蛋白质检测仪的使用方法

Ⅰ GFP绿色荧光蛋白的检测方法有哪些

检测方法：
1、实验准备
 Molus单管型多功能检测仪
 Blue荧光模块(P/N 9200-040)
 微量适配器(P/N 9200-928)
 纯化的rAcGFP1蛋白（Clontech，NO.632502）
 200ul加样器与20ul加样器
 TE Buffer (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0)
 1.5ml离心管
2、.仪器准备
2.1 关闭Molus的电源，为Molus插入BLUE荧光检测模块.
2.2 打开Molus的电源，仪器预热1min
2.3 按照说明插入微量适配器
3.、制备标准曲线
3.1 对rAcGFP1进行系列稀释
3.2 在微量比色杯中加入100ul的rAcGFP1稀释后溶液。注意：避免在微量比色杯中出现气泡，负责会引起检测误差。.
3.3 将微量比色杯插入到微量适配器中，点"Measure Fluorescence Raw."检测
3.4 记录检测结果，对其他样品重复4.2-4.3的步骤
3.5 利用荧光值（FSU）与样品浓度做出标准曲线
4、 校准
4.1 使用Molus检测未知样品前，你可以使用rAcGFP1稀释液来校准Molus仪器
4.2 使用表1中的5个稀释液来校准Molus。选择"ng/µL"作为测量单位，使用0 ng/µL 作为空白标准；为了尽可能准确，使用接近实际样品的稀释液做其他几个点的校准。
4.3 保存校准，可供以后调用 (可选).
4.4 使用"Measure Fluorescence."开始检测未知样品。注意：在校准后就无需再做标准曲线。
4.5 样品浓度将直接在屏幕上显示.
简介：
绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein，GFP)是一类存在于腔肠动物体内的生物发光蛋白。1962年Shimomura等首先从多管水母(Aequoria victoria)中分离出一种分子量为20kD的称为Aequorin的蛋白。由于水母整体荧光及提取的蛋白质颗粒荧光都呈绿色，因此，人们将这种蛋白命名为绿色荧光蛋白。
GFP具有多种优点：易于检测，灵敏度高；荧光性质稳定，耐受性强；易于表达，无细胞毒性；可用于活细胞检测。因此，GFP可作为报告基因用于检测基因表达或调控，或作为融合标签来检测蛋白质分子的定位、迁移、构象变化以及分子间的相互作用，或者靶向标记某些细胞器

Ⅱ 蛋白浓度测定的方法具体有哪些

蛋白浓度测定的方法：

1. 紫外分光光度法

紫外光谱吸收法测定蛋白质含量是讲蛋白质溶液直接在紫外分光光度计中测定的方法，不需要任何试剂，操作简单且易回收。蛋白质溶液在280nm附近有强烈的吸收，这是由于蛋白质中酪氨酸、色氨酸残基而引起的，所以光密度受这两种氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取过程中杂有的核酸对测定结果引起极大误差，其最大吸收在260nm。所以同时测定280及260nm两种波长的吸光度，通过计算可得较为正确的蛋白质含量。

2. 双缩脲法

利用半饱和硫酸铵或27.8％硫酸钠——亚硫酸钠可使血清球蛋白沉淀下来，而此时血清白蛋白仍处于溶解状态，因此可把两者分开，这种利用不同浓度的中性盐分离蛋白的方法称为盐方法。盐析分离蛋白质的方法不仅用于临床医学，而且还广泛地用于生物化学研究工作中，如一些特殊蛋白质—酶、蛋白激素等的分离和纯化。

蛋白质和双缩脲一样，在碱性溶液中能与铜离子形成紫色络合物（双缩脲反应），且其呈色深浅与蛋白质的含量成正比，因此可于蛋白质的定量测定。

但必须注意，此反应并非蛋白质所特有，凡分子内有两个或两个以上的肽键的化合物以及分子内有—CH2—NH2等结构化合物，双缩脲反应也呈阳性。本实验用27.8％硫酸钠—亚硫酸钠溶液稀释血清，取出一部分用双缩脲反应测定蛋白质的含量，剩余部分则用滤纸过滤，使析出的球蛋白与白蛋白分离，取出滤液用同一反应测定白蛋白的含量。总蛋白与白蛋白含量之差即球蛋白的含量。白蛋白与球蛋白之比即所谓的白／球比值。

3. Folin-酚试剂法

目前实验室较多用Folin-酚法测定蛋白质含量，此法的特点是灵敏度高，较双缩脲高两个数量级，较紫外法略高，操作稍微麻烦，反应约在15分钟有最大显色，并最少可稳定几个小时，其不足之处是干扰因素较多，有较多种类的物质都会影响测定结果的准确性。其原理是蛋白质中含有酚基的酪氨酸，可与酚试剂中的磷钼钨酸作用产生兰色化合物，颜色深浅与蛋白含量成正比。

4. 考马氏亮蓝G-250

此方法是1976年Bradform建立。染料结合法测定蛋白质的优点是灵敏度较高，可检测到微量蛋白，操作简便、快迅，试剂配制极简单，重复性好，但干扰因素多。考马氏亮蓝G－250具有红色和青色两种色调、在酸性溶液中游离状度下为棕红色，当它通过疏水作用与蛋白质结合后，变成蓝色，最大吸收波长从465nm转移到595nm处，在一定的范围内，蛋白质含量与 595nm的吸光度成正比，测定595nm处光密度值的增加即可进行蛋白质的定量。

以上便是实验室中常见的几种蛋白浓度测定的方法，另外还有凯氏定氮法和BCA法，有凯氏定氮法结果最精确，但操作复杂，BCA法又以其试剂稳定，抗干扰能力较强，结果稳定，灵敏度高而受到欢迎。

