猪口蹄疫检测诊断的几种方法

1. 老母猪得口蹄疫，怎样救治

1．猪回蹄疫的诊断 猪口蹄疫主要症状表现在蹄冠、蹄踵、蹄叉、副蹄和吻突皮肤、口腔胯部、颊部以及舌面粘膜等部位出现大小不等的水泡和溃疡，水泡也会出现于母猪的乳头、乳房等部位。病猪还有精神不振、体温升高、厌食等症状，当病毒侵害蹄部时，蹄温增高，跛行明显，常导致蹄壳变形或脱落，病猪卧地不能站立。水泡充满清朗或微浊的浆液性液体，水泡很快破溃，露出边缘整齐的暗红色糜烂面，如无细菌继发感染，经1～2周病损部位结痂愈合。若蹄部严重病损则需3周以上才能痊愈。口蹄疫对成年猪的致死率一般不超过3％。妊娠母猪可发生流产。 剖检时，病猪咽喉、气管、支气管和胃粘膜有烂斑或溃疡，小肠、大肠粘膜可见出血性炎症。仔猪心包膜有弥散性出血点，心肌切面有灰白色或淡黄色斑点或条纹，心肌松软似煮熟状。猪口蹄疫的临床特征与猪水泡病、猪水泡性口炎、猪水泡疹极方相似，故应根据情况，及时送当地兽医院进行实验室诊断。 2．猪口蹄疫的防制（1）常规性防制措施 ①疫苗注射。母猪在怀孕初期和分娩前1个月各接种1次灭活苗（有单价灭活苗、口蹄疫灭活病毒与猪瘟弱毒的联苗等），仔猪在40日龄或80日龄注射1次，即可获得较强的免疫能力。 ②严格消毒。常用消毒药有1～2％氢氧化钠、30％热草木灰、1～2％甲醛溶液。正确的消毒程序是：喷洒周围环境，保持4小时以上→彻底清扫粪尿、垃圾、泥土、污物，堆积发酵或焚烧→第2次喷洒并维持4小时以上→有水泥地面的猪舍及运载工具用自来水冲洗干净，自然晾干后→第3次喷雾或喷洒，自然干燥后启用。（2）紧急预防措施 坚持“早发现，严封锁，小范围内及时扑灭”的原则。 ①用2～3％苛性钠或1：500浓度的灭毒净每天喷雾1～2次，进行全面消毒；限制猪群的移动。 ②对未发病的猪群紧急接种疫苗，常规苗每头5毫升，高效苗每头3毫升；或用口蹄疫高免血清或康复动物血清进行被动免疫，按每公斤0.5～1 毫升皮下注射。15天后加强免疫1 次。 ③患口蹄疫的病畜，症状轻微的一般经过10天左右多能自愈，但为了促进早日康复，缩短病程，防止继发感染，应在严格隔离、加强护理的条件下，进行对症治疗。对口腔病变用清水、食盐或0.1％高锰酸钾液洗涤溃疡面，徐以1～2％明矾溶液或碘甘油。对蹄部病变，用3％来苏儿洗净，然后涂擦龙胆紫溶液、碘甘油、青霉素软膏或木焦油凡士林（1:1）等，用绷带包扎。也可将煅石膏与锅底灰各半，研成粉未，加少量食盐粉撤在蹄的患部。对乳房病变，用肥皂水或2～3％硼酸水清洗，然后涂以青霉素软膏或其他刺激性较小的软膏。对恶性口蹄疫，除局部治疗外，可用强心剂和滋补剂，如安钠咖、葡萄糖盐水等。

