毒力检测方法

‘壹’ 病菌毒性测定方法有哪些

Wolfe等提出了田间直接测定法和室内测定法，后者又可分菌落计数法和孢子计数法

(1)田间直接测定:在田间暴露一组单基因鉴别品种幼苗，经一定时间后取回，保湿，使降落在叶片上的孢子萌发和侵入，在发病后测定每一个品种产生的病斑数，据此计算毒性频率以标准感病品种上的病斑数为计算的基数

(2)室内间接测定:有两种方法，第一种为病斑计数法，将所采集的混合病叶样本用沉降塔接种一套鉴别品种叶段，离体培养，发病后以各品种叶段上的病斑数与感病品种叶段的病斑数比较，计算毒性频率第二种方法为孢子计数法，用沉降塔接种盆栽幼苗或离体叶片，接种叶发病产孢后，洗脱孢子，配制孢子悬液，用血细胞计数板镜检计数孢子数目，换算单位叶面积产孢数，据以计算毒性频率

用上述方法，都可得到单个毒性因子单独出现的频率(实测值)，根据这一频率，可计算2个或多个因子组合的频率(理论值)各个鉴别品种上所得孢子，可用来再接种整套鉴别品种，计算各毒性因子频率，用此第二次测得的基因频率，可计算具有2个毒性因子的表型频率(实测值)，若再将每个品种产生的孢子，第三次接种整套鉴别品种，用所得结果，就可进一步估计具有3个毒性因子的频率(观测值)

‘贰’ 杀线虫剂的毒力测定方法有哪些

植物线虫病害在世界范围内广为为害，并严重威胁农业生产。目前防治线虫病害的农药品种少、毒性高、用量大，且主要依赖进口，因此，测定创制化合物的杀线虫活性是发现优秀杀线虫剂的关键。现在的一般筛选方法是用活体筛选。一般步骤是：

（一）供试线虫的选择

供试植物线虫需满足易培养，繁殖量大，生活史短。其中，根结线虫属的线虫较为符合要求。

（二）线虫的纯培养

以根结线虫为例，首先须对线虫的寄主植物如番茄进行无菌土栽培，使用无土栽培或灭菌土浇灌无菌苗，然后在田间选取有根结的病株，轻轻洗根至无泥土，用线虫挑针挑取单卵块，置0.1%的琼蜡三甲溴化铵（cetavlon）溶液中，将卵消毒，用无菌水漂洗，再浸在0.5%的双对氯苯基双胍基己烷双醋酸盐（hibitanediacetate）溶液中消毒，再用蒸馏水漂洗干净。放在孵化器中进行培养，每24h用毛笔蘸取卵块，用贝曼漏斗法（baermannfunnel）或离心漂浮分离法（centrifugalfloatation）于25℃孵化，收集根结线虫的2龄幼虫。

（三）供试药剂活性测定

1．离体筛选

（1）触杀法：大致步骤如下：供试线虫放入已配制好的药液中，经24h或48h处理后，在显微镜下检查线虫死活和被击倒的情况，计算毒力。

线虫死活鉴别一般采用体态法及染色法。体态法的判断标准是死的虫体多呈僵直状态，而活的体态是几度弯曲，一般盘卷和蠕动。但这种方法对呈休眠态和体形膨大的雌虫以及卵不适用，且不能绝对肯定线虫的不动就等于死亡，而弯曲的线虫等于生存。染色法是用曙红等染料对供试药剂处理过的线虫进行染色，活线虫不会被染色，死线虫会被染料染上颜色，根据线虫是否被染色，很容易判断线虫的死亡与否。用此方法对水稻潜根线虫（Hirschmanniellaspp.）、松材线虫（Bursaphelenchusxylophilus）等线虫效果都比较好。