Ⅲ 检测食品中蛋白质最常用的方法

一般是根据产品标准要求选测定方法的，食品中蛋白质测定的最常用方法当然是凯氮测定法：常量凯氏定氮法和微量凯氏定氮法。
我大学时还做过考马斯亮蓝
半微量定氮法，与最新标准一致，我这有稍微简化的方法：
以饼干为例：称取2.000克于定氮瓶中，加20mL浓硫酸，加0.2g硫酸铜，加3.0g硫酸钾，然后进行消化，消化至澄清液体后倒入100mL具塞比色管，3次清洗定氮瓶，洗液并入100mL具塞比色管，蒸馏水加至100mL刻度线，摇匀，取10mL进半微量定氮装置蒸馏，收集瓶中为2%硼酸溶液10mL，以甲基红-亚甲蓝为指示剂2滴，用购置的0.1000标准溶液进行滴定，步骤结束。
要点：称量需准确；吸取也准确；玻璃仪器需检定合格。

Ⅳ 用什么方法检测蛋白质

目前食品中蛋白质的测定方法有蛋白质自动分析仪，近红外自动测定仪，紫外分光光度法以及凯氏定氮法等。本文采用纳氏试剂作为显色剂测定食品中蛋白质含量，适用范围广，可用于各类食品及保健食品的检测。用本法对标准品、质控样品进行测定获得满意结果，对批量样品的快速测定更具有实用性。现将结果报告如下。

材料与方法

仪器与试剂 WFZ800-D3型紫外分光光度计(北京第二光学仪器厂)。分析纯硫酸、硫酸铜、硫酸钾。(1)纳氏试剂：称取碘化汞100g及碘化钾70g，溶于少量无氨蒸馏水中，将此溶液缓缓倾入己冷却的32%氢氧化钠溶液500ml中，并不停搅拌，再用蒸馏水稀释至1L，贮于棕色瓶中，用橡皮塞塞紧，避光保存。(2)硫酸铵标准储备溶液(1.0g/L)：精确称取经硫酸干燥的硫酸铵0.4720g，加水溶解后移入100mL容量瓶中，并稀释至刻度，混均此液每毫升相当于1.0mgNH3-N(10℃下冰箱内储存稳定1年以上)。(3)硫酸铵标准使用溶液(0.01g/L)：用移液管精密吸取1.0ml标准储备液(1.0g/L)于100ml容量瓶内，加水稀释至刻度，混匀，此溶液每毫升相当于10.0μg NH3-N。

方法

标准曲线绘制 取25ml比色管7支，分别准确吸取0.01g/L硫酸铵标准使用液0.00，0.5，1.0，3.0，5.0，7.0，10.0ml(相当于标准0.0，5.0，10.0，30.0，50.0，70.0，100.0μg)，加水至10ml刻度，于标准系列管中各加2ml纳氏试剂，混匀后放置10min，移入1cm比色皿内，以零管为参比，于波长420mm处测量吸光度，以标准管含量为横坐标(μg),对应的吸光度(A)值为纵坐标绘制标准曲线。

样品测定 选择牛奶和奶粉为检测样品。精密称取样品0.1～2.0g置于250ml三角瓶中，加入0.2gCuSO4、1.0gK2SO4、硫酸10ml，先小火加热，待内容物全部炭化，泡沫停止后，加大火力至液体呈蓝色，使H2SO4剩余量约为3ml左右为止，室温放冷后，沿瓶壁慢慢加入10ml水，移入100ml容量瓶中，用少量蒸镏水洗三角瓶3次，洗液全部并入容量瓶中，冷却，加蒸馏水至刻度，混匀。测定时取0.5ml，加水至10ml刻度，以后操作同标准曲线。同时做空白试验。

计算公式

X=c×Fm×V2V1×1000×1000×1000

式中：X-试样中蛋白质含量(g/100g或g/100ml)

C-试样测定液中扣除空白后氮的含量(μg)

V1-试样消化液定容体积(ml)

V2-测定用消化液体积(ml)

m-样品质量(g)或体积(ml)

F-氮换算为蛋白质的系数。

蛋白质的氮含量一般为15%～17.6%，按16%计算乘以6.25即为蛋白质，乳制品为6.38，面粉为5.7，肉及肉制品为6.25，大豆为5.71。

结果

2.1 测定波长选择 含氮量为30μg的标准管在显色后，在波长400～440mm范围内每间隔5nm进行测定，最大吸收波长为420mm。

显色剂用量选择 含氮量为30μg的标准管分别加入不同量的纳氏试剂，在420mm的波长下分别测定其吸光度结果。纳氏试剂显色剂加入量为1.5～3.0ml时吸光度基本无变化，本法选择加入纳氏试剂2.0ml。

显色时间及稳定性 含氮量为30μg的标准管经显色后，分别在10，30min，1，2，4，8h进行测定。显色后10min～8h内吸光度稳定无变化。本法选显色10min后测定。

标准曲线 回归方程：y=0.016X-1.5×10-3，r=0.9998，最佳线性范围0.0～100μg。

精密度 牛乳和奶粉2种样品分别取6份按本法重复测定6次，牛乳和奶粉精密度测定结果：平均数分别为3.06，23.50；标准差分别为±0.029，±0.073；相对标准偏差分别为0.31%，0.94%。

对2种样品利用标准加入法作回收试验(表1) 结果可见，回收率为95.50%～99.44%。

2种方法测定结果比较 分别用GB/T5009.5-2003凯氏定氮法与本法测定。结果显示，2种分析方法的测定结果差异无统计学意义(t=0.026，P>0.05)。