2. 口蹄疫的检测

1.蹄疫反转录聚合酶链反应（RT-PCR），用于检测疑似感染动物水疱皮或水疱液中所有血清型口蹄疫病毒，适用于口蹄疫病毒的检测、诊断和流行病学调查。
原理：利用异硫氰酸胍方法提取RNA，在反转录酶的作用下，以RNA为模板，以引物为起点合成与RNA模板互补的cDNA链。利用西安天隆科技有限公司生产的DTC型基因扩增仪，在TaqDNA聚合酶的作用下，经高温变性、低温退火、中温延伸的循环，使特异性DNA片段的基因拷贝数放大一倍。经过35个循环，最终使基因放大数百万倍。将扩增产物进行电泳，经溴化乙锭染色后，在紫外灯照射下，肉眼可见DNA片段的扩增带。该方法可以检测所有亚型的口蹄疫病毒，检测结果为阳性，需进一步采用分型诊断试剂盒进行进一步检测。
2.血清学试验 ，ELISA是目前检测FMDV感染较为常用的诊断方法，其与补结试验、中和试验及间接血凝抑制、免疫扩散沉淀试验相比较、具有灵敏、快速、价廉等优点。

3. 口蹄疫实验室检查方法有哪些

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口蹄疫病毒具有多型性，而其流行特点和临床症状一样，其病毒属于哪一型，需经实验室检查才能确定。另外，猪口蹄疫与猪水疱病的临床症状几乎无差别，也有赖于实验室检查予以鉴别。首先将病猪蹄部用清水洗净，用干净剪子剪取水疱皮，装人青霉素（或链霉素）空瓶，最好采取3-5头病猪的水疱皮，冷藏保管，一并迅速送到有关检验部门检查。

传统的方法是补体结合试验和乳鼠血清保护试验。以后又采用反向间接血凝试验和琼脂扩散试验，近来常用酶联免疫吸附试验。据报道，酶联免疫吸附试验比反向间接血凝试验更灵敏可靠，阻断夹心酶联免疫吸附试验已用于进出口动物血清的检测。

4. 猪病常用的血清学诊断方法有哪些

抗原和相应的抗体在动物体内或体外都能发生特异性结合反应，这种反应称为抗原抗体反应，习惯上把体内的抗原抗体反应称为免疫反应，体外的抗原抗体反应称为血清学反应，因为抗体主要存在于血清中。

血清学反应可以用已知的抗体检查未知的抗原，也可用已知抗原测定未知的抗体。人们根据抗体能与相应抗原发生反应并出现可见的抗原—抗体复合物的原理，设计了许多血清学诊断方法，不仅可以检测动物体内乃至体外的病原微生物，或其抗原性成分，而且还可以测定动物机体对病原微生物的侵袭或对其抗原成分的免疫反应。在抗原—抗体复合物成不可见状态时，可以通过琼脂扩散、凝集实验以及酶标记等指示系统，使其变为可见或可测状态。

目前已知的血清学诊断方法很多，现仅介绍几种在目前条件下规模化猪场通过学习都能做到的诊断方法：

（1）凝集试验猪病诊断过程中常用的操作方法有以下几种：

①全血平板凝集试验实践中主要用于细菌性疾病的抗体检测和抗原（经分离培养后）的鉴定。现举例用已知猪丹毒抗原（丹毒杆菌的纯培养液）测定被检猪血清中的抗体。其操作步骤如下：

a.材料猪丹毒凝集抗原，玻片，9号针头，酒精棉球，酒精灯，铂耳（取血环）等。b.操作用铂耳取已知抗原1滴，置于玻片上。用酒精棉球擦拭针头，铂耳在酒精灯上灼烧消毒。用针头刺破被检猪的耳静脉，以铂耳取血与玻片上的抗原等量混合，在2～3分钟内观察结果。c.结果判定出现颗粒状的凝集，为阳性反应。否则为阴性。

②试管凝集试验是一种定量法，用于测定被检血清或其他体液中有否某种抗体及其效价，可做临床的辅助诊断，或用于流行病学监测。在猪场中，本法常用于猪布氏杆菌病的诊断。

A.材料布氏杆菌病试管凝集抗原（1∶20倍稀释），布氏杆菌病阳性血清、阴性血清（1∶25倍稀释），稀释液（0.5 %石炭酸生理盐水），灭菌小试管，1毫升吸管，试管架，待检血清等。B.操作取试管7支置于试管架上，设阳性和阴性血清及抗原对照各1支，测定管4支，以后每增加1个样品，只需增加4支测定管。

按表10示意稀释血清，加抗原，完成后每支试管内应含1毫升液体。