检测待测抗体方法

❶ HIV抗体检测

目前作为诊断手段使用的检测主要包括抗HIV病毒抗体检测、病毒培养、核酸检测和抗原检测。其中对病毒抗体的检测是最常规使用的方法。以下我们来看看HIV抗体检测方法吧。

HIV抗体检测是什么

艾滋病病毒进入人体后，人体免疫系统可以产生相应的艾滋病病毒抗体。检测血液中的艾滋病病毒抗体是目前最常用的确诊艾滋病病毒感染的实验室方法，即血清学检测。一般要经过两个步骤，首先做初筛检测，如果结果为阳性，再做确证检测，确证检测阳性才可诊断为艾滋病病毒感染。孕期做HIV抗体检查，是为了确认孕妇是否感染了艾滋病。如果感染了HIV病毒，则艾滋病抗体结果为阳性，正常孕妇HIV抗体为阴性。若孕妇感染HIV，可通过胎盘传染给胎儿，或分娩时经软产道感染。

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hiv抗体阴性

目前艾滋病是一种无可治愈的疾病，它给患者的生命健康带来巨大的伤害。那么，hiv抗体阴性是什么意思呢？

从有感染机会开始算起,经过三个月以上检查的是阴性的情况的话,可以确定没有感染。而且,现在正在使用的检查方法已经非常改善了,通常,有感染机会以后一个月的话就可以检查出抗体。因此,经过一个月(或者一个多月)以后的检查是阴性的话,感染的几率是相当的低的。如果经过两个多月之后的检查是阴性,可以说几乎不可能感染。但是,如果为安全计,确实要确定没有感染的话,推荐过了三个月以后检查和复查。

HIV抗体阴性是没有感染艾滋病病毒。如果感染了艾滋病病毒，抗体应该为阳性。但是要注意有一个窗口期，艾滋病窗口期通常为三个月时间，在这三个月之内，是查不出来的，是已经感染但还没有产生抗体。

hpv病毒预防

相信已经有不少女性朋友都听说过hpv病毒，但是了解得不够深入，比如说hpv病毒是怎么感染上的。那么，接下来我们来说一下，hpv病毒是什么来的？

HPV病毒是人类乳头瘤病毒的缩写，是一种乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒感染引起的一种性传播疾病。其中HPV16和18型长期感染可能与女性宫颈癌有关。如果阴道内存在此病毒感染时，导致宫颈癌的发病率非常高。因此如果有中度以上的慢性宫颈炎(又叫宫颈糜烂)时，则需要治疗，可以预防宫颈癌的发生。

关于女性生殖道感染HPV的流行情况，据2003-2004年来自美国的国家健康和营养研究课题的一个调查结果显示，14-59岁的HPV总感染率为26.8%，所以HPV感染在女性造成的负担超出之前的估计。

hiv核酸检测

怀疑有hiv可以进行hiv核酸检测来知道，那么hiv核酸检测多久出结果呢？

hiv核酸检测其实就是艾滋病的核酸检测，关于hiv核酸检测通常需要1周左右才能出结果，hiv核酸检测是通过PCR的方法检测患者血液当中是否存在HIV-RNA以及HIV-RNA的高低，检测相对来说比较准确，在感染HIV之后7-10天就可以在感染者的体内检测到HIV-RNA。

因此，在我们国家对于血液的检疫都会通过艾滋病的核酸检测，明确献血者是否感染艾滋病。对于确诊患者也会进行艾滋病的核酸检测，明确患者病毒量的高低，同时一旦确诊之后应当立即开始抗病毒治疗，在抗病毒治疗期间也应当进行艾滋病的核酸检测，明确治疗效果。

HIV抗体检测作用

孕期HIV检测，可为孕妇早预防、早治疗提供依据，改善孕产妇孕期生活质量，提高儿童健康水平。艾滋病是“获得性免疫缺陷综合征”的直译名称，是一种严重的免疫缺陷疾患，其病原体是HIV病毒。

母婴传染是艾滋病的主要传播途径之一，HIV病毒会通过胎盘传播给胎儿，会造成新生儿HIV病毒感染。此时复查目的是要再次确认孕妇早孕时所做的反应，检查孕妇本身是否带有或已感染。通过检查，便于医生在孕妇分娩时给予足够处理。

HIV抗体检测有必要做吗

孕妇都需要做艾滋病检测，因为HIV在体内有一定的潜伏期，没有症状出现，所以必须做这项检查。通过检测，可发现孕妇自身是否带有HIV。如果没有进行检测，可能会导致无法及时治疗，从而造成不可挽回的后果。带有HIV的孕妇在怀孕期间、分娩时，或透过母乳喂养，都可能把病毒传给宝宝。

HIV抗体检测现在是产检的一部分，在某些例子中，检验在怀孕晚期更是被反复进行。若检测发现孕妇带有HIV，可在怀孕之前或期间开始药物治疗可以改善健康，延长大部分罹患此病孕妇的生命。如果宝宝已经被传染，及早治疗可以缓解此病的进程，并提高生存的机会。

如果孕妈认为自己有HIV或艾滋病的风险，一定要让医生知道。医生可以监控孕妇的健康，协助孕妇避免会增加宝宝暴露在血液中的手术。医生也会确保宝宝接受适当的检验，并在产后接受感染的治疗。早期检验可以让被诊断有HIV的宝宝，接受抗HIV药物的治疗，这类药物可以延缓病程，提高生存几率。

