均苯四甲酸酐纯度液相检测方法

A. 体内药物分析的样品处理

体内样品的预处理方法的选择需要综合考虑多种因素，包括体内样品的种类、被测药物的性质和浓度、以及所采用的测定方法等三方面。
如血浆或血清需除蛋白，使药物从蛋白结合物中释出；尿液样品则常采用酸或酶水解使药物从缀合物中释出；唾液样品主要采用离心去除黏蛋白沉淀。
被测定药物的结构、性质、存在形式与浓度范围等，均直接影响到样品前处理方法的选择与应用。例如，药物的酸碱性（pKa）与溶解性影响到药物的萃取分离条件的选择，药物的极性、稳定性、官能团性质和光谱特性影响到其色谱测定条件的优化选择。不同药物在样品中的浓度相差悬殊，浓度大的样品对前处理要求稍低，浓度越低则样品前处理要求越高。
体内样品前处理的方法以及分离纯化的程度，均取决于测定要求和所采用的测定方法。测定方法的耐受污染程度和抗干扰能力越强、专属性越好、灵敏度越高，则对前处理的要求越低。通常，免疫测定法由于具有较高的灵敏度和抗干扰能力，体内样品只需经离心分离即可直接用于测定。而高效液相色谱和色谱-质谱联用等方法，为防止蛋白质等在色谱柱上沉积、内源性干扰、或基质效应影响，色谱分析前均需对体内样品进行去除蛋白、溶剂萃取、甚至制备衍生物等前处理。
1.去除蛋白质法
在测定血样及组织匀浆等样品中的药物时，首先应去除蛋白质。去除蛋白质既可使蛋白结合型的药物释放出来以便测定药物的总浓度，又可避免进一步的溶剂萃取过程中乳化的形成，并可消除内源性干扰，同时保护仪器性能（如保护HPLC柱不被蛋白污染），延长使用寿命。去除蛋白质常用的方法包括蛋白沉淀法和蛋白分解法。
2.缀合物水解法
药物在体内经二相代谢可以形成葡糖醛酸苷或硫酸酯缀合物，并经尿液或胆汁排泄。为了准确测定体内样品中药物的含量，首先需将缀合物水解释放出缀合的药物或其代谢物后，再进行进一步的处理测定。常用的缀合物水解方法包括酸水解和酶水解。
酸水解通常使用无机酸，如盐酸或磷酸溶液等。酸的浓度、水解时间和温度等条件，应根据具体药物进行优化确定。酸水解的优点是简便、快速，但是专属性较差，并需注意避免药物的进-步降解。对于遇酸及受热不稳定的药物，可采用酶水解法。
酶水解法常用葡糖醛酸苷酶或硫酸酯酶，或二者的混合物。酶解时应当注意控制反应的pH、酶试剂用量、孵育温度、酶解时间，并在厌氧条件下进行。尿液样本进行酶解时，需要首先隐蔽会抑制酶活力的阳离子。
虽然酶水解法存在水解时间长、酶试剂带人的黏液蛋白可能导致乳化及色谱柱污染等缺点，但酶水解法具有较高的选择性，很少使被测药物或共存物发生降解，所以常被优先选用。
3.分离纯化与浓集法
对于浓度较高的样品，或检测方法具有足够灵敏度时，体内样品在经去除蛋白质或缀合物水解等前处理步骤后即可直接用于测定。但当药物浓度较低或分析方法的特异性或灵敏度不够高时，体内样品需进行分离、纯化与浓集处理，或在去除蛋白质或缀合物水解的基础上进一步进行处理。
萃取法是应用最多的分离、纯化方法。萃取的目的是为了从大量共存的内源性物质中分离出所需要的微量组分一药物及其代谢物，并通过溶剂的蒸发使样品得到浓集，残留物采用适宜的溶剂复溶后再进行分析测定。萃取法包括液-液萃取法和液-固萃取法。
4.化学衍生化法
治疗药物监测的体内样品色谱分析时，可根据待测物的化学结构和检测方法的要求，通过化学衍生化方法，特异性地引入功能基团后再进行分析。通常对药物分子中含有活泼H的极性基团，如含-COOH、-0H、-NH2、-NH-和-SH等，进行化学衍生化。化学衍生化的目的包括：改变待测药物的色谱行为；增强药物的稳定性；改善（手性拆分）分离能力；提高检测灵敏度等。
GC分析中常对待测物进行硅烷化（silylation）、酰化（acylation）、烷基化（alkylation）或酯化（esterification）等。硅烷化应用最广泛。硅烷化试剂有：三甲基氯硅烷（TMCS）、双-三甲基硅烷乙酰胺（BSA）、双-三甲基硅烷三氟乙酰胺（BSTFA）、三甲基硅烷咪唑（TMTS）等。酰化试剂有：乙酸酐、丙酸酐、五氟苯甲酸酐等。烷基化及酯化试剂有：五氟碘乙烷、重氮甲烷、对溴苄基溴、三氟化硼-甲醇等。
化学衍生化HPLC分析包括柱前和柱后衍生化两种方法。柱前衍生化分析中，衍生化胺、氨基酸和氨基醇类化合物的试剂有：丹酰氯、荧光胺、9-芴甲氧羰酰氯、邻苯二醛等；衍生化羰基化合物的试剂有：2，4-二硝基苯肼、丹酰肼等；衍生化羧酸常用的试剂为2，4'-二溴苯乙酮；衍生化醇类化合物常用的试剂为3，5-二硝基苯甲酰氯、五氟苯甲酰氯等。
由于柱前衍生化法是在分离前使药物与衍生化试剂反应。故与药物具有相同官能团的干扰物质也同样会生成衍生物，并有可能妨碍药物的检测。如果干扰物质含量高时，甚至会影响待测成分的衍生化效率。因此，应尽可能将样品进行分离纯化后再衍生化。
柱后衍生化是药物经色谱分离后在流出液中进行衍生化，以形成对检测器具有高灵敏度响应的衍生物，从而提高检测灵敏度。如氨基酸分析仪中的柱后茚三酮衍生化。
具有光学异构体的药物，由于R（-）与S（+）构型的不同，使之具有不同的药效和药动学特性。因此，异构体的分离检测十分重要。光学异构体的分离可采用不对称试剂衍生化，使其生成非对映异构体衍生物，再进行色谱分离测定。常用的不对称衍生化试剂有：（-）-1-（9-芴基）乙基氧甲酰氯、（+）-樟脑磺酰氯、2，3，4，6-四-O-苯甲酰-β-D-葡萄吡喃糖基异硫氰酸酯、（R）-（+）-1-（1-萘基）乙胺等。