，胆固醇在胆固醇氧化酶的催化下生成过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的催化下以Trinder反应显色测定。
2.参考值：
TC水平因生活条件（饮食、运动等）而异，随年龄上升。
中青年男性略高于女性，老年女性高于男性。
我国血脂异常防治建议：
以≤5.17mmol／L（200mg／dl）为合适水平；
5.20～5.66mmol／L（201mg／dl～219mg／dl）为临界范围（或边缘升高）；
≥5.69mmol／L（220mg／dl）为升高。
（三）临床意义：
1.胆固醇升高：
胆固醇是动脉粥样硬化的重要危险因素之一。
胆固醇升高容易引起动脉粥样硬化性心、脑血管疾病如冠心病、心肌梗死，脑卒中等。
胆固醇为一个诊断指标来说，它既不够特异，也不够敏感，所以不能作为诊断指标，只能作为评价动脉粥样硬化的危险因素，而最常用做动脉粥样硬化的预防、发病估计、治疗观察等的参考指标。
胆固醇升高可见于各种高脂蛋白血症、梗阻性黄疸、肾病综合征、甲状腺功能低下、慢性肾功能衰竭、糖尿病等时。
此外，吸烟、饮酒、紧张、血液浓缩等也都可使血液胆固醇升高。
妊娠末三个月时，可能明显升高，产后恢复原有水平。
2.胆固醇降低：
可见于各种脂蛋白缺陷状态、肝硬化、恶性肿瘤、营养吸收不良、巨细胞性贫血等。
女性月经期也可降低。
‘贰’ 测胆固醇的实验题1.举例说明胆固醇测定的其它方法。 2.实验中样品皂化的作用是什么
一、胆固醇测定的方法包括：直接皂化比色法、氧化酶法、气相色谱法、高效液相色谱法。本实验使用的是直接皂化比色法。
1.直接皂化比色法：当固醇类化合物与酸作用时，可脱水并发生聚合反应，产生颜色物质。因此可先对食品样品进行皂化和提取，用硫磷铁试剂作为显色剂，测定食品中胆固醇的含量。步骤：①抽提；②皂化；③毛地黄皂苷沉淀纯化；④显色比色四个阶段。
2.氧化酶法：血清中的胆固醇酯(CE)被胆固醇酯水解酶(CEH)水解成游离胆固醇(Chol)，后者被胆固醇氧化酶(CHOD)氧化成△4—胆甾烯酮，并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化4—氨基安替比林与酚(三者合称PAP)，生成红色醌亚胺色素(Trinder反应)。醌亚胺的最大吸收在500nm左右，吸光度与标本中总胆固醇呈正比。步骤：在样品的冰乙酸提取液中加磷硫铁试剂，胆固醇与试剂反应产生紫红色化合物，颜色的深浅与胆固醇的量成正比，可用分光光度计在波长560nm•处测定。
3.气相色谱法：取样时，由于气相色谱仪进样少，应严格控制样品质量。由于内标物5-α-胆甾烷不被皂化，可先加入与样品混匀。利用皂化反应RCOOR′+NaOH→RCOONa+ROH的原理，使样品中的主要成分油脂通过遇苛性碱水解成用来制造肥皂脂肪酸钠或钾和甘油，而非皂化物胆固醇和内标物仍稳定存在。利用皂化的水解产物（脂肪酸钠或钾和甘油）易溶于水而胆固醇和内标物不溶于水的特点进行萃取，得到溶有胆固醇和内标物的石油醚溶液。弃去的的水相经两次石油醚提取后基本回收残留在水相中的胆固醇和内标物。得到的石油醚溶液进行吹干后可取1μL进行气相色谱法检测。
4.高效液相色谱法：提要样品中胆甾醇用适当有机溶剂提取，得到胆甾醇和脂类物质的混合物，经皂化后除去脂类干扰物，再用适当的有机溶剂提取胆甾醇，以高效液相色谱仪测定 。
二、实验中样品皂化的作用是：
利用皂化反应RCOOR′+NaOH→RCOONa+ROH的原理，使样品中的主要成分油脂通过遇苛性碱水解成用来制造肥皂脂肪酸钠或钾和甘油，而非皂化物胆固醇和内标物仍稳定存在。利用皂化的水解产物（脂肪酸钠或钾和甘油）易溶于水而胆固醇和内标物不溶于水的特点进行萃取，从而去除其他脂类干扰物，减少干扰，提高测试精度。