测定标准物质 用本法测定4种不同的蛋白质标准物质，测定结果与标准物质含量一致。

以纳氏试剂作为显色剂快速测定食品中蛋白质的方法特点简单、快速，适用于批量样品测定。在碱性条件下NH3-N与纳氏试剂反应生成的黄色化合物稳定。本法与国标凯氏定氮法进行比较t=0.026,P<0.05，n=32，2种方法测定结果无明显差异。测定范围广，线性范围宽0.0～100.0μg；精密度高；相对标准偏差为0.31%～0.94%；回收率好，加标回标率为95.50%～99.44%。用本法测定标准物质结果一致，用于质量控制样本测定结果满意。本法仪器试剂简单，易于基层普及，有利于推广应用。

Ⅳ 这个医院尿蛋白+，那个医院测又没了，尿蛋白的测定方法有哪些

应该这样问更合理 ：

为什么这个医院尿蛋白+，那个医院测又没了？

或者：这个医院尿蛋白+，那个医院测又没了，为什么？

而提问者的问题突然跑到尿蛋白的检测方法上去了。

一、尿蛋白的检测方法，就有两种 ：尿蛋白定性检测和24小时尿蛋白定量检测。

1、定性检测是收集早上的第一次小便的中段尿送检。

2、定量检测需要把从头天早上到第二天早上点对点24小时内的尿液全部收集起来，记录总尿量，混匀后取少量送检。

二、为什么检测结果不一样：

这时临床中常遇到的情况之一，

还有遇到的情况之二：就是同一家医院的两次检测的结果也是这样（不一样），即：这次蛋白1+，下次没有；还有可能：这次是蛋白1+，另一次或2+，乃至3+或4+。

（一）、在同一家医院的两次检查结果不一样的 ：

1、假设医院的化验没错，就是说结果都是正确的，然后又推出如下的可能性（1）人没有毛病，（2）人有毛病，至于什么毛病先不管。

人没毛病怎么会有蛋白呢？

是的，没毛病也会蛋白的，说明蛋白不是肾脏里漏出来的，而是自身的污染造成的。比如男性的前列腺液、精液；女性的阴道分泌物或外阴的分泌物。因为不会保证每次都有污染物所以就会有的时候是阳性，有的时候是阴性，基于此，严格的留取尿液标本（取样）的方法是：男性要排出一部分尿液后再留取（中段尿）；女性的不能在经期留取，要在经期过后3天之后，而且要清洗外阴后留取中段尿，非经期也可直接留取中段尿，或清洗外阴后留取更准确。如果是这种情况，再留取一次中段尿，结果肯定是阴性。

人有毛病，那怎么还会阴性呢？

有毛病也有轻有重，还有就是不同的毛病引起的。就是说，即使有毛病，也不是每时每刻排除的蛋白的量是恒定不变的，也有量多和量少的时候，量稍微多一点就1+，稍微少一点就阴性了。如果量很多，不论那次肯定都会是阳性，只不过有时候是1+，有时候多至4+。这时候要进一步查找到底是什么原因导致的。可以说尿液里蛋白阳性不一定一定是肾脏的疾病引起的，还可以是前列腺或膀胱或尿道引起的。

2. 假设，医院的化验有错。

可以推出，要么是人员操作有误，要么是机器或试剂本身有误。可以反复多验几次来证实，或通过第三家医院的化验来证实。

（二）、在不同的医院出现不一样的结果，可以推理出如下的可能性 ：

1、尿液里肯定有蛋白，阴性的结果的医院化验不准，其原因有两种可能性：a、人操作不正确；b、机器不准确，不论是试剂的问题还是程序的问题，还是其它问题都有可能。怎么证明呢？正确取得同一次（尿液）样本后，分送不同的医院，或同时送第三家医院！即使这样送，也不敢保证第三家的一定是准确的。

2、尿液里肯定没有蛋白，就能推出，第一个医院的化验不准。证明方法同“（二）中的1”。

3、两家医院的化验都准，那就是上面的“（一）”里分析的那些可能性。这时通过正确取样，反复化验来检验，或去第三家医院进行验证。验证的最佳方法是用同一天同一次的尿液样本分别送不同的医院。

简单说就是：要么是两家医院的化验结果都没错。要么是其中的一家的化验结果有错。 捎带着分析了一下假设同一家医院出现检测结果不一致的原因的可能性。

蛋白尿“+”，是指尿常规检查，尿中检测出蛋白质的一种异常结果。也是尿蛋白定性检测为阳性的一个表现。如果结果是“—”，就是尿蛋白定性检测为阴性。

为什么会出现这个医院化验尿蛋白+，而另一个医院化验又没有了？那是因为尿蛋白的来源有很多，首先我们分为生理性蛋白尿及病理性蛋白尿。按照部位不同，分为肾小球性蛋白尿和肾小管性蛋白尿。还有一种叫溢出性蛋白尿等等。

生理性蛋白尿常常见于发热以后、运动以后、暴饮暴食以后，还有一些特殊体位等等。我们叫体位性蛋白尿。病理性蛋白尿则见于各种各样的肾脏疾病。

所以，在我们去医院化验尿液的时候，一定要避免上述发热、运动、暴饮暴食等等。

尿蛋白定性检测，临床上有六个描述，分别为—、+—、+、++、+++、++++。表示为尿蛋白的浓度从阴性到逐渐升高达最高浓度的四个加号。而影响尿蛋白的浓度，一方面与肾脏疾病的严重程度有关，另一方面与我们的饮水量有关。也就是说，如果病人一天的饮水量比较大，尿蛋白就会被稀释，化验的结果就很好甚至是阴性。如果病人这一天饮水量少，尿蛋白就会被浓缩，化验结果就很差。

