维生素d定量检测方法

1. 食品中维生素d 测定

简要描述： 高效液相色谱法 1. 原理 样品中脂溶性维生素在皂化过程中与脂肪分离，以石油醚萃取后，用正相色谱柱提取富集，用反相色谱柱，紫外检测器定量测定。 2. 适用范围 ...高效液相色谱法
1. 原理
样品中脂溶性维生素在皂化过程中与脂肪分离，以石油醚萃取后，用正相色谱柱提取富集，用反相色谱柱，紫外检测器定量测定。
2. 适用范围
本方法来源于GB/T 5413.9-1997。适用于婴幼儿配方食品和乳粉维生素A、维生素D、维生素E的测定；也适用于食品或强经食品及饲料中的维生素D含量的测定。
3. 主要仪器
1) 高压液相色谱仪，具有可变波长的紫外检测器，数据处理系统或记录仪。
2) 旋转蒸发器。
3) 平底烧瓶：250mL。
4) 分液漏斗：500mL。
4. 试剂
所有试剂，如未注明规格，均指分析纯，所实验用水均指蒸馏水。
1) 异丙醇：色谱纯。
2) 2％焦性没食子酸乙醇溶液：取2g焦性没食子酸溶液于100mL无水乙醇中。
3) 75％氢氧化钾溶液：取75g氢氧化钾溶于100mL水中。
4) 石油醚：沸程30～60℃。
5) 甲醇：色谱纯。
6) 正己烷：色谱纯。
7) 环己烷:色谱醇。
8) 维生素D标准溶液
A. 维生素D2标准贮备液：含维生素D2100mg/ml的甲醇溶液。称取10mg的维生素D2，用甲醇定容于100mL容量瓶中。
B. 维生素D3的标准贮备液：含维生素D3100mg/ml的甲醇溶液。称取10mg的维生素D3，用甲醇定容于100mL容量瓶中。
5. 操作步骤
5.1样品处理：准确称取10g样品，于250mL平底烧瓶中，加30mL蒸馏水。
5.2测定液的制备：
1) 于上述样品溶液中加入100mL的20％没食子酸乙醇溶液，充分混匀后加50mL75％氢氧化钾溶液，在蒸汽浴上边续回流30min后，立刻冷却到室温。
2) 将皂化液转入一500mL分液漏斗中，用100mL水分几次冲平底烧瓶。洗涤液并入分液漏斗中。
3) 于上述分液漏斗中，加入100mL石油醚，盖好瓶塞，倒置分液漏斗并剧烈振摇1 min.在振摇过程中，注意释放瓶内压力。静置分层，将水相放入另一500mL分液漏斗中，重复上棕萃取过程2次，合并醚液到第一个分液漏斗中。用蒸馏水洗该醚液至中性，通过无水硫酸钠过滤干燥，在40℃和氮气流下，于旋转蒸发器上蒸至近于（绝不允许蒸干）后，用石油醚转移至10mL容量瓶中，定容。
4) 从上述容量瓶中取7mL放入一试管中，用氮气将石油醚吹干，于试管中加1mL正己烷。
5.3测定：
1) 测定液的制备：
A) 仪器条件：
色谱柱：30cm×40cm，硅胶柱。
流动相：正己烷与环己烷按体积比1：1混合，并按体积分数0.8％加入异丙醇。
流速：1mL/min。
波长：265nm。
柱温：20℃。
灵敏度：0.005AU/MV。
注射体积：200mL。
B) 注射50mL维生素D标样和200mL样品溶液，根据维生素D标样保留时间收集维生素D于试管中，将试管用氮气吹干，准确加入0.2mL甲醇溶解。
2) 测定步骤：
A) 仪器条件：
色谱柱：4.6mm×25cm，C18或具同等性能的色谱柱。
流动相：甲醇。
流速：1mL/min。
波长：265nm。
柱温：20℃。
灵敏度：0.005AU/MV。
注射体积：50mL。
B) 注射50mL维生素D标准溶液，注射50mL样品溶液，得到标样和样品溶液中维生素D峰面积或峰高。
6. 计算
ρs×10∕7×40×100
X =
m
As
ρs= ---×ρsd
Asd
式中： X--样品维生素D的量，mg/100g；
m--称样量，含量，IU∕100g；
ρs --进样液中维生素D有浓度，mg/mL；
A s --进样液中维生素D有峰高（或峰面积）；
A s d --标样液中维生素D有峰高（或峰面积）；
ρsd --标样中维生素D的浓度；
计算结果精确至小数点后一位。
7. 注意事项
1) 允许误差及最小检出量：同一样品的2次测定值之差不得超过2次测定平均值的10％；最小检出量为0.1国标单位。
2) 试剂焦性没食子酸容易变性，应购习近期生产的试剂。
3) 如果皂化不完全，可适当增加氢氧化钾的加入量。

