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血清白蛋白检测方法

发布时间:2023-08-20 04:33:38

❶ 血清白蛋白测定注意事项

血清总蛋白测定一般采用双缩脲比色法,它是目前首先推荐的蛋白质定量方法。此法的原理是蛋白质分子中的肽键在碱性条件下与二价铜离子(Cu2+)作用生成蓝紫色的化合物,这种颜色反应强度在一定浓度范围内与蛋白质含量成正比,经与同样处理的蛋白标准液比较,即可求得蛋白质含量。此反应的优点是清、球蛋的反应性相近,操作简单,重复性好,干扰物质少,为首选的常亮知规方法,其缺点是灵敏度较低。
1.黄疸血清,严重溶血,葡萄糖,酚酞及溴磺酞钠对本法有明显干扰,故用标本空白管来消除。但如标本空白管吸光度太高,可影镇册响测定的准确度。
2.高脂血症混浊血清会干扰比色,可采用下述方法消除:取2支带塞试管或离心管,各加待测血清O.1ml.再加蒸馏水0.5ml和丙酮10ml,塞紧并颠倒混匀10次后离心,倾去上清液。将试管倒立于滤纸上吸去残余液体医|学教育网整理。向沉淀中分别加入双缩脲试剂及双缩脲空白试剂,再进行与上述桕同的其他操作和计御键宏算

❷ 测定血清总蛋白的参考方法是

总蛋白的六种检测方法
(一)凯氏定氮法
将血清与强酸一起加热消化,使血清中的含氮化合物转化为铵盐,再加碱使铵盐成为氨进经蒸馏分离出来,最后用酸滴定测定氮量,按每克氨相当于6.25g蛋白质计算蛋白质的浓度。
应用历史较久,结果较准确,是蛋白质测定的参考方法,但操作复杂,影响因素较多,且不少蛋白质的含氮量并非16%,不适用于日常工作,目前多用于标准蛋白的标定及校正其它的常规方法。
(二)双缩脲法
蛋白质中的肽键(-CONH-)在碱性条件下与Cu2+络合成紫红色复合物,产生的颜色强度在一定范围内与蛋白质含量成正比。
此反应和二分子尿素缩合后的产物双缩脲(H2N-CO-NH-CO-NH2)与碱性铜溶液作用形成紫红色的反应相似,故称为双缩脲反应。几分子中含有两个甲酰胺基(-CO-NH2)的化合物都能出现此反应。
因至少含2个-CONH-基团才能与Cu2+络合,所以氨基酸和二肽无此反应。体液中小分子肽含量极低,故血浆中除蛋白质外几乎不存在可与双缩脲试剂显色的物质,且各种蛋白质显色程度基本相同。
此法简便、准确、重复性好,在10-120g/L。浓度范围内呈良好的线性关系,批内CV值<2%,但灵敏度较其它方法稍差,是目前临床上最常规的方法。
(三)酚试剂法
蛋白质分子中的酪氨酸残基和色氨酸残基能够和酚试剂中的磷钨酸-磷钼酸反应生成蓝色化合物。Lowry改良法在酚试剂中加入Cu2+,提高了呈色的灵敏度,其中75%呈色靠铜离子产生。Lowry改良法的灵敏度为双缩脲法的100倍左右。
由于各种蛋白质中酪氨酸和色氨酸的比例不同,如白蛋白含色氨酸为0.2%,而在一些球蛋白中色氨酸含量高达2%~3%,因此使用本法测定纯粹的、单一的蛋白质较合适。此法灵敏度较高,为10~60ug/ml,因而适用于测定蛋白质含量较少的标本(如脑脊液),但试剂反应易受还原性化合物糖类、酚类及多种药物如水杨酸、氯丙嗪和某些磺胺药的干扰。
(四)紫外分光光度法
蛋白质分子内的色氨酸、酪氨酸等芳香族氨基酸可使蛋白质溶液在280nm波长处有一吸收峰,依此性质可用于蛋白质定量。
由于各种蛋白质中芳香族氨基酸的含量和比例不同,血清中游离的酪氨酸和色氨酸在280nm处也有吸收,因尿酸和胆红素在280nm处也有干扰,因而本法的准确性和特异性都受到很大的影响。
此法敏感而且简便,由于制剂未经任何处理,蛋白质的生物活性得以保留,故常用于较纯的酶和免疫球蛋白的测定。但此法需紫外分光光度计和石英比色杯。
(五)染料结合法
在酸性环境中,蛋白质分子解离出的-NH3+,可与染料的阴离子产生颜色反应。常用的染料有氨基黑、考马斯亮蓝等。这一性质可用于电泳后蛋白质的染色和血清总蛋白测定。
此法操作简便、重复性好、灵敏度高、且干扰因素较少。缺点是特异性不高,分子量3 000以上的多肽也参与反应。另外,不同蛋白质和染料的结合力不一致,因此很难找到一种合适的物质作标准物,使此方法的应用受到限制。
(六)比浊法
用某些酸类(如二氯醋酸、磺基水杨酸等)和血清蛋白质结合产生沉淀,然后测定其浊度,与同样处理的蛋白标准液比较,即可求得蛋白质含量。
此方法简便,不需特殊仪器。缺点是浊度形成的强弱易受多种因素影响,如加入试剂的方法、反应时的温度等。另外,蛋白质沉淀时易形成絮状物,难以获得稳定的悬浮液

❸ 血清白蛋白的测定方法

通过双缩脲试剂可与蛋白质发生有颜色产物的反应方法来测定。

人血浆白蛋白是冻干制剂应为白色或灰白色的疏松体,液体制剂和冻干制剂溶解后,溶液为略粘稠、黄色或绿色至棕色澄明液体,不应有异物、混浊和沉淀。

白蛋白蛋白占血浆胶体渗透压卜埋的80%,主要调节组织与血管之间水分的动态平衡。由于白蛋白分子量较高,与盐类及水分相比,透过膜内的速度较慢,因此使白蛋白的胶体渗透压与毛细血管的静力压相抗衡,以此来维持正常与恒定的血浆容量。

在血液循环中,1g白蛋白可保留18ml水,故每5g白蛋白保留循环内水分的能力约相当于100ml血浆或200ml全血的功能,可起到增加循环血容量和维持血浆胶体渗透压的作用。

血昌冲浆白蛋白蛋白对某些离子和化合物有较高亲和力,能与这些物质可逆结合,发挥转运功能。白蛋白还为机体提供大量的氨基酸储备。50ml20%人血浆白蛋白的氨基酸储备功能相当于400ml全血。

(3)血清白蛋白检测方法扩展阅读:

药理作用

白蛋白蛋白占血浆胶体渗透压的80%,主要调节组织与血管之间水分的动态平衡。由于白蛋白分子量较高,与盐类及水分相比,透过膜内的速度较慢,因此使白蛋白的胶体渗透压与毛细血管的静力压相抗衡,以此来维持正常与恒定的血浆容量。

在血液循环中,1g白蛋白可保留18ml水,故每5g白蛋白保留循环内水分的能力约相当于100ml血浆或200ml全血的功能,可起到增加循环血容量和维持血浆胶体渗透压的作用。

血浆白蛋白蛋白对某些离子和化合物有较高亲和力,能与这些物质可逆结合,发挥转运功能。白蛋白还为机体提供大量的氨型迅蚂基酸储备。50ml20%人血浆白蛋白的氨基酸储备功能相当于400ml全血。

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