一个“+”的蛋白尿，相对是尿里面的蛋白浓度比较低。如果是在运动后、感冒发热以后、暴饮暴食后或者劳累以后化验为“+”蛋白尿，而平时正常状态下化验结果阴性，考虑为生理性蛋白尿。如果平时正常状态下化验结果为“+”，这一天饮水量比较大再化验结果为正常范围，仍然考虑为病理性蛋白尿。

因此，为了准确起见，化验小便时，应该是在正常情况下，取晨尿，也就是起床后的第一次小便。

不过，为了慎重起见，只要发现了蛋白尿，我建议需要进一步检查。

比如24小时尿蛋白总量，比如尿蛋白肌酐比值测定，比如尿蛋白电泳检查，比如尿微量白蛋白检查。

正常情况下，24小时尿蛋白总量30mg/24h，则称为微量白尿蛋白。

如果确实检测发现有蛋白尿，我们需要做尿蛋白电泳检查，以区分是选择性蛋白尿还是非选择性蛋白尿。非选择性蛋白尿也叫混合性蛋白尿，有较强的临床意义。

由此可见，临床上，检测蛋白尿的方法，一般有尿常规检查（尿蛋白定性），24小时尿蛋白总量，尿微量白蛋白检测，尿蛋白肌酐比值，尿蛋白电泳等五种方法。

如有不同意见，欢迎大家讨论。

非常感谢题主的邀请，这个问题比较偏门，但又比较专业，要解释起来还是比较抽象的。在临床上尿常规中蛋白的异常这属于肾内科的诊治范围，有时候确实有题主所说的这种情况，今天查“蛋白一个+”，明天查可能又没了。这有可能本身就是生理性蛋白尿，过一天后消失了其实也在情理之中，另一种情况就是和尿蛋白的检测方法有关，今天我就着“重尿蛋白的检测方法”来讲解。

前言

目前尿蛋白的检测方法主要包括 定性检查、定量检查、尿微量白蛋白测定和尿蛋白电泳分析 四大类，具体如下：

（一）尿蛋白定性检查

●试纸法

① 这是根据指示剂蛋白误差的原理，通过尿蛋白与试纸中指示剂 （例如四溴酚蓝） 结合产生的颜色反应，与标准颜色对比， 可以初估蛋白量 ，自动化分析仪可根据颜色深浅得出蛋白定性的结果，无非以下六种结果： 阴性 （＜0.1g/l）、 ± （0.1-0.2g/l）、 ＋ （0.2-1g/l）、 ++ （1-2g/l）、 +++ （2-4g/l）、 ++++ （＞4g/l）。

② 试纸条法对尿中不同蛋白质的敏感性其实各有不同。相对来讲，对白蛋白是最为敏感的，对球蛋白敏感性相对差一些。比如多发性骨髓瘤患者（球蛋白高）尿液中可出现大量的游离轻链，但是试纸法检测结果就可以呈“阴性”。注意了，这个检测方法要求 尿液必须新鲜 ，如果是变质的尿液产生的PH变化则会影响到实验检查结果，如果尿PH增高则可产生假阳性，所以这需要注意鉴别。

●磺基水杨酸法（磺柳酸法）

这种方法的灵敏度在0.05-0.1g/L，它的原理主要就是带负电荷的磺柳酸与尿中带正电荷的尿蛋白质相结合形成不溶性蛋白盐沉淀，然后根据浊度来用加号表示。这里其实无非也是以下六种结果： 阴性 （无浑浊现象）、 ± （轻微浑浊，隐约可见）、 + （明显的白色浑浊，但无颗粒出现）、 ++ （稀薄乳样浑浊，出现颗粒）、 +++ （乳浊，有絮片状沉淀）、 ++++ （絮状浑浊，有大凝块下沉）。这个试验比较灵敏，与清蛋白、球蛋白、糖蛋白和本周氏蛋白均能发生反应， 可作为干化学法检测尿蛋白的参考方法、

●加热醋酸法

这种方法的灵敏度为0.15g/L，它的原理则是加热使蛋白质变性凝固，加酸使尿液酸化利于蛋白沉淀，并使之析出的碱类盐溶解。其实它也是根据 尿液浑浊程度以及沉淀的多少 来判断结果（阴性-++++）。注意了，这种方法如果加酸过多，，蛋白质微粒获得电荷增加，可呈假阴性反应，所以在试验中可先加 1-2滴饱和氯化钠液 与尿液中，再进行操作误差则会小的多。

（二）尿蛋白定量检查

●双缩脲比色法

它是以磷钨酸乙醇溶液沉淀尿中的蛋白质，在碱性介质中蛋白质与铜离子形成紫色的络合物，与标准液比色来得出尿中蛋白质的含量。注意了，这个试验呢需准确的记录24小时的尿量，然后将尿液混合后再离心，当蛋白浓度较高时应稀释标本再操作。若疑有药物干扰时，可将尿蛋白沉淀用 无水乙醇洗涤3次 再操作。

●丽春红S法

操作方法是在尿标本中加入三氯醋酸和丽春红染料，形成尿蛋白染料复合物，然后离心沉淀，再加碱溶液使沉淀溶解。最后通过 比色测定 并计算蛋白含量。注意了，当尿中的血红蛋白浓度较高时会影响结果。离心后标本的上清液必须要全部去除，如果沉淀中夹带丽春红S则会 影响检测结果。

●考马斯亮蓝法

在酸性环境中，棕红色的考马斯亮蓝与尿蛋白通过疏水力结合，产生蓝色化合物，光谱吸收峰改变，这时候再 与标准液相比即可测定出尿蛋白的含量。 这种方法灵敏度较高，可测尿蛋白浓度范围为0.01-1g/L,需要样品量少，但不同蛋白之间差异较大。注意了，考马斯亮蓝溶液需要 定期新鲜配置 ，过滤后才可使用。

