猪源链球菌通用荧光pcr检测方法

Ⅰ 常见动物源性检测试剂盒都有哪些

常见的检测动物源性成分的试剂盒有两大类，一类是分子生物学方法，一类是免疫学方法。免疫学方法，主要是通过针对动物特定蛋白的抗体，进行识别并显色，最终达到鉴别物种的目的。但是这种方法，对熟化或卤汁的处理后，蛋白结构易发生变化，进而抗体不能很好识别，最终导致不能鉴别。分子生物学方法主要是通过对动物特定的保守基因片段，设计引物，通过体外扩增技术，来实现对物种的鉴别。
分子生物学鉴别，目前常见有两种方法，一种是常规PCR方法，一种是实时荧光定量PCR方法。常规PCR方法，主要通过PCR体外扩增，然后将扩增产物进行电泳，以是否有预期大小的扩增产物产生，进而对产物进行序列测定比对后，达到最终确定。实时荧光PCR方法，则是通过PCR体外扩增，在扩增过程中，掺入会发光的荧光基团，发光多少与掺入的荧光基团多少正相关，掺入荧光基团的多少与扩增的多少正相关，最终能随着扩增过程，实时得到一条扩增曲线，进而判断是否扩增了？扩增的量有多少？优点是，避免制胶电泳，节约电泳时间，可初步实现对扩增模板量多少的判断。
目前看，北京宝科维食安生物能提供的常规PCR方法试剂盒品种很齐全，基本涵盖了常见的动物种，有：猪源性成分检测试剂盒，牛源性成分检测试剂盒，羊源性成分检测试剂盒，马源性成分检测试剂盒，驴源性成分检测试剂盒，鸡源性成分检测试剂盒，鸭源性成分检测试剂盒，鹅源性成分检测试剂盒，兔源性成分检测试剂盒，海狸鼠源性成分检测试剂盒，狐狸源性成分检测试剂盒，牦牛源性成分检测试剂盒，鼠源性成分检测试剂盒。
北京宝科维食安生物能提供的实时荧光PCR方法试剂盒品种很齐全，基本涵盖了常见的动物种，有：猪源性成分检测试剂盒，牛源性成分检测试剂盒，羊源性成分检测试剂盒，马源性成分检测试剂盒，驴源性成分检测试剂盒，鸡源性成分检测试剂盒，鸭源性成分检测试剂盒，鹅源性成分检测试剂盒，兔源性成分检测试剂盒，狐狸源性成分检测试剂盒，水貂源性成分检测试剂盒。

Ⅱ 荧光定量PCR技术的荧光定量PCR的方法

接下来我们就来了解一下荧光定量的主要方法，我们如何选择合适的方法？荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种：荧光探针和荧光染料。而荧光定量 PCR 的方法相应的可分为特异类和非特异类两类，特异性检测方法是在PCR反应中利用标记荧光染料的基因特异寡核苷酸探针来检测产物；而非特异性检测方法是在在PCR反应体系中，加入过量荧光染料，荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射出荧光信号。前者由于增加了探针的识别步骤，特异性更高，但后者则简便易行。

非特异性SYBR Green I染料法
SYBR Green I是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料（结合示意图），在游离状态下，SYBR Green I发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA结合后，荧光大大增强（作用机理图）。因此，SYBR Green I的荧光信号强度与双链DNA的数量相关，可以根据荧光信号检测出PCR体系存在的双链DNA数量。
特异性Taqman水解探针法
Taqman荧光定量技术是以Taqman荧光探针为基础，Taqman荧光探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个荧光发射基团和一个荧光淬灭基团。探针完整时，发射基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；
PCR扩增时，Taq酶的5’－3’外切酶活性将探针酶切降解，使荧光发射基团和荧光淬灭基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。从而实现定量（如下图）。常用的荧光基团是FAM, TET, VIC, HEX。

Ⅲ 食品中链球菌检测方法

MM_FS_CNJ_0352出口食品 B群链球菌 CAMP试验法

MM_FS_CNJ_0352

出口食品中B群链球菌检验方法

1.适用范围

本方法适用于出口肉类、奶和奶制口中B群链球菌的检验。其他食品可参照使用。

2.主要试剂和仪器

2.1.主要试剂(包括培养基)

