A. 怎样准确建立总黄酮的检测方法
本人最近提取植物总黄酮，其主要成分含有芦丁、槲皮素、异槲皮素、金丝桃苷、紫云英苷等多种黄酮类化合物。经查阅《国药大典》，以芦丁作标样建立标准曲线： 精密称取芦丁25mg ，加甲醇定容至25 ml ，取10ml 并且用蒸馏水释至100 ml 。分别准确吸取0、1. 0、2. 0、3. 0、4. 0、5. 0、6.0 ml 于25 ml 容量瓶中用10%甲醇定容各容量瓶至6ml，加含5 % NaNO2 水溶液1ml ，摇匀静置6 min ，再加含10 %Al (NO3) 3 水溶液1 ml ，摇匀静置6 min，再加含1. 0mol/L NaOH水溶液10 ml ，用蒸馏水稀释定容至刻度，摇匀静置16 min，在480～540 nm波长范围内扫描，确定最大吸收波长在508 nm处，得到芦丁浓度( x) 与吸光度( y) 的关系的回归方程。
B. 总黄酮与单体黄酮的测定方法有什么不同
总黄酮采用芦丁为标准品即可测定，单体黄酮需要对应的标准品。
黄酮含量的测定方法：
1、 对照法
1）
① 对照品制备：精密称取芦丁对照品20.8mg，置于100ml容量瓶中，加70%乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀。
② 样品溶液制备
精密称取样品0.50g，精密加入70%乙醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，称定重量，用70%乙醇补足减失重量，即得。
③ 标准曲线的制备
精密称取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置于25ml比色管中，加70%乙醇10ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加1mol/L氢氧化钠溶液10ml，加70%乙醇置刻度，摇匀，放置15分钟。各取10ml置于50ml容量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度。在510nm的波长下测定吸光度。
2）
①样品溶液的制备：
分别精确称取80℃恒温干燥的样品用50%甲醇回流提取，料液比1：15,提取两次，每次30min，将两次提取液合并浓缩至一定体积，用30%甲醇定容至50ml容量瓶中。从其中取出12ml溶液放入100ml容量瓶中，稀释至刻度，再从100ml容量瓶中取出1.5ml溶液，放至10ml容量瓶中，定容，为待测样品液Ⅰa和Ⅱa。 ②最大吸收波长的选择：分别作样品液Ⅰa、Ⅱa及芦丁标准品的吸收曲线，均在350 nm 处有一强吸收，因此选择350 nm为测定波长。
③标准曲线的制定：
精密称取芦丁对照品10.3mg，用少量30%乙醇溶解后，转移至50ml容量瓶，用蒸馏水定容至刻度。分别精密量取2ml、3ml、4ml、5ml、6ml芦丁溶液置于100ml容量瓶中，于350 nm 波长处测定吸光值，以芦丁空白为参比，以芦丁浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线，提示在4.12～12.36mg／103ml浓度之间，吸光度值与浓度呈现良好的线性关系。
④含量测定结果：
分别吸取2.2.1中Ⅰa和Ⅱa待测样品液各适量于石英比色池中，按标准芦丁一吸光度测定法，以样液空白参比，于350nm 波长下测定吸光值，计算各提取液中总黄酮含量。
计算公式为:样品总黄酮含量(%)=0.03692(A+0.1644)/W。
注:上式为通过回归方程转化而来，式中A为测得样品液的吸光度值，W为称样量。
C. 测定总黄酮含量方法
一 样品溶液的制备
70%乙醇溶液，料液比1﹕8 ，80度下回流2h。 取10g样品放入圆底烧
瓶中加入80ml 70%乙醇溶液回流2h,抽滤定容至100ml备用。使用时先
离心再用70%乙醇稀释10倍做样品溶液。
二 芦丁标准品的配置
精密称取芦丁2mg，加无水乙醇定容至10ml。制得浓度为0.2mg/ml芦
丁标准品溶液。
三 显色方法的确定
1 扫描原液 分别取芦丁溶液和样品溶液各1ml，加无水乙醇定容至 25ml，空白对照，全波扫描。
2 硝酸铝显色法 分别取芦丁对照品溶液和样品溶液各5ml，加5%亚硝酸钠 溶液（1.25g亚硝酸溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中) 1ml, 摇匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液(4,4014g硝酸铝.九水溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中) 1ml， 摇匀，放置6min，加4%氢氧化钠试液(2g氢氧化钠溶于无水乙醇中定容到50ml容量瓶中）10ml, 再加无水乙醇定容至25ml，摇匀，放置15min， 空白对照，全波扫描 bb 。
3 氯化铝显色法 分别取芦丁对照溶液和样品溶液各5ml ,加1%的氯化铝溶液（1g氯化铝溶于无水乙醇中定容到100ml容量瓶中)10ml，摇匀放置10min，空白对照，全波扫描。
4 氢氧化钾显色法 分别取芦丁对照品溶液和样品溶液各5ml，加3ml10%氢氧化钾溶液（2.5g氢氧化钾溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中），充分摇匀显色5min后，用无水乙醇定容至25ml, 摇匀，空白对照，全波扫描。
四 显色条件的确定
五 标准曲线的绘制
分别取1ml,2ml,3ml,4ml,5ml,6ml芦丁对照品溶液，按所选的显色方法测定
吸光度，绘制标准曲线。