（三）尿微量白蛋白检测

当尿总蛋白定量在正常范围内，而尿白蛋白排泄率达20-200ug/min或尿白蛋白量＞30mg/d时，我们称为微量白蛋白尿。这主要可用于肾脏疾病的早期诊断， 如糖尿病肾病、高血压肾病、隐匿性肾炎时，尿微量白蛋白含量增加 ，并且很多出现时间在尿蛋白定性阳性出现之前，所以这个项目也是肾脏疾病早期诊断的指标之一。操作方法则可通过 放射免疫测定、免疫比浊法 、折射法 等方法进行检测。

（四）尿蛋白电泳分析

由于不同的尿蛋白发生机制可导致尿蛋白的组成成分不同，因此通过电泳技术可以为临床提供很有价值的诊断依据。 如果肾小球滤过屏障完好 ，尿蛋白含量极低，则电泳后染色的蛋白质条带信号极弱，以白蛋白条带为主； 如果肾小球滤过屏障异常 ，而肾小管重吸收功能正常，滤过的小分子蛋白不超过肾小管的重吸收阀值，电泳后蛋白条带常显示为大分子蛋白质和白蛋白； 如果肾小管功能受损和滤过量过多 ，则会同时出现小分子量的蛋白质条带。这个项目目前常用的检测方法主要有 醋酸纤维薄膜电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳 。

综合总结

关于尿蛋白的检测方法不论是定性检查、定量检查、微量白蛋白检测还是尿蛋白电泳分析均已详细的进行分析，题主所问到的“ 感觉尿常规里面的蛋白有时候一个加号，过一天再测又没了，这和测定方法有关系吗”， 我想说这和不同的检测方法是有关系的，由于其影响的因素比较多，所以会出现假性结果，这时候就不要过早下结论， 可多复查几次，并结合病史、临床症状来综合评判，也不可一味相信辅助检查结果。

回答这个问题之前首先应该清楚以下情况：

1，是同一次尿液，同一天在不同的医院检测的结果吗？

2，还是，同一个人，不是同一次尿液，不是同一天，在不同的医院检测的结果？

3，两次检查尿液标本都是清晨第一次尿液吗？

4，两次检查尿液标本都是头段尿液，还是留取的中段尿液？

5，患者是男性还是女性？

这些问题都会影响尿液蛋白的检测结果！

我来详细根据上述情况，分析检测结果的差异性！

同一次尿液，，同一天在不同的医院检测尿液蛋白，结果不一致，这种情况是仪器和试剂的问题！不同的医院检测尿液的仪器不一样，试剂也不一样，结果会有差异性，尤其是尿蛋白在+和-之间。

同一个人，不是同一次尿液，不是同一天，在不同的医院检测尿液蛋白结果不一致，这种情况有标本的问题也有仪器和试剂的问题，不建议才用这种方法检查。

两次检查尿液标本都是清晨第一次尿液？清晨第一次尿液很容易受到尿道分泌物和外阴分泌物的污染，导致尿液蛋白假阳性。

两次检查尿液标本都是头段尿液还是留取的是中段尿液！头段尿液极易受到分泌物的干扰，

性别对尿液标本的留取也有干扰性，男性患者如果有尿道炎，尿道分泌物会引起尿蛋白假阳性，尤其是头段尿液！女性患者外阴分泌物很容易影响尿液蛋白的检测，尤其是合并阴道炎的，阴道分泌物会进入尿液标本，导致尿液蛋白假阳性！

处理方法：

建议最好选择同一家医院检测，检测结果具有可靠性。

尿液标本的留取，最好留取至少2个小时的尿液（尿液在膀胱内的时间），并且留取中段尿液，最好是在留取尿液标本前清洗一下外阴，避免分泌物对检测结果的影响！

如果检测结果呈现阳性结果，建议重复检查一次，并且选择同一家医院进行检测，动态观察结果改变情况！

另外，尿蛋白的测定方法有哪些？就目前而言，现在绝大多数医院采用的是全自动尿液分析仪，尿蛋白是通过干化学法，仪器自动扫描测定的。有的小诊所或者个人在家使用干化学纸条，目测结果，具有差异性！

尿蛋白的检验方法，有3种，分别是尿蛋白定性试验、尿蛋白定量测定、尿蛋白电泳分析。

①尿蛋白定性试验：通常采用蛋白试纸法、磺基柳酸法、加热醋酸法3种方法。正常情况下，尿蛋白定性试验呈阴性。但此种检查方法易受一些因素的影响，可致假性结果，如尿酸盐含量高时，尿呈酸性反应，蛋白试纸法结果较实际情况低，磺基柳酸法易呈假阳性；大量使用青霉素时，磺基柳酸法易呈假阳性反应；使用磺造影剂时，磺基柳酸法、加热醋酸法均可出现假阳性反应；当尿呈强碱性时，假性结果更多，或出现蛋白试纸法假阴性反应，或出现磺基柳酸法和加热醋酸法的假阴性反应。当尿蛋白仅为一些特殊蛋白质时，蛋白试纸法和磺基柳酸法均不敏感。因此，在进行尿蛋白定性时，应综合各种因素，具体情况具体分析，选择适宜的方法。尽管定性试验比较方便，但有时难以反应蛋白尿的实际情况，有条件时，最好进行定量检查。

②尿蛋白定量测定：一般进行ECTkey=24小时尿蛋白定量 target=_blank24小时尿蛋白定量检测。 使用的方法比较多，有些方法虽然比较精确，如凯氏定氮法、双缩脲法等，但操作很复杂。临床多采用简易的半定量法，如艾司巴赫氏定量法、磺基柳酸比浊定量法。24小时尿蛋白定量在0．15～0．5克之间为微量蛋白尿，在0．5～1克之间为轻度蛋白尿，在1～4克之间为中度蛋白尿，大于4克（有学者定为3．5克）为重度蛋白尿。