（2）熏蒸法：该方法是测定供试药剂是否具有熏蒸作用。其方法与杀虫剂药物筛选类似，即将供试化合物和线虫放入封口的容器内，处理24h或48h，观察线虫死活情况。

2．盆栽试验

（1）土壤淋浴法：这是一种兼触杀和内吸活性测定的方法。基本程序是受试植物种植在小钵内，待幼苗长至3～5cm高，用配制好的药液淋土，第2d接种2龄幼虫，每小钵约500头。待空白对照根部感病症状明显（约20d）后进行调查。目测感病程度或设计“病情指数”进行计算，确定药效。

（2）叶面喷雾法：此方法是一种测定药物是否具叶面内吸性及是否具有向下输导特性的方法。基本程序于土壤淋浴法相似，只是施药时控制范围只限制在叶面。

另外，由于许多杀线虫剂的作用机理与结构类似的杀虫剂相同，如有机磷类和氨基甲酸酯类杀线虫剂的作用机理是抑制线虫体内的乙酰胆碱酯酶（AChE），因而对供试化合物采用酶抑制法，测试杀线虫活性有一定的理论依据。

‘叁’ 简述室内杀菌剂抑制真菌和细菌毒力测定方法有哪些区别

都用抑菌圈实验测定的话
则培养方式不同
培养条件也不一样
细菌需要细菌培养基
在37°培养
一天
真菌
真菌培养基
28°培养两天

‘肆’ 杀虫剂触杀毒力测定方法有哪些，优点和局限性分别是什么

杀菌剂室内毒力测定各特点
般认杀菌剂本身具毒力作用杀菌剂毒力实际其化与病菌化靶标相互作用结属于种化合物某种病菌性固性质所杀菌剂毒力评价其性重要参数数情况杀菌剂结构必须同具毒力基团辅助基团或型基团毒力基团指杀菌剂结构与作用靶标发亲互作部毒力基团与精细结构靶标互作亲性杀菌剂毒力决定性素往往具质量性状物性质般情况具相同毒力基团杀菌剂具相同作用机理归属类菌灵、苯菌灵硫菌灵等含或经物转化形苯并咪唑基团杀菌剂都称苯并咪唑类杀菌剂；氯苯嘧啶醇、咪鲜胺、唑醇等含N杂环结构并作用于Cyt.P450加单氧酶（C14α-脱甲基酶）杀菌剂都称麦角甾醇物合抑制剂

‘伍’ 杀虫剂触杀毒力测定方法有哪些

①拟除虫菊酯类杀虫剂一般对水生生物毒性较高，使用时注意不要污染水源。②这除虫菊类药剂杀虫速度快，但是连续使用很容易产生抗药性。注意和其他类型杀虫剂，如有机磷、氨基甲酸酯等轮换使用或混合使用。③多数不含氟的菊酯类杀虫剂不具有杀螨活性，甲氰菊酯具有杀螨活性。④拟除虫菊酯类杀虫剂脂溶性强，多数以触杀作用为主，一般没有熏蒸和内吸作用，因此喷药时要均匀。⑤不能和碱性药剂混用。

‘陆’ 怎样测定药剂的毒力

一种有效的药剂作用于生物体后，生物体必然要产生相应的反应。在其他条件固定时，这种反应与该药剂的剂量相关。严格地讲，剂量应该是生物个体或生物单位体重所接受的有效成分的量。但由于种种原因，在一般毒力测定中不易得到准确的剂量，尤其是以生物群体为施药对象时，更是如此。所以，有时生物测定中所用药剂的浓度和处理时间可笼统称为剂量，当处理时间固定时，浓度即具有剂量的意义。在一定剂量下，病、虫、草所表现的中毒现象称为反应。在进行毒力测定时取样的供试生物种群中，各个体由于种种原因对药剂的反应是有差别的。实验证明，有少数个体忍受力较强或很强，也有少数个体比较敏感或高度敏感。因此，用逐渐增加的系列剂量测定时，所得供试生物反应（例如死亡）的百分比应增加。如果以剂量数值为横轴，死亡百分率为纵轴，做成的曲线为非对称的S形曲线。如果将剂量数值换算成对数值，曲线则变成对称的S形曲线。如果再将死亡百分率换算成几率值，则剂量反应曲线变成为直线，称为剂量对数－几率值直线。