Todd,Hewitt肉汤〔参见附录A(补充件)A1〕;

牛心汤培养基〔参见附录A(补充件)A2〕;

牛心汤增菌培养基〔参见附录A(补充件)A3〕;选择性

牛心汤琼脂〔参见附录A(补充件)A4〕;

绵羊血琼脂平板〔参见附录A(补充件)A5〕;

β-溶血素带〔参见附录A(补充件)A6〕;

溶血素带〔参见附录A(补充件)A7〕; β-

绵羊血球〔参见附录A(补充件)A8〕;

生理盐水:灭菌的0.85,NaCl;

(补充件)A9〕; 革兰氏染色液〔参见附录A

接触酶(过氧化氢酶)试验〔参见附录B(补充件)〕。

2.2.仪器

离心机5000r,min，离心管50mL，10mL;

蔡氏滤器;

微孔滤膜，孔径0.45μm;

玻璃抽滤瓶;

玻璃水循环真空泵;

电热恒温箱;温度20,60?;

显微镜;

定性滤纸;

不锈钢厌氧菌培养罐;

电冰箱;

乳钵、研棒或均质器;

L形玻璃棒;

金黄色葡萄球菌菌体ATCC,25923。

3.样品的制备

3.1.肉类

3.1.1.冷冻产品应在2,5?过夜解冻，或在45?及以下经15min解冻，立即检验。若不能及时检验，应置于,15?左右暂存。其他非冷冻易腐的食品，亦应置于4?冰箱保存。

3.1.2.以无菌操作称取剪碎的肉类样品25g，置于灭菌之乳钵内或均质杯内，加入25mL灭菌生理盐水进行研磨或均质(8000,10000r,min，均质1min)，移

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入盛200mL生理盐水的5000mL广口瓶内，混合均匀，制成1?10稀释液。

3.2.奶和奶制品类

3.2.1.鲜奶、酸奶:以无菌手续去掉瓶罩纸盖，瓶口经火焰灭菌后，用无菌操作吸取25mL检样，放入装有225mL灭菌生理盐水的三角烧瓶内，振摇均匀。

3.2.2.奶粉:以无菌手续开封取样，称取25g放入盛有225mL温热的灭菌生理盐水且装有适量玻璃珠的灭菌广口瓶内，振摇使其充分溶解混匀。

3.2.3.奶酪:先用灭菌刀削去部分表面封蜡，然后用点燃的酒精棉球灭菌表面后，用灭菌刀切开奶酪，再用无菌操作切取表层和深层检样25g，置于灭菌乳钵内切碎，加入25mL生理盐水研成糊状，移入盛有200mL灭菌生理盐

水的广口瓶内，混合均匀。制成1?10的稀释液。

3.3.其他食品

样品的制备取决于食品的种类和状态。固体或半固体食品按3.1.2或3.2.3进行。液体食品按4.2.1进行。

4.过程简述

.1.增菌培养 4

将上述制备的检样各取10mL分别接种于100mL牛心汤培养基内，如检样污染较严重，可同时按上述量接种于选择性牛心汤增菌液内，经35?1?培养15h，

-带或CAMP-点试验。 再进行CAMP

4.2.CAMP试验的条件

?1?培将CAMP试验的绵羊血琼脂平板置于不锈钢厌氧菌培养罐内，在35养。

4.3.CAMP-带试验

取β-溶血素带1,2条平行轻贴于绵羊血琼脂平板上，间距20mm，将样品或经过增菌的培养物直接在β-溶血素带两侧(相距3,5mm)处垂直划线3,4条或涂布接种，经14,18h培养后观察结果。如在接种线与β-溶血素带周围朦胧溶血区重叠处能见到协同产生清晰的“箭头”状的增强溶血区为阳性反应，可鉴定为B群链球菌。不见增强溶血为阴性反应，判为B群链球菌阴性。

4.4.CAMP-点试验

将样品或经过增菌的培养物直接划线或用L形玻璃棒涂布接种于绵羊血琼脂平板上，经14,18h培养后，用接种环取β-溶血素滴加在圆形突起，细小的可疑为链球菌的单个菌落边缘，再将平板进行孵育，分别在30，45，60min检查溶血变化情况。在滴加β-溶血素的菌落边缘有协同产生“扇形”增强溶血区的为阳性反应，可鉴定为B群链球菌。不出现增强溶血现象的为阴性反应，判为非B群链球菌。