HIV抗体检测什么时候做

HIV检查一般在第一次产检（孕12周）的时候检查。

孕期检测几次HIV

如果第一次检查结果为阴性，检查一次即可。但如果孕期有和艾滋病人接触过或怀疑自己有被感染的情况，可以再作检查。

HIV抗体检测怎么做

1、酶联法 ：即“酶联免疫法”，简称ELISA。它的中心就是让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来检测。步骤很简单：ELISA用血清来检测，首先血液要经过至少半个小时的凝集，然后取血清。将酶复合物用稀释液稀释后，加血清及阴性、阳性对照，还有质控品。经过一个小时的孵育，然后洗板，加底物，半个小时避光反应后加终止液即完成反应部分，然后读数。由数值来判断结果的阴性或阳性。

严格的讲，如果第一次检测为阳性的话，无论是哪个实验室，必须按照CDC的HIV操作规程来进行第二次检测，第二次的方法必须与第一次的不同，如还是阳性，将送艾滋病确认实验室确认。

2、快速法 ：即“金标法”，又叫“胶体金法”，金标法是国际上较为先进的灵敏，特异，快速，简便，准确率高的体外诊断方法。测定结果仅凭特制的检测试纸在短时间内即可获得。金标法（艾滋病检测试纸），取血后滴在试纸上，用15分钟的时间观察该试纸有无颜色变化。

艾滋病快速检测法可以在家里自己检测，操作简单方便，不需要特殊的仪器，在艾滋病试纸上先滴两滴血，再滴一滴稀释液，然后等待15分钟读取结果。结果判读也很简单，如果试纸上出现一条红色的直线，说明是阴性，如果是两条红线，就是阳性。如果检测出现阳性，按照HIV检测流程，需要进行复测。

使用快速法（艾滋病试纸）进行艾滋病自我检测应该在专业人员指导下进行，以确保整个自测操作过程规范正确，结果准确可靠。

3、蛋白免疫印迹法（WB）

艾滋病确诊实验室常用的方法，主要用于确认试验，当初筛出现阳性时，需采用此方法进行确认实验。基本原理是HIV全病毒抗原经过SDS-PAGE电泳，将分子量大小不等的蛋白带分离开来，然后再把这些已经分离的不同蛋白带电转移到硝酸纤维素膜上。将此膜切割成条状，每一条硝酸纤维素膜上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原。将待检血清样品用稀释液稀释成1/100，再把它直接加到硝酸纤维素膜上，恒温震荡，使其充分接触反应。血清中若含有抗HIV抗体，就会与膜条上的抗原带相结合。加入抗人IgG酶结合物和底物后，即可使有反应的抗原抗体结合带呈现紫褐色，根据出现条带情况判定结果。

HIV抗体检测注意什么

HIV检查需要空腹吗

HIV检查是定性试验而非定量试验，不受饮食和药物的影响，因而检测前不需要空腹、禁食。 另外，艾滋病病毒抗体的检测是特异性的，而且抗体水平不受体温、药物等的影响。因此，一般性的生病、服药不会影响艾滋病病毒抗体检测结果。

HIV检查能喝水吗

HIV检查能喝谁。HIV检查是指采用实验室方法对人体血液、其他体液、组织器官、血液衍生物等进行病毒以及抗体相关指标检测，喝水吃饭都没有影响。

HIV检查多久出结果

HIV检查分为初筛和确证两个步骤。初筛酶联免疫试验需要大约两到三个小时，如果用快速试剂进行初筛检测，则可以在半小时之内出结果。初筛试验结果阳性就需要做进一步复检和确证，确证检测的时间是一到两天。但以上仅仅是试验本身的时间，具体操作时还需考虑标本运送时间和各个试验室的工作安排，各个实验室的情况不一样，很难有统一的标准。在传统检测中，收集到的样本要送到一个中心实验室进行检测，这种方法可能会要求孕妇一周后或更长时间后回来看结果。

HIV检验单怎么看

如果感染了HIV病毒，则艾滋病抗体结果为阳性，正常孕妇HIV抗体为阴性。

1、无症状HIV感染：无任何临床表现，HIV抗体阳性，CD4淋巴细胞总数正常，CD4/CD8比值＞1，血清p24抗原阴性应诊断为无症状HIV感染。

2、实验室检查：抗HIV抗体阳性，CD4淋巴细胞总数〈200/mm3，或200-500/mm3；CD4/CD8比值〈1；血清p24抗原阳性；外周血白细胞计数及血红蛋白含量下降；β2微球蛋白水平增高，合并机会性感染病原学或肿瘤病理依据均可协助诊断。

孕妇hiv阳性

若孕妇HIV为阳性，即为带菌者。目前尚无治愈方法，主要采取抗病毒药物治疗和一般支持对症处理。HIV感染的孕产妇如果在产前、产时或产后正确应用抗病毒药物治疗，其新生儿HIV感染率有可能显着下降（〈8%）。