2. 维生素d检查之前吃饭喝水吗

维生素d检查之前可以吃饭喝水，对检查结果没影响，但是不能用食用维生素D3的维生素片等，检查时要求应放松心情，配合医生做好检查。
维生素D(vitamin D)是类固醇的衍生物，分为迅此竖维生素D2和维生素D3。检测维生素D主要通过以下方法测定：
1、血清25-羟维生素D3测定：25-羟维生素D3是维生素D3的主要代谢产物，测定其具有早期诊断的价值。
2、血亩大液生化检查：其改变比X线影像显示的骨扒御骼改变早。

3. 如果身体缺乏维生素ABCD，有什么办法可以自查

如果身体缺乏维生素ABCD，有什么办法可以自查？

维生素是体内必不可少的微量元素之一，如检查维生素缺乏，需要到正规的三甲医院挂内分泌科或者普内科行常规检查。

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维生素是人体内必须的一种化合物质，缺乏维生素会导致人体出现各种各样的疾病例如表面皮肤干燥、缺乏弹性、人体内缺乏营养物质，甚至会导致胃肠道功能减退及对营养物质的吸收、代谢能力降低从而引发各种继发性疾病，引发胃溃疡、胃炎等疾病，除此之外会导致患者精神状态不佳、脾气暴躁、记忆力下降等精神系统疾病，幼儿缺乏维生素会导致身体发育障碍。所以，缺乏维生素应该进行血液检查，价格在20-50元不等，可以有效检查出身体内缺乏的维生素。

4. 食品中维生素d检测方法

食品中的维生素D的检测方法很简单的，只要用一些测量仪和试试剂就可以检测出胃酸分泌的。

5. 维生素D3有那些方法学可以检测出来

方法名称：
维生素D3的测定—高效液相色谱法
应用范围：
本方法采用高效液相色谱法测定维生素D3的含量。
本方法适芹启用维生素D3。
方法原理：
供试品和内标均制成甲醇溶液，进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长254nm处检测维生素D3（C27H44O）和内标邻苯二甲酸二甲酯的吸收值，计算出其含量。嫌友如
试剂：
1.异辛烷
2. 正己烷
3. 正戊醇
仪器设备：
1. 仪器
1.1 高效液相色谱仪
1.2 色谱柱
硅胶为填充剂，维生素D2峰与内标物质峰的分离度应符合要求。
1.3 紫外吸收检测器
2. 色谱条件
2.1 流动相：正己烷+正戊醇= 997 3
2.2 检测波长：254nm
2.3 柱温：室温
试样制备：
1. 称取供试品
精密称取本品25mg，置100mL棕色量瓶中。
2. 对照品溶液的制备
精密称取维生素D3对照品和维生素D3对照品25mg，置100mL棕色量瓶中，加异辛烷80mL，避免加热，超告游声处理1分钟使完全溶解，并加异辛烷至刻度，摇匀，冲氮密塞，避光，0℃以下保存。
3. 内标溶液的制备
取邻苯二甲酸二甲酯25mg，置25mL量瓶中，加正己烷溶解并稀释至刻度，即得。
4. 供试品溶液的制备
上述供试品加三甲基戊烷80mL，避免加热，用超声处理1分钟使溶解，加三甲基戊烷稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。
操作步骤：
分别精密吸取上述供试品溶液与对照品溶液，20μL 注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长254nm处测定维生素D3和内标邻苯二甲酸二甲酯的吸收值，按内标法以峰面积计算，即得。

6. 药明奥测维生素D检测创新解决方案好不好

目前，全国多地正在推进疫情常态化，这促进了诊疗场景的进一步拓展，在社区、在第三方检测机构、在轿慧尘家中，方便快捷地采集、检测，已成为广大人民群众的普遍需求。药明奥测维生素D检测创新解决方案，开创性地利用了干血斑样本（dried blood spot，DBS）进行血清总25-羟维生素D水平检测，检测者无需去医院抽血，⌄在院外即可轻松完成采样。其“金标准”质谱法，碧扮结果精准、过程便捷，DBS样本与血液样本检测结果一致性达95%以上，打破了诊疗场闭禅景的局限，实现了高质量医疗服务的更广覆盖。