③尿蛋白电泳分析：常用的方法有醋酸纤维薄膜电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、尿蛋白免疫电泳等方法。该方法主要从确定尿中蛋白质的种类出发，通过区分不同尿蛋白的种类，对某些疑难病症如多发性骨髓瘤、重链病等有诊断和鉴别诊断的意义。同时可以区别尿蛋白的分子量大小，这对区别蛋白尿的来源，以及检查尿中是否有特殊蛋白质具有重要的意义。

在你肾内医生面前卖弄一下。尿液的测定受影响因素较多。首先是和测量尿的时间有关，一般是晨尿较能反映正常水平，另外和前几天的饮食、饮水量有关联。还有和测量试剂、机器调试有关，测量过程中，一般要求换导管，清水清洗机器。还和前几个患者有关，但无论如何清洗，总有可能一些残液遗留，只要在允许范围内即可。况且又不可能每次化验前都让工程师来检测仪器，只能凭经验。所以，假如上一个病人尿蛋白含量高，就会影响下一个人的检测结果，这也就是为什么对蛋白含量一个+号要求病人复查或换医院检测

的原因。

您好，我是一名从事临床多年的内科医生，希望我的回答能帮到您。

临床上常用的判断尿蛋白的检测方法主要有二种：尿蛋白定性试验、尿蛋白定量测定。

一、尿蛋白定性试验： 目前几乎所有医院的尿常规检查里都包含尿蛋白定性这一项目。尿蛋白阳性提示可能存在各种急性肾炎、慢性肾炎、肾结核、泌尿系统感染甚至高热等情况。不过尿蛋白定性的结果分为阴性、阳性（包括一个+到四个+）。您所说的这种一个加号时有时无的情况其实在临床上也比较容易出现，但不是所有的阳性都一定是肾脏的器质性疾病导致的。因为这种检查方法易受一些因素的影响，出现假阳性结果。因此，在进行尿蛋白定性时，应综合各种因素，具体情况具体分析。特别是您所得这种一个加号时有时无的情况，为了确定是否准确，我们会推荐第二种方法。

二、尿蛋白定量测定 ：一般用一个小桶收集24小时的尿液，然后取样本进行尿蛋白的定量检测。24小时尿蛋白定量在0．15～0．5g之间为微量蛋白尿，大于0．5为蛋白尿阳性，大于3．5g就是为大量蛋白尿（多见于肾病综合征）。这种检测方法区别于定性实验，可以有具体的数值表示尿蛋白的多少，而且受其它因素干扰相对少，能准确反应身体真实情况。

临床上大多数情况下不能仅凭某一项异常指标或者某种症状就能妄下定论，因此，您所描述的这种情况建议进一步做24小时尿蛋白定量测定，如果数值低于0．15g，那就说明尿蛋白定性实验可能是假阳性结果。最后，祝您身体 健康 ！

可能蛋白量不多，各个医院检测的敏感性不一样。另外是不是都是晨尿，因为一个加的尿蛋白有可能多喝点水稀释一下就下降到定性测不出来的水平。建议同时查尿微量白蛋白和尿蛋白定量。

您好，很高兴能够回答您的问题。

尿蛋白“+”是尿常规中很常见的一项指标，也是提示肾脏是否出现问题的提示指标

尿蛋白的出现有两种可能，一是生理性的 二是病理性

病理性，常见的就是慢性肾脏病，不过只是出现一个加号并不能进行确诊，还是需要进一步的进行专业检查确诊；

生理性，日常的饮食，生活习惯，环境，小便器不干净，运动过量，感染，炎症等情况都有一定关系，一般保持良好的生活习惯，调整饮食3-5天左右的时间就会恢复正常。

测量蛋白尿的方式有两种一是，可以到医院进行尿常规检查，这样就是稍微比较麻烦以及费时间；二是，可以自行购买一些尿蛋白试纸，自己测的也比较方便。

Ⅵ 血红蛋白仪怎么用

血红蛋白的测定
[实验目的]
掌握用直接测定法和比色法测定动物的血红蛋白的含量。
[实验原理]
血红蛋白的颜色常与氧的结合量多少有关。但当用一定的氧化剂将其氧化时，可使其转变为稳定、棕色的高铁血红蛋白，而且颜色与血红蛋白（或高铁血红蛋白）的浓度成正比。可与标准色进行对比，求出血红蛋白的浓度，即每升血液中含血红蛋白克数（g·L-1）。
血红蛋白被高铁氰化钾氧化为高铁血红蛋白，后者再与氰离子结合形成稳定的氰化高铁血红蛋白（hemoglobin cyanide,HiCN）。HiCN在波长540 nm和液层厚度1cm的条件下具有一定毫摩尔消光系数。可用经校准的高精度分光光度计进行直接定量测定；或用HiCN标准液进行比色法测定，根据标本的吸光度即可求出血红蛋白浓度。
[实验对象]
动物种类不限。
[实验药品]
HiCN转化液（Van Kampen-Zijlstra液，文齐氏液※，标准商品）或1%HCl、HiCN标准液（200 g·L-1，标准商品）、蒸镏水、95%酒精、乙醚、75%酒精.
[仪器与器械]
血红蛋白计（或分光光度计）或沙里氏血红蛋白计、小试管、刺血针或注射器，微量采血管，干棉球。
[实验方法与步骤]
1.使用血红蛋白计直接定量测定
（1）XK-2血红蛋白仪板面结构如图 (6.2-1)：