1、抗病毒药物：妊娠期应用核苷类反转录酶抑制剂齐多夫定（zidovudine,ZDV）可降低HIV的母婴传播率。用法：500mg/d口服，从妊娠14-34周直至分娩。临产后：首次2mg/kg静脉注射后1mg/（kg?h）持续静脉滴注直至分娩。产后8-12小时开始，齐多夫定2mg/kg，每6小时1次，至产后6周。

2、其他免疫调节药：α干扰素、IL-2等也可应用。

3、支持对症治疗：加强应用，治疗机会性感染及恶性肿瘤。

4、产科处理：尽可能缩短破膜距分娩的时间；尽量避免使胎儿暴露于血液和体液危险增加的操作，如会阴侧切术、人工破膜、抬头吸引器或产钳助产术、宫内胎儿头皮血检测等；建议在妊娠38周时选择性剖宫产以降低HIV母婴传播。不推荐HIV感染者母乳喂养。对于产后出血建议用催产素和前列腺素类药物，不主张用麦角生物碱类药物，因其可与反转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂协同促进血管收缩。

HIV阳性孕妇能生健康宝宝吗

HIV检测为阳性的孕妇，有可能生健康的宝宝，目前母婴阻断技术比较成熟，同时也需要全程管理与监护。孕妇将艾滋病传给婴儿主要通过三种方式：第一种是通过胎盘，第二种是通过产道（在分娩的过程中传播），第三种就是母乳喂养。这三种途径加起来的几率大概是在35％-45％，也就是说阳性的孕妇如果生小孩，她传给小孩的几率在35％-45％之间。因为目前艾滋病还没有可以治愈的药物，所以如果宝宝感染艾滋病，存活的时间比较短，很少可以活到15岁，所以如果发现孕妇呈艾滋病病毒阳性的话，一般医生会告诉孕妇实情并劝其中断妊娠，这是最好的办法。

如果个别阳性孕妇已经到了妊娠晚期，无法中断妊娠的时候，可以吃药，通过药物来进行阻断，降低孕妇传给下一代的几率。一般情况下，如果是在妊娠期开始吃药，生产时采取剖腹产，以后再进行人工喂养不要母乳喂养，这样三管齐下，可以将传播给婴儿的几率降到2-5％。

HIV抗体检测多少钱

HIV抗体检测价格是与HIV检查方法相对应，根据检查方法不同，价格在100-180元之间。HIV感染可以通过检测病毒的抗体，抗原，核酸或病毒培养来确定。目前，标准的检测方法是血清学HIV抗体检测，这种HIV检查费用不是很高。对高度怀疑感染了HIV的孕妇，临床又急于尽快得到结果，可进行病毒载量测定。HIV病毒载量测定是对HIV核酸的定量测定，可测出每毫升血样中HIV核酸的拷贝数（一个HIV病毒颗粒含两拷贝）。检测方法可作为感染早期，抗体检测结果为不确定或抗体阴性者的辅助诊断，这种艾滋病检查费用较高。

❷ 如何检测体内是否存在抗体拜托了各位 谢谢

1. HBsAg (乙肝表面抗原) 原理：采用ELISA 双抗体夹心法。双抗体夹心法用于检测相对分子质量较大的蛋白质抗原。先将已知特异性抗体包被于固相载体上，加待测样本，若 其中有相应的抗原，则抗原和抗体特异性结合洗板后加入酶标记特异性抗体，使在固相上形成包被抗原抗体复合物洗板:加酶底物及色原呈色。双抗原夹心法则是利用包被抗原和标记抗原检测样本中的特异性抗体。抗原或抗 体水平与所测吸光度(A) 值呈正相关。 将纯化的抗HBs包被固相载体，加入待测样品，括其中含有HBsAg ，则与载体上的抗HBs 结合，再加入辣根过氧化物酶( HRP) 标记的抗HBs 抗体，加酶底物/色原显色。显色程度与 HBsAg 含量成正比。 2.HBsAb （乙肝表面抗体） 原理：采用ELISA 双抗原夹心法。反应板上包被纯化HBsAg ，待测样品中抗HBs与之反应，再加HRP-HBsAg 形成夹心，加酶底物/色原悔液显色。 3.HBeAg 和HbeAb 原理：检测HBeAg 和抗HBe 分别用ELISA 双抗体夹心法和Elisa竞争法。 4.HbcAb 原理：Elisa竞争法。用于检测待检样本中未知抗原或抗体。测抗原时用已知抗体包被固相载体，然后同步加入含有待测抗原的样本和酶标记抗原，使待测抗原与酶标记抗原竞争结合在固相载体上的抗体；洗板加酶底物及色原!让包。待iYlIJ 悔液抗原量越多，则被结合的酶标记抗原量越少，呈色越浅。呈色深浅与待测抗原的量成反比。测未知抗体时用已知抗原包被固相载体，同步加入含有待测抗体的标本和酶标记特异抗体，二者竞争结合固相载体t 的抗原.待测抗体量越多，酶标记抗体与固相抗原结合的最就越少，呈色就越浅。待测抗体的水平与呈色程度成反比。

