细胞因子风暴的检测方法

Ⅰ 细胞内细胞因子的流式细胞怎样检测

胞内流式分析法是用抗细胞因子抗体与细胞表面或胞内特定亚群标志组合，即可检测不同细胞亚群细胞因子的分泌，同时采用特殊的化学与抗体选择，确保静止与无细胞因子分泌细胞的最小荧光背景。具有其它方法难以比拟的优点： 快速：流式定量检测细胞内细胞因子可在一天内完成，实验流程需6-8小时，实际操作时间为1-2小时，快速简便; 简便：无需组织培养，可以全血分析，无需分离PBMCs; 灵敏度高：高度灵敏的荧光标记与检测系统; 高效：可以在同一个细胞内同时检测两种或更多种细胞因子，也可根据细胞免疫表型区分分泌细胞因子的细胞的亚型，进行多参数相关分析; 安全：减少样本处理与生物源性污染 接近生物体的分析条件：全血检测保留细胞及生化微环境更准确反映了体内状况。 生物帮上面有这方面的详细内容，SDS提取法 http://www.bio1000.com/experiment/hesuan/241857.html

Ⅱ Th细胞的Th细胞胞外细胞检测

胞外细胞因子的检测：主要检测血浆（血清）和其他本液中的细胞因子，血浆（血清）中细胞因子的测定。可确切反应细胞因子的表达状态，某些体液标本如脑脊液、滑膜组织液、支气管灌洗液、胸腹水等与特定疾病直接相关。 流式细胞术（flow cytometery，FCM）其基本原理是：用刺激剂PMA、ionomycin（离子霉素）体外激活淋巴细胞，用蛋白转运抑制如黄能霉素（monensin）阻止细胞因子分泌到细胞外，细胞内蛋白质转运方式被打乱，引起细胞因子向高尔基体积聚，用流式细胞仪便可测出增强细胞因子。这一技术的发展使得以往通过T细胞克隆方式在几个月才能回答的问题，在几个小时内就能得以解决。该技术成为单细胞水平上检测细胞因子产生的标准分析方法，尽管细胞因子标记流式细胞技术具有其他方法无可比拟的优越性，但是在操作过程中，需要对细胞进行刺激、阻断、固定、穿透和标记，任何一个环节都会影响实验结果[8]。流式细胞仪法常用检测指标为以CD4设门进行FCM分析。通过CD4+ 细胞中IFN-γ和IL-4的表达来确定TH1/ TH2细胞的百分率[9-10]。以CD3/CD8设门，用FCM检测分析TH1/ TH2细胞的表达率，结果准确可靠，操作方便快捷，是检测TH1/ TH2细胞较理想的方法[11-12]。近年来发现CD4+T细胞向不同的方向极化，细胞表面表达不同趋化因子受体（chemokine receptor），趋化因子受体CCR5主要表达于TH1细胞表面，是TH1细胞的特异性标记[14]，因此，利用针对趋化因子受体的特异性单克隆抗体来测定TH不同亚群特异笥较高，而且操作较简单。CCR5和CCR3抗体是最近开发出来的，但只能反映TH细胞数量上的变化，其与功能（细胞因子分泌）的变化不否一致，有待进一步的研究。

Ⅲ 如何检测组织中炎症细胞因子

检测细胞因子的方法主要有生物学检测法、免疫学检测法和分子生物学检测法。
1、生物学检测法
2、免疫学检测法
3、分子生物学方法

Ⅳ 测细胞因子含量常用的 elisa 方法为

有一个朋友来找我咨询用流式检测细胞因子的问题，他之前用ELISA 检测细胞因子的话，发现样本量需求很多，然而有些样本量又比较少怎么办呢，那么接下来我来对比几种检测细胞因子的优缺点，供各位大大们阅读参考啦~

细胞因子（cytokine，CK）：是由免疫细胞（如单核、巨噬细胞、T细胞、B细胞、NK细胞等）和某些非免疫细胞（内皮细胞、表皮细胞、纤维母细胞等）经刺激而合成（一般是免疫细胞）、分泌的一类生物活性物质分泌的蛋白质，在体内广泛参与免疫调节及炎症反应、组织修复、刺激造血系统、刺激细胞的增殖与凋亡等重要生理活动，在抵抗外来病原及维持机体内环境平衡中均起重要作用。

细胞因子的作用方式：自分泌作用、旁分泌作用、内分泌作用。

细胞因子的作用特点：多效性、重叠性、协同性、拮抗性和双重性。

根据产生细胞因子的细胞种类不同分类：白细胞介素（interleukin, IL)、干扰素（interferon, IFN)、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor, TNF)、转化生长因子-β家族（transforming growth factor-β family, TGF-β family)、集落刺激因子（colony stimulating factor, CSF)、趋化因子（chemokinefamily)、生长因子（growth factor,GF）等。

细胞因子的检测方法一般分为生物学、分子生物学测定法及免疫学（重点介绍）

1、生物学测定法 其原理是根据细胞因子对特定的依赖性细胞株(即靶细胞)的促增殖作用,以增殖细胞中的DNA的合成或酶活性为指标,间接推算出细胞因子的活性单位,如对IL-1、IL-2等细胞因子活性的检测。亦可根据某些细胞因子对特定靶细胞的杀伤效应或对病毒的抑制作用进行测定,如对肿瘤坏死因子及干扰素的生物活性测定。

2、分子生物学测定法 目前采用的技术有各种印迹法、斑点杂交、原位杂交和PCR等。通过检测细胞内细胞因子的基因组成或mRNA量,推算出细胞因子的合成量。

3、免疫学检测法 其基本原理是将细胞因子作为抗原进行定量检测。如免疫斑点法、ELISA法、免疫印迹法和流式细胞仪等均已用于细胞因子的检测。

细胞因子的检测方法对比

1、酶联免疫吸附实验（ELISA）

原理：使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。由于酶的催化频率很高，故可放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。

优点：避免特异性抗体直接标记，便宜。

缺点：所需样本量多、每次仅能测定一项细胞因子、操作步骤和测定时间过长、酶联反应所致的人工假象

2、流式细胞仪（CBA）

原理：利用微小、分散的颗粒捕获液体待测物，并利用流式细胞仪检测类似“三明治”的颗粒——待测物复合体所散发的荧光，从而测定待测物的数量。

优点：所需样本量少、快速（实验6-8h可以完成）操作简便、灵敏度高、重复性好、高效（同一个样品可以同时检测多个因子）、安全、接近生物体的分析条件（全血检测保留细胞及生化微环境更准确反应了体内状况）。