所谓几率值就是几率的单位，总共分为10个单位（1～10），其实质就是常态分布的平均值加减标准误差所得的数值范围。剂量反应曲线绘成直线，是为了更准确地求出代表大多数生物个体对药剂反应的平均值，即致死中量（LD50）。在比较药剂的毒力、毒性时，经常要采用致死中量，否则不能代表大多数生物个体的反应情况。另外，毒力还可用LC50、EC50或ED50等来表示。

单独只用LD50或EC50来比较各药剂的毒力有时还是不够的，常还要对直线的坡度角进行观察。坡度角的大小反映供试生物群体对某些药剂敏感性的集中性和分散性。坡度角大则集中程度高，坡度角小则分散程度高。所以，有时除比较LD50值外，还要比较LD95值。

由于供试生物个体的内在因素以及毒力测定时条件控制上的变化，有时会影响以致死中量来进行比较的准确性，因此，可用相对毒力指数来比较。即每次试验均设标准药剂处理，求出各次试验中各种药剂与标准药剂的比值，然后进行比较。计算公式如下：

‘柒’ 室内毒力测定的试验方法

试验方法采用点滴法，根据上步预备试验结果，每种药剂分别设定五个浓度。每个浓度设置3个重复，用丙酮作为对照处理。用微量点滴器盛装药液，从低浓度到高浓度点滴，每虫点滴1ul于幼虫胸部背板处，待药液挥发后，添加适量食物于皿中。

‘捌’ 如何检测病毒的效价或毒力

确定病毒的毒力最常用经典方法：TCID50，半数细胞培养物感染量；EID50，半数鸡胚感染量，还有就是用动物测定LD50。
一般如果做毒力检测，最常用，也是最直接的就是做生物测定。
间接测定的话，可以用ELISA、电泳、HPLC等各种方法进行毒素的测定，当然如果你确定病毒的毒力因子的话，也可以用PCR、Western进行检测。

‘玖’ 做农药毒力测定时，农药浓度梯度设置的依据什么

做农药毒力测定时，农药浓度梯度设置的依据：
结合《中华人民共和国农业部第946号公告》，以大多数企业已有的含量为依据。
知识点延伸：
农药毒力测定是指在室内进行的对农药测定。这种测定实验的优点是，可以通过大量培养与饲育而获得较为均匀一致的供试生物，便于同时进行大量实验，在较短时间内可以的出结果。但由于室内外环境条件差异较大，所以其结果仅能为田间药效试验提供依据。

‘拾’ 杀虫剂的毒力测定

1.喷雾法：模拟林间实际防治情况下而设计的喷雾方法，为了减少试验误差，使每一个供试昆虫尽量接受到相同的药量，要求喷雾器有一定的压力，使雾点大小一致，喷雾均匀。
2.液浸法：将供试昆虫分别放入不同浓度的稀释药液中浸渍一下，立即取出，放在吸水纸上吸去过多的药液，移入每一组的盛器中，给以新鲜叶片作饲料，盛器上加盖纱布或纱网，饲养于室内，记录室温，观察不同时间下中毒死亡情况。
3.药膜法：将药剂喷撒在一定面积的表面上，形成一层均匀的药膜（常用垫有滤纸的培养皿，或将针叶在药液中浸渍一下后取出），然后让供试的害虫在上面，任其与药膜接触一定时间后，再移回正常的容器中饲养，或就在接触药膜过程中，观察中毒死亡情况。
4.点滴法：用定量的药液微滴，滴加在供试昆虫的胸部背面，然后定时观察中毒死亡情况。此法优点是：剂量可用每克虫体接受的药量（常用微克）表示，药量容易控制，试验误差较小；缺点是费时，处理所用的溶剂、点滴的部位和液滴的大小等都可影响毒力。在采用本法时，应当考虑这些因素，尽量取得一致，才能得到准确的结果。