❸ 口蹄疫病毒和抗体的实验室检测方法分别有哪些

病毒检测方法有：
（1）病毒（乳鼠、细胞）分离培养与鉴定，用途为直接分离病毒；
（2）免疫荧光法，用途为检测组织、细胞培养物中病毒抗原；
（3）反向间接血凝法，用已知阳性血清检测病毒及分型；
（4）中和试验，用已知阳性血清检测病毒，金标准方法
（5）双抗体夹心ELISA方法，用已知阳性血清检测病毒抗原
（6）胶体金试纸，用已知阳性血清检测病毒抗原
（7）RT-PCR（含荧光RT-PCR），用途为检测病毒核酸
（8）核酸序列测定，解析病毒核酸
抗体检测方法有：
（1）琼脂扩散试验，检测病毒VIA抗原抗体
（2）正向血凝抑制试验，检测病毒衣壳蛋白抗体，可用于免疫效果评估
（3）液相阻断ELISA试验，检测病毒衣壳蛋白抗体，可用于免疫效果评估
（4）VP1合成肽间接ELISA检测方法，检测病毒VP1蛋白抗体，可用于免疫肽苗的家畜的免疫效果评估
（5）3ABC非结构蛋白抗体ELISA检测方法，检测病毒非结构蛋白蛋白抗体，用于感染与免疫动物的区分
（6）中和试验，用已知病毒检测血清，金标准方法
（7）胶体金试纸，用已知病毒抗原检测特异抗体
（8）补体结合试验，用已知病毒抗原检测特异抗体

❹ 梅毒抗体的检测方法

--国产艾康
采用胶体金免疫检潮技术和层析原理定性检测血渍l浆)样本中的梅毒螺旋体抗体。检测时样本中梅毒抗体可与胶体金标记抗原结合形成抗原抗体复合物?由于层析作用复台物沿纸条向前移动经过检测线时与预包被的抗原结合形成“Au—TP Ag—TP Ab—TP Ag”夹心物而凝聚显色。游离的胶体金标记梅毒抗原则在对照线处与预包被的兔抗TP抗体结合而富集显色。阴性标本则仅在对照线处显色。 —进口爱卫
胶体金法（免疫层析法）人类免疫缺陷病毒（HⅣ 1/2）抗体检测试剂盒是应用胶体金免疫层析技术建立的灵敏、特异、操作简便的一步法HⅣ 1/2抗体定性检测试剂。用于定性检测人血清或血浆样本中的HⅣ 1型和HⅣ 2型的特异性抗体，以辅助诊断HⅣ感染，其阳性结果需用免疫印迹法确认。唾液检测试纸全球认可度比较高的是美国克利普特公司的aware爱卫品牌。

❺ 免疫检测方法

免疫检测方法大全2017

免疫学检测技术的用途非常广泛，它们可用于有关免疫疾病的诊断、疗效评价及发病机制的研究。如对传染病、免疫增殖性疾病、免疫缺损病、超敏反应、自身免疫病、移植排斥反应肿瘤的免疫学检测，对诊断、治疗均有很大帮助。此外在医学生物学研究中对抗原性物质或细胞的定性、定量检查不仅推动了对各种免疫学现象的研究，而且扩大免疫学与医学生物许多领域的联系。本章仅介绍常用免疫学检测方法的原理，简要过程和实用意义。下面是我为大家带来的关于免疫学检测法的知识，欢迎阅读。

第一节抗原或抗体的检测

一、检测的原理

借助抗原和抗体在体外特异结合后出现的各种现象，对样品中的抗原或抗体进行定性、定量、定位的检测。

1.抗原与抗体的亲和力(affinity)抗原抗体的结合就像酶与底物的结合，激素与其受体的结合一样不是化学的反应，而是非共价键的可逆的结合。抗原决定簇和抗体分子可变区互补构型，造成两分子间有较强的亲和力。空间构型互补程度不同，抗原和抗体分子之间结合力强弱也不同。互补程度高，则亲和力强。此外，反应温度、酸碱度和离子浓度对抗原和抗体分子上各基因的解离性和电荷特性也有重要的影响，抗体与抗原决定簇之间的结合力大小可用亲合力来表示。高亲合力的抗体与抗原的结合力强，即使抗原浓度很低时也有较多的抗体结合抗原形成免疫复合物。

2.抗原或抗体外检测原理根据抗原抗体结合形成免疫复合物的性状与活性特点，对标本中的抗原或抗体进行定性、定位或定量的检测。定性和定位检测比较简单，即用已知的抗体和待检样品混合，经过一段时间，若有免疫复合物形成的现象发生，就说明待检样品中有相应的抗原存在。若无预期的现象发生，则说明样品中无相应的抗原存在。同理也可用已知的抗原检测样品中是否有相应抗体。

对抗原或抗体进行定量检测时，以反应中加入抗原和抗体的浓度与形成免疫复物的浓度呈函数关系。

(1)根据免疫复合物产生的多少来推算样品中抗原(或抗体)的含量：在一定的反应条件下，加入的已知抗体(或抗原)的浓度一定，反应产生的免疫复合物多少与待检样品中含有相应抗原(或抗体)量成正比。也就是抗体浓度一定时，免疫复合物越多则样品中的抗原量也越多。可用实验性标准曲线推算出样品中抗原(或抗体)的含量。如免疫单向扩散试验、免疫比浊试验和酶联免疫检测等都属于这类方法。