（2）仪器的标定
①板面后的电源开关置于断。仪器的底部的支撑架打开。
②打开电源开关，选择键处于测试挡。
③按一下进样键，将蒸溜水吸入，预热30 min
④预热后将文齐试剂吸入，仔细调“调零旋钮”使显示屏上的数字显示为零。
⑤校正：吸入标准液(仪器配带有)后，缓缓旋转校正旋钮使显示屏上数字显示为已知的标准液的数值。定标即结束。以后调零和校正旋钮均不能动。
（3）在小试管中事先加入HiCN转化液(文齐氏液)5 ml。
（4）取血：可吸取从动物的指（尾）端流出的第二滴血，也可取静脉血和心脏血。用拇指和食指轻轻捏扁采血管的乳胶头，将采血管的一端水平接触血滴（若是抗凝血，须注意摇匀后再吸取），轻轻缓慢地松开拇指，利用虹吸现象使血液进入微量采血管至20 μl（第2个刻度）。用棉球擦去微量采血管尖端外周的血液。
（5）血红蛋白转化为氰化高铁血红蛋白：将微量采血管插入小试管HiCN转化液中，置血液于管底，再吸上清液2～3次，洗尽采血管内的残存的血液。用玻棒轻轻搅动管内血液，使之与HiCN转化液混匀。试管须静止5 min。
(6)将混合后的血液吸入血红蛋白仪，显示屏上的数字即为测定值，需稳定后方可读数(g·L-1)。
2.使用HiCN标准液比色法测定
（1）标准曲线绘制和K值计算：将标准HiCN液按梯度50 g·L-1、100 g·L-1、150 g·L-1、200 g·L-1进行稀释后（以此代表标准的血红蛋白浓度梯度），在波长540 nm、光径1.0cm条件下，分别测定各稀释液的吸光度(例如分别测得0.13、0.27、0.405、0.54)，以标准品血红蛋白含量为横坐标、吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。或求出换算常数K。

（2）以上述同样的方法取血，并使血红蛋白转化为氰化高铁血红蛋白。然后以转化液作空白，测定标本吸光度A。
（3）通过标准曲线查出待测样本的血红蛋白浓度或用K值来计算血红蛋白浓度，即
Hb（g·L-1）=K×A (6.2-2)
3.使用沙里氏血红蛋白计测定
沙里氏比色法是用HCl使血红蛋白酸化形成棕色的高铁血红蛋白，然后和标准比色板进行比色。
（1）沙里血红蛋白计 主要具有标准褐色玻璃比色箱和1只方形刻度测定管组成。比色管两侧通常有两行刻度；一侧为血红蛋白量的绝对值，以g·dl-1(每100 ml血液中所含血红蛋白的克数)表示，从2～22 g；另一侧为血红蛋白相对值，以%（即相当于正常平均值的百分数）来表示，从10%～160%。为避免所使用的平均值不一致，因此一般采用绝对值来表示。
（2）具体测定方法如下：
①用滴管加5～6滴，0.1mol·L-1 HCl到刻度管内,(约加到管下方刻度”2”或多或10%处)。
②用微量采血管吸血至20 μl(方法同上述)，仔细揩去吸管外的血液。
③将吸血管中的血液轻轻吹到比色管的底部，再吸上清液洗吸管3次。操作时勿产生气泡,以免影响比色。用细玻棒轻轻搅动，使血液与盐酸充分混合，静置10 min，使管内的盐酸和血红蛋白完全作用，形成棕色的高铁血红蛋白。
④把比色管插入标准比色箱两色柱中央的空格中。
⑤使无刻度的两面位于空格的前后方向，便于透光和比色。用滴管向比色管内逐滴加入蒸馏水，并不断搅匀，边滴，边观察、边对着自然光进行比色，直到溶液的颜色与标准比色板的颜色一致为止。
⑥读出管内液体面所在的克数，即是每100 ml血中所含的血红蛋白的克数。比色前，应将玻棒抽出来，其上面的液体应沥干净，读数应以溶液凹面最低处相一致的刻度为准。换算成每升血液中含血红蛋白克数（g·L-1）。
[注意事项]
1.取血前要做好充分的消毒。
2.血液要准确吸取20 μl，若有气泡或血液被吸入采血管的乳胶头中都应将吸管洗涤干净，重新吸血。洗涤方法是：先用清水将血迹洗去，然后再依次吸取蒸馏水、95%酒精、乙醚洗涤采血管1～2次，使采血管内干净、干燥。作为学生练习，微量采血管可反复使用。
3.使用血红蛋白仪测定时，吸样管应插入试管底部，避免吸入气泡，否则会影响测试结果。仪器连续使用时，每隔4小时要观察一次零点，即吸入文齐试剂，用“调零旋钮”使仪器恢复到零点。仪器用完后，关机前要用清洗液清洗。否则会影响零点的调整。
[实验结果]
报告该实验动物的血红蛋白浓度。并将全班的结果加以统计,用平均值±标准差表示。
[思考题]
血红蛋白的含量与年龄的关系？
影响血红蛋白含量的主要因素？
[附]：
※1.HiCN转化液：即文齐氏液，有标准商品出售。也可配制： 高铁氰化钾(K3Fe（CN）6)200 mg，氰化钾（KCN）50 mg，无水磷酸二氢钾（KH2PO4）140 mg，Triton X-100 1.0 ml，蒸馏水加至1000 ml。过滤后为淡黄色透明液体，pH 7.0～7.4，置有色瓶中加盖、冷暗处保存。如发现试剂变绿、变浑浊则不能使用。
2.用分光光度计直接测定血红蛋白
（1）取血、血红蛋白转化和比色同前述1、2的方法，得到标本的吸光度A。
（2）根据标本吸光度A直接计算出血红蛋白浓度：