7. 维生素检测用什么分析仪器比较好

课程详情介绍

维生素是消费者关注的营养成分之一，也是食品检测行业的热门项目。本课程结合维生素的类别、作用、检测手段的发展历史等，对目前国际国内各种维生素的测试方法及常用分析仪器进行讲解。

本课程除了理论内容，我们还将安排学员进行实际操作练习，了解维生素测试的前处理过程及相关仪器分析技术。此外，我们还将给学员讲解维生素测试的影响因素，并对如何消除这些因素、确保数据的准确性进行深入探讨。

维生素检测通常使用液相色谱仪。本课程根据维生素检测所使用的液相色谱仪，详细介绍其工作原理、结构特点和仪器维护要点，使学员掌握仪器的故障排查及日常维护方法。同时，讲解液相色谱数据采集和处理方法的编辑过程，并安排练习，确保学员可以独立操作液相色谱完成维生素日常检测工作。
品质项目包括：

水分、含盐量、含糖量、蛋白含量、脂肪含量、纤维含量、维生素含量、酸度等。对于这些项目的检测，如果经费有限，都可以采用化学法分析，只需配制最简单的烘箱、水浴、电炉、搅拌器、粉碎机、pH计等设备即可。

如果经费充足或检验批次较多，对应的检测项目都有对应的专用仪器可供选购。此外，也有一些通用的仪器可供选购，如：紫外/可见分光光度计、近红外分析仪、自动滴定仪等。检测维生素A、E等有时还需配制荧光光度计。检测营养元素，如，钙、锌、铁等，可购置原子吸收仪-火焰检测器。

(2)卫生项目包括：

微生物、添加剂、有害元素、农药残留、兽药残留、毒素等。对于一般食品企业，微生物检测实验室应该建。

（a)微生物：

建微生物实验室要按照生物实验室规范标准要求进行布局。必要的设备有洁净台、培养箱、高压灭菌锅、电炉等，其它设备则根据具体检测项目配置。经费少可以买国产的，经费多可以考虑买进口的，两者的价钱相差很多。

（b)添加剂和有害元素：

有一部分项目可以用化学法，如，亚硝酸盐、二氧化硫、重金属含量、总砷等，但要想满足现在国标的食品卫生要求，应该购置气相色谱-氢火焰检测器、液相色谱-紫外/可见光检测器，这样一般的防腐剂(苯甲酸、山梨酸等)、甜味剂(甜蜜素、糖精钠等)、色素(柠檬黄、胭脂红等)都可以检测了。购置原子吸收仪-石墨炉检测器，可以分别检测铅、铬、镉、铜、镍等有害元素，还需要一台原子荧光仪，用来检测砷和汞等。

（c)残留农药：

检测残留农药气相色谱必不可少，检测有机氯农药，需配电子俘获ECD检测器;检测有机磷农药，需配火焰光度FPD检测器或氮磷NPD检测器。现在，农残检测的项目越来越多，为提高通用性，建议配置毛细管柱分流/不分流进样口，安装毛细管色谱柱。与传统填充色谱柱相比，毛细管柱分析项目多，分离度好，可以减少频繁的更换色谱柱，提高分析效率。出口食品加工企业生产的产品在出口时需检测的农残项目越来越多，为了把好生产原料和产品质量关，可以配置气相色谱-质谱仪。一般只需配制电子轰击EI源，如果有必要可再配一个负化学NCI源，是选择四级质谱还是离子阱质谱，个人认为都可以，两种仪器各有优缺点。还是要看具体工作。

（d)残留兽药：

若进行残留兽药的检测，项目不多且批次多，可以考虑配制酶联免疫仪，该仪器一次投入不大，操作简便，检测灵敏度高。采用ELISA也有一些缺点，一是试剂盒为长期的消耗品，若检测的批次少，成本会较高，二是特异性不好，可能会有假阳性，三是如果在相对长的一段时间内检测项目较多，成本甚至比仪器分析还高。对于有一定规模的出口食品企业，为适应当前欧盟、美国、日本等发达国家检测限量要求，最好配制一台液相色谱-串联质谱仪。第一台仪器建议配置三重四级质谱仪，灵敏度高、重现性好。仪器不一定要追求高配置，够用就行，但灵敏度、稳定性、抗污染等性能要好。最好买用户较多的型号，有一个与自己检测项目相近的用户群，首先说明该型号仪器检测拟检的项目没有问题，其次，也便于今后技术交流。