(2)抗原或抗体效价滴定的原理：当抗原抗体复合物形成多少不能反应抗原抗体反应强弱时，就不能以检测反应强度来对抗原或抗体进行定量。在实际工作中，把浓度低的反应成分(抗原或抗体)的浓度固定，把浓度高的另一种反应成分作一系列稀释。例如用人血清作抗原免疫3只家兔，比较3只家兔产生抗体的多少，即滴定3只兔血清抗体效价，可用双向琼脂扩散法来滴定，例如将抗体浓度固定，将抗原作不同的稀释度，分别将抗原或抗体滴入琼脂的相应小孔中，观察免疫兔血清与不同稀释度的抗原出现明显沉淀浅的抗原稀释度(如甲兔的抗体效价为1/2000，而丙免的是1/8000则可比较出后者比前者产生抗体的效价要高)。也就是表示效价的稀释度越高，样品中所含待检成分越多。因人血清(抗原)和抗体(免疫兔血清)相比，浓度高，故应稀释抗原。

二、抗原或抗体检测的实用意义

1.抗体检测的意义检测抗体可用于评价人和动物免疫功能的指标。抗体用于临床治疗或实验研究时也需做纯度分析和定量测定。临床上检测病人的抗病原生物的抗体、抗过敏原的抗体、抗HLA抗原的抗体、血型抗体及各种自身抗体，对有关疾病的诊断有重要意义。

2.抗原检测的意义可做为抗原进行检测的物质可分为以下四类：

(1)各种微生物及其大分子产物：用于传染病诊断、微生物的分类及鉴定以及对菌苗、疫苗的研究。

(2)生物体内各种大分子物质：包括各种血清蛋白(如各类免疫球蛋白、补体的各种成分)、可溶性血型物质、多肽类激素、细胞因子及癌胚抗原等均可做为抗原进行检测。在对这些成分的生物学作用的研究以及各种疾病的诊断有重要意义。

(3)人和动物细胞的表面分子：包括细胞表面各种分化抗原(如CD抗原)、同种异型抗原(血型抗原或MHC抗原)、病毒相关抗原和肿瘤相关性情抗原等。检测这些抗原对各种细胞的分类、分化过程及功能研究、对各种与免疫有关的疾病的诊断及发病机制的研究，均有重要意义。

(4)各种半抗原物质：某些药物、激素和炎症介质等属于小分子的半抗原，可以分别将它们偶联到大分子的载体上，组成人工结合的完全抗原。用其免疫动物，制备出各种半抗原的抗体，应用于各种半抗原物质的检测，例如对某些病人在服用药物后进行血中药物浓度的监测。对运动员进行服用违禁药品的检测，都是应用半抗原检测的方法。

三、抗原或抗体检测的方法

由于各种检测方法中所用的抗原性状不同，出现结果的现象也不同。最广泛应用方法有下述几种：

(一)沉淀反应

可溶性抗原与抗体结合，在两者比例合适时，可形成较大的不溶性免疫复合物。在反应体系中出现不透明的沉淀物，这种抗原抗体反应称为沉淀反应(precipitation neaction)。

1.环状沉淀试验先将含抗体的未稀释的免疫血清加到直径小于0.5cm的小试管底部。将稀释的含有可溶性抗原的材料重叠于上，让抗原与抗体在两液体的界面相遇，形成白色免疫复合物沉淀环，故名为环状沉淀试验(ring precipitationtest),此法简便易行，需用材料较多是其缺点。

2.单向免疫扩散试验单向免疫扩散试验(single immunodiffusion)是在凝胶中进行的沉淀反应。将抗体混入加热溶解的琼脂中，倾注于玻片上，制成含有抗体的琼脂板，在适当位置打孔，将抗原材料加入琼脂板的小孔内，让抗原从小孔向四周的琼脂中扩散，与琼脂中的抗体相遇形成免疫复合物。当复合物体积增加到一定程度时停止扩散，出现以小孔为中心的圆形沉淀圈，沉淀圈的直径与加入的抗原浓度成正相关。本方法简便，易于观察结果，可测定抗原的灵敏度(最低浓度)约为10～20μg/ml，常用于定量测定人或动物血清IgG、IgM、IgA和C3等，其缺点是需1～2天才能看结果

3.免疫比浊法 当抗体浓度高，加入少量可溶性抗原，即可形成一些肉眼看不见的小免疫复合物，它可使通过液体的光束发生散射，随着加入抗原增多，形成的免疫复合物也增多，光散射现象也相应加强。免疫比浊法(immunonephelomytry)就是在一定的抗体浓度下，加入一定体积的样品，经过一段时间，用光散射浊度计(nephelometry)测量反应液体的浊度，来推算样品中的抗原含量。本法敏感、快速简便，可取代单向扩散法定量测定免疫球蛋白的浓度。

4，双向免疫扩散试验 双免疫扩散试验(double immunodiffusion)是在琼脂板上按一定距离打数个小孔，在相邻的两孔内分别放入抗原和抗体材料。当抗原和抗体向四周凝胶中扩散，在两孔间可出现2～3条沉淀线，本法常用于抗原或抗体的定性或定量检测，或用于两种抗原材料的抗原相关性分析。

