检测人参中人参皂苷的方法及过程

1. 红参的化学鉴定

（1）取本品粉末0.5g，加乙醇5ml，振摇5min，滤液1ml，置蒸发皿中蒸干，滴加三氯化锑氯仿饱和溶液，再蒸干，显紫色。（检查红参皂甙）
（2）薄层层析：取本品粉末1g，加氯仿40ml，置水浴上加热回流1h，弃去氯仿液，药渣挥干溶剂，加0.5ml拌匀湿润后，加水饱和的正丁醇10ml，超声处理30min，吸取上清液，加氨试液3倍量，摇匀放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取红参对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取红参皂甙Rb1、Re、Rg，加甲醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。吸到上述3种溶液各1-2μl，分别点于同一硅胶G薄层板（厚0.5mm）上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水（15：40：22：10）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘数分钟，分别置日光及紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点或荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点或荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的3个紫红色斑点，紫外灯（365nm）下显相同的一个黄色和两个橙色荧光斑点。
（3）取红参粉末（40目）1g，加7%硫酸的乙醇-水（1：3）溶液10ml，加热回流2h，放冷后，用氯仿振摇提3次（10,5，5ml），氯仿液以水振摇洗涤后，用无水硫酸钠脱水，滤过，氯仿液蒸干，以甲醇1ml溶解，供点样；以红参三醇，红参二醇、齐墩果酸为对照品。分别点样于硅胶G薄层板上，以氯仿-乙醚（1：1）展开，展距约12cm。硫酸-水（1：1）喷雾后，于105℃烘烤显色。样品应显5个以上斑点，其中应有与人参三醇、人参二醇、齐墩果酸相对应的斑点各一点。
含量测定
红参照高效液相色谱法（附录ⅥD）测定。 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.05%磷酸溶液（99：400）为流动相；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Re峰计算应不低于2500。对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Re对照品12.5mg，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取5ml,置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；另精密称取人参皂苷Rg1对照品10mg，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀,即得（每1ml中含人参皂苷Rg10.4mg；含人参皂苷Re0.25mg）。供试品溶液的制备取本品粉末（过四号筛）约1g，精密称定，置索氏提取器中，加氯仿40ml，加热回流3小时，弃去氯仿液，药渣挥去氯仿，连同滤纸筒移至100ml具塞锥形瓶中，精密加入水饱和的正丁醇50ml，密塞，放置过夜，超声处理（功率250W，频率50kHz）30分钟，滤过，精密量取续滤液25ml，置蒸发皿中，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。测定法分别精密吸取上述两种对照品溶液各10μl与供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品含人参皂苷Rg1（C42H72O14）和人参皂苷Re（C48H82O18）的总量不得少于0.20%。

2. 皂苷的检测方法

本方法适用于功能性食品中总皂苷的测定

本方法人参皂苷Re的低检出量为2μg/mL

一、方法提要

样品中总皂苷经提取、PT—大孔吸附树脂柱预分离后，在酸性条件下，香草醛与人参皂苷生成有色化合物，以人参皂苷Re为对照品，于560nm处比色测定。

二、仪器

1.722分光光度计。

2.PT—大孔吸附树脂柱(河北省津杨滤材厂)。

3.超声波振荡器。

三、试剂

1.甲醇(分析纯)

2.乙醇(分析纯)

3.人参皂苷Re标准品(中国药品生物制品检定所)

4.5%香草醛溶液：称取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至l00mL

5.高氯酸(分析纯)

6.冰乙酸(分析纯)

7.人参皂苷Re标准溶液：称取人参皂苷Re标准品20.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，即每1mL含人参皂苷Re2.0mg

8.重蒸水

四、测定步骤

1.样品处理：

(1)固体样品

称取1.0g左右样品于100mL烧杯中，加入20～40mL 85%乙醇，超声波振荡30min，再定容至50mL，摇匀，放置，吸取上清液1.0mL挥干后以水溶解残渣，进行柱分离

(2)液体样品

含乙醇的酒类样品：准确吸取1.0mL样品放于蒸发皿中，蒸干，用水溶解残渣，用此液进行柱层析；非乙醇类液体样品：准确吸取1.0mL样品(如浓度高或颜色深，需稀释一定体积后再取1.0mL)直接进行柱分离

2.柱层析

以PT—大孔吸附树脂柱进行层析分离，准确吸取上述已处理好的样品溶液1.0mL上柱，用15mL水洗柱，以洗去糖分等水溶性杂质，弃去洗脱液，再用20mL85%乙醇洗脱总皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，于水浴上蒸干，以此作显色用

3. 人参总皂苷的特征图谱

照高效液相色谱法( 附录 Ⅵ D) 测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长 25cm ，内径 4.6mm ，粒径 5μm ，载碳量 11% ）；以乙腈为流动相 A ，以 0.1% 磷酸溶液为流动相 B ，以下表进行梯度洗脱；柱温为 30 ℃ ；检测波长为 203nm ；流速为每分钟 1.3ml 。理论板数按人参皂苷 Re 峰计算应不低于 6000 ，按人参皂苷 Rd 峰计算应不低于 200000 。时间（分钟）流动相 A （%）流动相 B （%） 0 ～ 30 19 81 30 ～ 35 19→24 81→76 35 ～ 60 24→40 76→60 参照物溶液的制备分别取人参皂苷 Re 和人参皂苷 Rd 对照品适量，加甲醇制成每 1ml 各含 0.5mg 的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品适量，加甲醇制成每 1ml 含 2mg 的溶液，用 0.45μm 滤膜滤过，即得。测定法精密吸取供试品溶液及参照物溶液各 10μl ，分别注入液相色谱仪，记录 60 分钟的色谱图，即得。供试品特征图谱中应有 7 个特征峰，与参照物峰相应的峰为 S 1 和 S 2 峰，计算各特征峰的相对保留时间比值，应符合以下规定：峰 1 和峰 2 （ S 1 ）为一组，相对保留时间比值为 0.91 （峰 1 ）、 1.00 （峰 2 ）；峰 3 ，峰 4 ，峰 5 ，峰 6 和峰 7 （ S 2 ）为另一组，相对保留时间比值为 0.84 （峰 3 ）、 0.91 （峰 4 ）、 0.93 （峰 5 ）、 0.95 （峰 6 ）、 1.00 （峰 7 ），其相对偏差不得过 5% 。
da Pk # 对照特征图谱峰 1 ：人参皂苷 Rg 1 ，峰 2 （ S 1 ）：人参皂苷 Re ，峰 3 ：人参皂苷 Rf ，峰 4 ：人参皂苷 Rb 1 ，峰 5 ：人参皂苷 Rc ，峰 6 ：人参皂苷 Rb 2 ，峰 7 （ S 2 ）：人参皂苷 Rd