每次检验时都要用已知阳性菌株作为对照试验。 4.5.CAMP-带或CAMP-点试验阳性反应，再进行革兰氏染色，镜检和接触酶试验，以此来与其他溶血性细菌如李斯特氏菌，肉毒梭状芽胞杆菌和葡萄球菌等区别开。

Ⅳ 荧光检测方法

荧光检测是一种自然发光反应，通过荧光素酶与 ATP进行反应，可检测人体细胞、细菌、霉菌、食物残渣，在15秒钟内得到反应结果。光照度通过专用设备进行测量，并以数字形式予以表示，在1975年首先被应用到食品工业中，在1985年在化妆品制造业中得到应用。
荧光定量：采用国际主流的荧光定量PCR技术，迅速提升技术水平。
结果稳定：检测结果CV值与进口全自动PCR仪接近，具有自检功能，避免错误数据的输出。
封闭操作：全部检测过程均为闭管操作，于反应管处检测荧光，有效防止污染，解决PCR技术中最棘手之难题。
准确定量：满足临床对量化的需求，定量荡围宽，可涵盖大部分病原微生物，自动曲线拟合。
灵敏度高：利用光谱信号灵敏性的优势，有效提高检测灵敏度。
安全：全程无毒检测。
操作简便：省去后处理的烦琐过程。
直接打印：直接打印结果，无须记录大量数据。
升级版：FS1000有与电脑连接的数传输口，可以连接电脑，根据用户需要提供先进分析软件，全面分析实验数据。（电脑和打印机选配件）
故障率低：维护非常简单。
节约资源：可利用现用PCR扩增仪，最大限度节约资源。

Ⅳ PCR产物的检测方法有哪些都有什么原理

1.琼脂糖凝胶电泳 同时点分子量marker，根据marker条带判断产物分子量大小，从而大致判断是不是你要的
2.酶切 已知你产物的序列，看上面有什么酶切位点，用一个酶或者两个酶切断，看与理论预测的条带数目和大小是否一致。一般检测有以上两步就行了，如果需要知道确切的需要进行3
3.测序 连接到pMD-18t 载体上，转到大肠杆菌中。拿到公司去测序，测序结果通过gene bank比对看与哪个基因一致，这种方法最准确
4.表达 pcr产物连到真核或者原核表达载体上，适宜条件表达出来以后的蛋白做质谱分析，看与理论产物表达的蛋白是否有一致的片段

Ⅵ 非洲猪瘟的检测方法有哪些非洲猪瘟疫情防控方法是什么

荧光定量 PCR 方法，该方法是将光谱技术引入到PCR 反应中，通过荧光信号的强弱变化定量测定特异性扩增产物的量，解决了常规 PCR 方法敏感性低和电泳检测中溴化乙锭对环境的污染问题。

等温扩增法，该方法是一种新兴的分子生物学检测方法，等温扩增方法不需要 PCR 中的变性、退火步骤，即可完成对靶序列的循环扩增，大幅缩短了时间，整个扩增反应时间一般少于 60 min，而常规PCR 方法的反应时间一般需要 2 h 以上。等温扩增试剂盒适合现场检测，灵敏度高，能够大幅提高猪瘟防控的可行性。

要减少场外人员和车辆进入猪场，要对人员和车辆入场前彻底消毒，要对猪群实施全进全出饲养管理，要对新引进生猪实施隔离，要按规定申报检疫。

非洲猪瘟防控注意事项

养殖场应该坚持全进全出，自繁自育的养殖模式，构建完善的封锁隔离措施，避免猪和野猪直接接触。养殖场在生猪调运过程中，尽量不要跨省引进种猪，必须引种时，一定要进行严格的产地检疫、疫情检测，严格执行落地报告制度和隔离观察制度。

殖场内部如果发现非洲猪瘟可疑疫情，严格按照《非洲猪瘟疫情应急预案》进行处置，迅速采取应急措施，预防疫情传播和蔓延。