5.对流免疫电泳对流电泳(counterimmunoelectrophoresis)是一敏感快速的检测方法，即在电场作用下的双向免疫扩散。将琼脂板放入电泳槽内，使琼脂板的两孔沿着电场的方向，于负极侧的孔内加入抗原，于正极侧的孔内加入抗体，通电后，抗原带负电荷向正极泳动，抗体分子虽也带负电荷，但因分子量大，向正极的位移小，而受琼脂中电渗作用向负极移动，抗原和抗体能较快地集中在两孔之间的琼脂中形成免疫复合物的沉淀线。只需1小时左右即可观察结果。

6.免疫电泳 免疫电泳(immunoelectrophoresis)的方法分成两个步骤，即先进行电泳，再进行琼脂扩散。先将样品加入琼脂中电泳，将抗原各成分依电泳速度不同而分散开。然后在适当的位置上沿电泳方向挖一直线形槽，于槽内加入含有针对各种抗原混合抗体液，让各抗原成分与相应抗体进行双向免疫扩散，可形成多答卷沉淀线。常用此法进行血清的蛋白种类分析。对于免疫球蛋白缺损或增多的疾病的诊断或鉴别诊断有重要意义

7.免疫印迹法免疫印迹法(immunoblotting)又称为Western印迹法，用于AIDS的血清抗体检测。第一步，为电泳分离HIV抗原，在电场中根据分子量大小不同病毒抗原各成分散开。第二步，将电泳分离的蛋白质转移到硝酸纤维膜上(电印迹)，然后将印迹有病毒抗原的硝酸纤维膜浸湿于病人血清中。如果病人血清中含有与一种或几种抗原相对应的抗体的话，则在该抗原印迹部位形成免疫复合物沉淀。在洗去未沉淀的抗原和抗体后，在膜上加标记的抗人免疫球蛋白的抗体，此抗体可以和病毒抗原与人抗体形成的免疫复合物发生反应，最后加入显色底物(如果抗人Ig是用酶标记的)或做放射自显影(抗人Ig用125Ⅰ标记)以显示结果

第一步：经电泳将HIV混合抗合抗原按分子量大小分离;

第二步：将已分离的抗原经电印迹转移到硝酸纤维膜上;

第三步：将待检病人血清加入覆盖于硝酸纤维膜上;

第四步：加入标记的第二抗体使之覆盖膜上;

第五步：加入显色底物(或放射自显影)显现第二抗体

(二)凝集反应

细菌、红细胞或表面带有抗原的乳胶颗粒等都是不溶性的颗粒抗原，当与相应抗体结合，抗原与抗体结合形成凝集团块，即称为凝集反应(agglutination)。

1.直接凝集 直接凝集(direct agglutination)是将细菌或红细胞与相应抗体结合产生的细菌凝集或红细胞凝集现象。可用于传染病诊断如肥达氏反应(Widal reaction)诊断伤寒病。或利用血细胞凝集现象检查血型。

2.间接凝集 间接凝集(indirect agglutination)是用可溶性抗原包被在乳胶颗粒或红细胞表面，与相应抗体混合出现的凝集现象。如用γ球蛋白包乳胶颗粒检测类风湿关节炎病人血清中的类风湿因子，用甲状腺球蛋白包被乳胶颗粒用于检测甲状腺球蛋的抗体。也可以将抗体吸附到乳胶颗粒上检查临床标本中的抗原，如细菌或真菌性脑膜炎抗体包被的乳颗粒，一旦与含有相应抗原的脑脊液混合，便可发生凝集，可进行快速诊断。故凝集反应即可测定抗原，也可测抗体，方法简便、敏感。

3.抗球蛋白试验 抗球蛋白试验(antiglobulin test,coombs test)的原理为间接凝集试验。例如应用于诊断自身免疫溶血性贫血症时，Rh+红细胞与抗Rh血清间的反应。因抗Rh抗体是IgG只有两个结合价，分子较小(不如IgM结合价多，分子大)很难直接引起Rh+红细胞凝集。如果加入抗IgG的抗体，就可帮助抗Rh的IgG的抗体凝集红细胞。也就是经抗Ig的作用提高凝集反应的'灵敏度。

(三)补体参与抗原抗体反应

这一类反应主要包括溶血反应(hemolytic assay)、补体介导的细胞毒试验(complement mediated cytotoxicuty test)及补体结合试验(complement fixation test)。

1.溶血反应 抗体与红细胞表面抗原相遇，形成红细胞-抗体复合物即可使加入反应中的补体活化，导致红细胞溶解，此方法可用于红细胞的各种抗原或相应抗体的检测，此法比凝集反应敏感。溶血反应也是用于抗体分泌细胞即空斑形成细胞(PFC)检测的原理。

2.补体介导的细胞毒试验各种有核细胞与针对其表面抗原的抗体相遇，所形成的免疫复合物能活化反应中的补体，引起细胞膜穿孔，在一定时间内，细胞仍能维持一定的形态不破碎，加入水溶性染如伊红Y(eosin Y)或台盼蓝(trypan blue)后，染料即可进入被活化补体穿孔的细胞，不带相应抗原细胞膜保持完整的活细胞不着色。此方法可用于带各种抗原的细胞的检测，如进行细胞MHC抗原的鉴定，和进行淋巴细胞中T细胞总数或其亚类的计数。在一些免疫学实验中也可用这种方法，根据需要特异地消除带某种抗原的细胞。