式中 A：为波长540nm处标本吸光度。
44：为HiCN在波长540nm，光径1.0cm条件下的毫摩尔消光系数（L· mmol-1· cm-1）。
64485（mg）：为Hb的毫克分子量，即1 mmol·L-1 Hb溶液中的Hb毫克数。
1000：为将mg转变为g。
251：为血液稀释倍数。
因是通过分光光度计比色直接计算出血红蛋白浓度，因此分光光度计的波长和光程必须准确、灵敏度要高、线性好、无杂光，否则会影响结果的准确性。故仪器的校正在测定中十分重要。
上述介绍的几种方法中，以分光光度计直接测定和比色法测定血红蛋白较为精确，但对分光光度计的精密程度要求较高，分光光度计校正起来较为麻烦。沙里氏血红蛋白计测定操作简便适于基层单位，但准确性稍差。血红蛋白计操作较为简便，因有标准的商品试剂出售，因此也比较精确，目前普遍被医疗单位使用。

Ⅶ 尿微量白蛋白检测试剂盒怎样使用

尿微量白蛋白指高于正常，但常规方法无法检出的白蛋白尿，他的检测作为早期肾损害诊断的重要指标已受到广泛重视，测定方法包括放射免疫法、ELASA法等。应用较多的是免疫透射比浊法，但报告方式不一，有的以每升尿中白蛋白量表示，有的以24小时排泄量表示，常用的报告方式是以白蛋白/肌酐比值报告。我们以不同表示方法对正常人尿白蛋白的正常值进行了统计分析，并对部分高血压、糖尿病患者进行测定，现报告如下。 1.仪器与方法：尿微量白蛋白测定试剂盒，肌酐测定试剂盒均购于凯创公司。仪器应用瑞士产Cobas MIRA plus全自动生化分析仪。尿白蛋白测定，取标本10 ml，1 500×g离心10分钟，取上清10 μl，加缓冲液250 μl，抗血清50 μl，测定波长340 nm，反应温度37℃，测定时限300秒，5点定标，范围5～200 mg/L。肌酐采用Jaffe′s法，尿标本预先用生理盐水30倍稀释测定。
2.对象：对照组，健康人70例(男43例，女27例)，平均年龄41.2岁(21～54岁)，均排除高血压、糖尿病及其他和肾病有关病史。糖尿病组，42例(男28例，女14例)，平均年龄51.2岁(34～72岁)，病程2～20年。高血压组，62例(男39例，女23例)，平均年龄44.5岁(31～71岁)，血压范围160～190/95～120 mmHg，病程2～27年。临床诊断Ⅰ期21例，Ⅱ期41例，其中Ⅱ期患者以眼底动脉硬化或心脏改变为诊断依据，尿常规分析蛋白定性均为阴性。
3.标本：对照组均分别留取24小时尿和随机尿，测定24小时白蛋白和每升白蛋白及白蛋白/肌酐比值，并以不同方法计算正常值，患者组均取随机尿测定白蛋白及肌酐，以白蛋白/肌酐比值报告，以上标本均当日测定。 1.不同计算方法尿白蛋白正常值：以mg/L计算，范围2.2～41.7，均值12.7；以mg/gCr计算，范围2.7～26.1，均值8.1；以mg/24 h计算，范围2.4～34.3，均值11.4。因尿白蛋白值呈非正态分布，低值无临床意义，在建立参考范围时以百分位数法按单侧值95%上限确定。从以上结果可见，不同计算方法的结果正常值范围有明显差异，尤以每升结果报告时，由于受尿量影响较大，正常范围较宽，这样易使部分异常标本落入正常范围而延误诊断。
2.高血压组：诊断Ⅰ期、Ⅱ期高血压的标准是以是否累及血管、脏器为依据，我们测定的41例Ⅱ期患者中，常规尿蛋白定性均未发现肾脏损害，诊断是以眼底改变和心电图改变为主。我们将测定结果依据高血压病期、病程、舒张压水平分组进行统计，结果。Ⅰ期21例，范围4.6～38.2 mg/gCr，均值17.8 mg/gCr；Ⅱ期41例，范围5.1～62 mg/gCr，均值29.7 mg/gCr；舒张压95～105 mmHg 34例，范围4.6～43.4 mg/gCr，均值16.4 mg/gCr；舒张压106～120 mmHg 28例，范围5.0～62 mg/gCr，均值31.2 mg/gCr；病程2～10年19例，4.6～40.2 mg/gCr，均值13.1 mg/gCr；病程11～15年，28例，范围4.6～54.2 mg/gCr，均值19.3 mg/gCr；病程16～27年，15例，范围5.1～62 mg/gCr，均值37.2 mg/gCr。上述结果中以正常值? mg/gCr为界，Ⅰ期高血压中有4例超过正常值，Ⅱ期高血压中有14例超过正常值，说明这些患者已有轻度肾损害。尤其1期高血压中有五分之一患者出现尿白蛋白异常，尿白蛋白的值与病程及血压水平相关。
3.糖尿病组：42例糖尿病患者按病程分组，2～10年28例，尿白蛋白为5.2～39.6 mg/gCr，均值21.2 mg/gCr，大于25 mg/gCr 13例；11年以上组14例，结果为10.4～68.
1 mg/gCr，均值29.4 mg/gCr，大于25 mg/gCr 8例。通过了解病史并分析结果，坚持长期口服药物或注射胰岛素治疗者与不经常治疗两者结果间有明显差异(P?.01)。
测定尿微量白蛋白最理想的方法是留取24小时标本，但因留取困难，在实际应用上受到限制。随机尿测定是目前最常用，最易行的方法。但应同时测定肌酐，因每日肌酐排除量相对恒定，可避免尿量变化对结果的影响。
尿微量白蛋白测定是一种灵敏、简便、快速的测定方法，易于在常规实验室中广泛应用，对早期肾损害的诊断远远优于常规定性或半定量试验。