鉴别线虫死活的方法

1. 松材线虫病的检疫方法是什么

1、直观检验：此种方法主要在产地调查时使用。在调查时仔细观察树木发育是否正常，注意察看有无树脂分泌减少、停止，针叶变褐、萎蔫，枝干及整株枯死的现象，同时观察树干上有无天牛蛀食的痕迹、产卵孔、羽化孔等，如有再行解剖检查。

2、解剖检验：用工具将可疑感病的树木锯断劈开，看材质重量是否明显减轻；木质部有无蓝变现象；树干内有无松褐天牛栖居的痕迹。

3、漏斗分离检验：从罹病木发病部位或天牛栖居处钻取木材组织并粉碎，用双层纱布包好，置于下方带有胶管和截流夹的玻璃漏斗上，加水浸泡12小时，取下部浸泡液离心，取其沉淀液15ml，置于解剖镜下，对照松材线虫的形态特征进行检查鉴定。

4、接种试验：把分离到的松材线虫接种到健康的松树上，观察健康树是否发病。

2. 松材线虫病的鉴定方法

1、形态鉴定：通过显微镜观察线虫头部，尾部以及生殖器官等特征来鉴定其是否属于松材线虫。
2、分子鉴定：BX-48松材线虫自动化分子检测系统
BX-48松材线虫自动化分子检测系统利用分子生物学原理，采用荧光PCR技术，利用松材线虫特异性引物与探针，达到准确检测松材线虫的目的，准确率可达到100﹪；由于使用的是荧光PCR技术，整个检测过程由仪器自动化完成，故无需人工使用显微镜观察松材线虫来进行判读，从而解决了人工镜检因视觉疲劳降低工作效率的问题，亦不会出现误读误判，完全避免人为出现误判的可能性，同时鉴定结果简单易读，窗口直接显示样本内是否含有松材线虫；操作简单便捷，只需将试管放入检测位内，其余工作均在电脑上通过鼠标完成，大大减少了操作人员的劳动强度；该设备拥有48个检测位，可同时检测大批样本，进一步提高工作效率。

3. 在野外如何识别松材线虫病，该病害在普查和调运检疫中的取样和鉴定方法

野外识别是看是否出现松树枯死、针叶褪色、黄化、枯萎以及呈红褐色等松针变色症状等异常情况。取样鉴定是否发生松材线虫病。

取样方法和鉴定方法具体参照最新《松材线虫病防治技术方案》指导：

（三）取样。

1.取样对象。抽取尚未完全枯死或者刚枯死的松树，不应当抽取针叶已全部脱落、材质已腐朽的枯死树。可参照以下特征选择取样松树：

——针叶呈现红褐色、黄褐色的松树；

——整株萎蔫、枯死或者部分枝条萎蔫、枯死，但针叶下垂、不脱落的松树；

——树干部有松褐天牛等媒介昆虫的产卵刻槽、侵入孔的松树；

——树干部松脂渗出少或者无松脂渗出的松树。

2.取样部位。一般在树干下部（胸高处）、上部（主干与主侧枝交界处）、中部（上、下部之间）3个部位取样。其中，对于仅部分枝条表现症状的，在树干上部和死亡枝条上取样。对于树干内发现媒介昆虫虫蛹的，优先在蛹室周围取样。

3.取样方法。在取样部位剥净树皮，用砍刀或者斧头直接砍取100-200克木片；或者剥净树皮，从木质部表面至髓心钻取100-200克木屑；或者将枯死松树伐倒，在取样部位分别截取2厘米厚的圆盘。所取样品应当及时贴上标签，标明样品号、取样地点（需标明地理坐标）、树种、树龄、取样部位、取样时间和取样人等信息。

4.取样数量。对需调查疫情发生情况的小班进行取样时，总数10株以下的要全部取样；总数10株以上的先抽取10株进行取样检测，如没有检测到松材线虫，应当继续取样检测，直至全部取样检测为止。

5.样品的保存与处理。采集的样品应当及时分离鉴定，样品分离鉴定后须及时销毁。样品若需短期保存，可将样品装入塑料袋内，扎紧袋口，在袋上扎若干小孔（若为木段或者圆盘无需装入塑料袋），放入4℃冰箱。若需较长时间保存，要定期在样品上喷水保湿，保存时间不宜超过1个月。

（四）分离鉴定。

1.分离。采用贝尔曼漏斗法或者浅盘法分离松材线虫，分离时间一般需12小时以上。将分离液体收集到试管或者烧杯中，通过自然沉淀或者使用离心机处理后进行鉴定。

2.鉴定。

（1）常规显微镜形态鉴定。仅适用于雌雄成虫，以雌成虫为主。将制作好的玻片置于显微镜下观察其形态，判别是否为松材线虫。若分离的线虫为幼虫，需培养至成虫后进行鉴定。

（2）分子检测（适用于各虫态）。采用PCR检测技术判别是否为松材线虫。

松材线虫分离、培养、检测鉴定的具体方法可参照国家标准《松材线虫病检疫技术规程（GB/T 23476）》进行。

其中，PCR检测技术通常是通过松材线虫自动化分子检测系统来完成的，这是能准确无误测出松材线虫的一种方法。

4. 根结线虫病如何识别与防治

（1）为害症状寄生在植物的根上，形成许多根瘤状物，即根结。根结初为白色，后成淡褐色，可互相连接成节结状。被寄生的植株，严重时地上部分表现为营养不良，生长势弱，结瓜少而小，甚至不结瓜。瓜类整个生育期可多次重复被侵染，根结线虫还可传播病毒病。（2）防治方法①农业防治。与禾本科作物或葱、蒜等实行3年以上的轮作或水旱轮作；用鸡粪或棉籽饼作基肥，对线虫有一定的抑制作用；作物收获后可大水漫灌浸淹1个月，杀灭线虫；采瓜后，在炎热季节，翻耕浇灌并覆膜，晒5～7天，杀虫效果很好。②药剂防治。在播种和定植前，用杀线虫剂处理土壤。因杀线虫剂多为高毒农药，一定要注意用药安全。施药方法，可参看产品使用说明书。