3.补体结合试验当抗原(可溶性或颗粒性)与相应抗体结合，由于浓度低不出现可见反应时，应用补体结合试验可检出此抗原抗体反应，它比凝集反应或沉淀反应灵敏度高。本法包括两个抗原抗体系统。一为检测系统由待检样品与已知抗原(或抗体)组成;另一为指示系统，由绵羊红细胞(SRBC)和抗SRBC组成。另加入作为补体的新鲜豚鼠血清。试验时试管中先加入检测系统和补体，混合经37℃30分钟使抗原、抗体、补体形成复合物，再加入指示系统，如出现溶血现象，说明检测系统中没有相对应的抗原抗体，补体是游离的指示系统的SRBC和抗体结合而出现溶血，即为反应阴性。如不出现溶血，表明检测系统中有抗原抗体复合物并结合补体，则指示系统无多余的补体作用而没有溶血现象，即为阳性。

在敏感的抗原、抗体检测方法(如酶标方法)出现之前补体结合试验曾广泛用于检测各种细菌、病毒或螺旋体(如梅毒)的抗原或抗体，由于本试验影响因素多，结果不稳定现已被新检测方法所代替。

四、用标记抗体或抗原进行的抗原、抗体反应

用荧光素、同位素或酶标记抗体或抗原，用于抗原或抗体检测是目前广泛应用的敏感、可靠的方法。上述三种常用的标记物与抗原或抗体化学连接之后不改变后者的免疫特性。本方法可用于定性、定量或定位检测。

1.免疫荧光技术免疫荧光技术(immunofluorescence techni)是用化学方法使荧光素标记的抗体(或抗原)与组织或细胞中的相应抗原(或抗体)结合，进行定性定位检查抗原或抗体的方法。

(1)直接荧光法：把荧光抗体加到待检的细胞悬液，细胞涂片或组织切片上进行染色，经抗原抗体反应后，洗去未结合的荧光抗体，将待检标本在荧光显微镜下观察，有荧光的部位即有相应抗原存在，此法可用于病毒感染细胞、带某种特异抗原的细胞(如T细胞和B细胞)或病原菌的检查，也可用于组织中沉着的免疫复合物的检查。本法的缺点是检查多种抗原，就需分别制备相应的多种标记抗体。

(2)间接荧光法：可克服直接法需制备多种荧光抗体的复杂操作。将组织或细胞上的抗原直接与相应抗体(不标记荧光)结合，此为第一抗体，再把能与第一抗体特异结合的荧光标记的抗免疫球蛋白抗体加入，此为荧光标记的第二抗体，观察结果与直接法相同。间接法比直接法敏感性高，如果用于检查抗原的第一抗体是人或动物的只需制备一种抗人或动物的免疫球蛋白荧光抗体

免疫荧光技术在传染病诊断上有广泛的用途，如在细菌、病毒、螺旋体感染的疾病，检查抗原或抗体，如查出IgM抗体，可做为近期接触抗原的标志，所以使用荧光标记抗IgM可诊断近期感染。除微生物学方面的应用外，还可利用单克隆抗体鉴定淋巴细胞的亚类。使用流式细胞仪(fluorescene-activated cell sorting,FACS)，能自动检测细胞的大小、荧光强度。针对细胞表面不同抗原，可以使用两种不同的荧光染料，如用异硫氰荧光素(FITC)发黄绿荧光，用罗丹明(TMRITC)发红色荧光。由于荧光颜色不同标记两种不同的抗体，对同一细胞进行双标记染色。对淋巴细胞亚类鉴定起着巨大推动作用。应用间接荧光法也用于自身免疫病的抗核抗体检查。

2.放射免疫分析法 放射免疫分析法(radioimmunoassay RIA)应用竞争性结合的原理，应作放射性同素标记抗原(或抗体)与相应抗体(或抗原)结合，通过测定抗原抗体结合物的放射活性判断结果，本方法可进行超微量分析，敏感性高，可用于测定抗原、抗体、抗原抗体复合物。本法常用的同位素有125Ⅰ和131Ⅰ。

放射免疫分析常用的有液相法和固相法两种：

(1)液相法：将待检标本(例如含胰岛素抗原)与定时的同位素标记的胰岛素(抗原)和定时的抗胰岛素抗体混合，经一定作用时间后，分离收集抗原抗体复合物及游离的抗原，测定这两部分的放射活性，计算结合率。在反应系统中，待检标本的胰岛素抗原与同位素标记的胰岛素竞争夺战性与胰岛素抗体结合。非标记的抗原越多，标记抗原与抗体形成的复合物越少。非标记抗原含量与标记抗原抗体复合物的量呈一定的函数关系。预先用标准的非标记抗原作成标准曲线后，即可查出待检标本中胰岛素的含量

(2)固相法：将抗原或抗体吸附到固相载体表面，然后加待检标本，最后加标记抗体。测定固相载体的放射活性，常用的固相载体有溴化氰(CNBr)海豹化的纸片或聚苯乙烯小管

放射免疫分析法应用范围广泛，包括多种激素(胰岛素、生长激素、甲状腺素等)维生素、药物、IgE等。

3.酶联免疫分析法 酶联免疫分析法(enzyme immunoassay,EIA)是当前应用最广泛的免疫检测方法。本法将抗原抗体反应的特异性与酶对底物高效催化作用结合起来，根据酶作用底物后显色，以颜色变化判断试验结果，可经酶标测定仪作定量分析，敏感度可达ng水平。常用于标记的酶有辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase)、碱性磷酶(alkaline phosphatase)等。它们与抗体结合不影响抗体活性。这些酶具有一定的稳定性，制成酶标抗体可保存较长时间。目前常用的方法有酶标免疫组化法和酶联免疫吸附法。前者测定细胞表面抗原或组织内的抗原;后者主要测定可溶性抗原或抗体。本法既没有放射性污染又不需昂贵的测试仪器，所以较放射免疫分析法更易推广。

(1)酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA):是与上述固相RIA相似的原理，将抗原或抗体吸附在固相载体表面。使抗原抗体反应在固相载体表面进行政区。可用间接法、双抗体夹心法或竞争法测定抗原或抗体。

(2)夹心法(sandwich assay):将已知的特异抗体包装在固相载体(塑料板凹孔或纸片上)，加入待检标本，标本中的抗原即可与载体上的抗原结合，洗去未结合的材料后加入该抗原的酶标记抗体，洗去未结合的酶标抗体，加底物显色，用酶免疫检测仪测量颜色的光密度，可定量测定抗原。

间接法(indirecr ELISA)常用于检查特异抗体。先将已知特异抗原包被固相载体，加入待检标本(可能含有相应抗体)，再加入酶标抗Ig的抗全(即第二抗体)，经加底物显色后，根据颜色的光密度计算出标本中抗体的含量。

(3)BAS-ELISA：近年来对酶免设分析法的改进是使用生物素-亲合素-过氧化物酶复合物作为指示剂，组成一新的生物放大系统进一步提高检测的敏感度。可用来检测多种抗原抗体系统如细菌、病毒、肿瘤细胞表面抗原等。一个亲合素(avidin)分子可以结合4个生物素分子(biotin)。结合非常稳定。亲合素和生物素都可与抗全、酶、荧光素等分子结合，而不影响后者的生物活性。一个抗体分子可偶联90个生物素分子，通过生物素又可连接多个亲合素。因此大提高检测的敏感度。目前应用生物-酶标亲合素系统(biotinavidin system- ELISA,BAS-ELISA)，它是通过生物素标记抗体连接免疫反应系统，同时借助生物素化酶或酶标亲合素引入酶与底物反应系统。

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❻ 艾滋病抗体的检查方法

艾滋病病毒抗体检测
艾滋病病毒抗体检测：检测血液中的艾滋病病毒抗体是目前最常用的检测艾滋病病毒感染的实验室方法，一般要经过两个步骤：首先做初筛试验，如果为阳性，再做确认试验，确认试验阳性才可诊断为艾滋病病毒感染。
常用的方法有：
1病原检测病原检测主要指用病毒分离培养、电镜形态观察、病毒抗原检测和基因测定等方法从宿主标本中直接检测病毒或病毒基因。由于前两种方法难度大，且需要特殊设备和专业技术人员。因此仅抗原检测和RT-PCR(反转录－PCR)可用于临床诊断。
2 抗体检测血清中HIV抗体是判断HIV感染的间接指标。根据其主要的适用范围，可将现有HIV抗体检测方法分为筛检试验和确证试验。
3 确证试剂筛检实验阳性血清的确证最常用的是Western blot（WB），由于该法相对窗口期较长，灵敏度稍差，而且成本高昂，因此只适合作为确证实验。随着第三代和第四代HIV诊断试剂灵敏度的提高，WB已越来越满足不了对其作为确证实验的要求。FDA批准的另一类筛检确证试剂是-免疫荧光-试验（IFA）。IFA比WB的成本低，而且操作也相对简单，整个过程在1-1.5小时内即可结束。此法的主要缺点是需要昂贵的荧光检测仪和有经验的专业人员来观察评判结果，而且实验结果无法长期保存。现在FDA推荐在向WB不能确定的供血员发布最终结果时以IFA的阴性或阳性为准，但不作为血液合格的标准。
4筛检试验筛检试验主要用于对供血员进行筛查，因此要求操作简便，成本低廉，而且灵敏、特异。目前世界上主要的筛检方法仍然是ELISA，还有少数的颗粒凝集试剂和快速ELISA试剂。ELISA有很高的灵敏度和特异性，操作简单，仅需要实验室配备酶标仪和洗板机即可应用，特别适合于试验室大规模筛检使用。颗粒凝集实验是另一种操作简单方便，成本低廉的检测方法，该方法结果可通过肉眼判定，灵敏度很高，特别适合发展中国家或大量筛选供血员时使用，缺点是必须使用新鲜样品，特异性较差。80年代后期发展起来的斑点印迹检测（Dot-blot assay）是一种快速ELISA（Rapid ELISA）方法，这种方法操作极为简便，过程短暂，整个过程多数在5-10分钟内甚至3分钟内即可结束，但该法比ELISA和颗粒凝集试剂昂贵得多。金免疫测定是以胶体金为标记物，以硝酸纤维素膜为载体的固相免疫测定，分为渗滤和层析两种形式。用于HIV抗体检体金试纸条属于金免疫层析，且大多数为间接法及双抗原夹心法，两种方法各有优缺点，但都简单而快速，数分钟即可得出结论，不需仪器设备，操作人员不需特殊训练，试剂稳定，适用于单份测定等。