⑴ 游泳池水中大肠菌群检验方法
详细见SN0169-92,里面对水的大肠菌群的检测方法有严格的规定。中华人民共和国进出口商品检验行业标准
出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群 SN 0169—92
和大肠杆菌检验方法 代替 ZB X09 002一88
Method for examination of coliform, fecal coliform
and escherichia coli in food for export
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1 主题内容与适用范围
本标准规定了出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检验方法。
本标准适用于出口食品的检验。
2 设备和材料
2.1 吸管: 1mL,具0.1mL刻度；5mL和10mL,具1mL刻度。
2.2 水浴箱：44.5±0.5℃。
2.3 培养箱：36±1℃,44.5±0.5℃。
2.4 冰箱: 0～5℃和-15～-20℃。
2.5 均质器。
2.6 乳钵和研棒。
2.7 平皿：直径90mm。
2.8 天平：感量0.1g。
2.9 显微镜。
2.10 稀释瓶：100mL、200mL和500mL三角烧瓶及广口瓶。
2.11 玻璃珠：直径约5mm。
2.12 菌落计数器。
3 培养基及试剂
3.1 月桂基硫酸盐胰蛋白(月示)(LST)肉汤。
3.2 煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤。
3.3 EC 肉汤。
3.4 伊红美蓝琼脂(EMB)。
3.5 营养琼脂斜面。
3.6 色氨酸肉汤。
3.7 MR-VP培养基。
3.8 Korser氏枸椽酸盐肉汤。
3.9 结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)。
3.10 Butterfield 氏磷酸盐缓冲稀释液。
3.11 生理盐水。
3.12 革兰氏染色液。
3.13 Kovacs氏靛基质试剂。
3.14 甲基红指示剂。
3.15 Voges-pros kauer(V-P)试剂。
4 样品制备
4.1 以无菌操作取有代表性的样品。如有包装则用75％乙醇在开口处擦拭后取样。若不能
及时检验,应将冷冻样品置于-15℃保存；非冷冻而易腐的食品,应置于4℃冰箱保存。检
验前冷冻样品可于2～5℃ 18h内解冻,或在45℃以下15min内解冻。
4.2 不同食品样品匀液的制备
4.2.1 液体食品
以灭菌吸管取样25mL放入装有225mL稀释剂的灭菌玻璃瓶(瓶内预置适当数量的玻璃珠),
以30cm幅度、于7s内振摇25次(或以机械振荡器振摇),制成1:10的样品匀液。
4.2.2 固体和半固体食品
以无菌操作取25 g样品,放入装有225 mL稀释剂的灭菌均质杯内,于8000 r/min均质
1～2min,制成1:10样品匀液(也可用灭菌乳钵研磨的方法代替)。
4.3 稀释样品匀液根据对样品污染情况的估计,用稀释剂将样品匀液制成一系列十倍递
增的样品稀释液,如10**-2、10**-3、10**-4……。从制备样品匀液至稀释完毕,全过程
不得超过15min。
5 大肠菌群的测定
5.1 大肠菌群MPN值的测定
5.1.1 对每个样品,选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释液。每个稀释度接种三管月
桂基硫酸盐胰蛋白(月示)(LST)肉汤,每管接种1mL。
5.1.2 将接种管置于36±1℃培养48±2h。
5.1.3 观察试管的产气情况：检查倒管内是否有气泡产生,记录在24h和48h内产气的LST
肉汤管数。如所有LST肉汤管均未产气,则可报告为大肠菌群阴性；如有产气者,则进一
步作证实试验。
5.2 大肠菌群的证实试验
5.2.1 将所有产气管用直径为3mm的接种环移种到煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤管中。
5.2.2 置BGLB肉汤管于36±1℃培养48±2h。
5.2.3 记录所有BGLB肉汤管的产气管数。
5.2.4 结果报告：按BGLB肉汤产气管数,查MPN表[见附录B (补充件)]报告每克(毫升)样
品中大肠菌群的MPN值。
6 粪大肠菌群测定
6.1 用直径为3mm的接种环将所有48±2h内产气的LST肉汤管培养物移种于EC肉汤管中。
6.2 将所有接种的EC肉汤管在30min内放入带盖44.5±0.5℃水浴箱内,培养24±2h。水
浴箱的水平面应高于肉汤培养基液面。应以已知为44.5℃产气阳性的大肠杆菌和44.5℃不
产气的产气肠杆菌或其他大肠菌群细菌作阳性和阴性对照。
6.3 记录EC肉汤管的产气情况。产气管为粪大肠菌群试验阳性；不产气管为粪大肠菌群
试验阴性。
6.4 结果报告：按产气管数,查MPN表报告每克(毫升)样品中粪大肠菌群的MPN值。
7 大肠杆菌测定
7.1 将6.3条中的EC肉汤管继续培养24h,取其产气管的培养物划线接种于伊红美蓝(EMB)
平板,36±1℃培养24±2h。
7.2 检查平板上有无具黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落。
7.3 如有典型菌落,则从每个平板上至少挑取2个典型菌落；如无典型菌落,则从每个平
板上至少挑取2个可疑菌落。用接种针接触菌落中心部位,移种到营养琼脂斜面上,36±1℃
培养18～24h。
7.4 将斜面培养物移种到下列培养基中进行生化试验。
7.4.1 色氨酸肉汤：在36±1℃培养24±2h后,加Kovacs氏试剂0.2～0.3mL,上层出现红
色为靛基质阳性反应。
7.4.2 MR-VP培养基：在36±1℃培养48±2h。以无菌操作移取培养物1 mL至13mm×100mm
试管中,加5％α-萘酚乙醇溶液0.6mL,40％氢氧化钾溶液0.2mL和少许肌酸结晶,振摇试
管后静置2h,如出现伊红色,为VP试验阳性。
将MR-VP培养物的剩余部分再培养48h滴加5 滴甲基红溶液。如培养物变红色,为甲基
红试验阳性,若变黄色则为阴性反应。
7.4.3 Koser氏枸椽酸盐肉汤：于36±1℃培养96h记录有无生长。
7.4.4 LST肉汤：于36±1℃培养48±2h,观察试管中是否产气。
7.4.5 革兰氏染色：取18h营养琼脂斜面培养物作革兰氏染色。大肠杆菌为革兰氏阴性。
7.4.6 大肠杆菌与非大肠杆菌生化鉴别如下：
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靛 基 质┃ MR ┃ VP ┃ 枸椽酸盐 ┃ 鉴定(型别)
━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━━━
＋ ┃ ＋ ┃ － ┃ － ┃典型大肠杆菌
－ ┃ ＋ ┃ － ┃ － ┃非典型大肠杆菌
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＋ ┃ ＋ ┃ － ┃ ＋ ┃典型中间型
－ ┃ ＋ ┃ － ┃ ＋ ┃非典型中间型
━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━━━
－ ┃ － ┃ ＋ ┃ ＋ ┃典型产气肠杆菌
＋ ┃ － ┃ ＋ ┃ ＋ ┃非典型产气肠杆菌
━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━━━━
如出现上表以外的生化反应类型,表明培养物可能不纯,应重新划线分离,必要时做
重复试验。
7.5 结果报告：大肠杆菌为革兰氏阴性无芽孢杆菌,发酵乳糖产酸产气,IMViC试验为＋＋
－－或－＋－－,再根据LST肉汤阳性管数查MPN表,报告每克(毫升)样品中大肠杆菌MPN
值。
8 大肠菌群固体培养基测定法
8.1 样品制备同第4章。
8.2 计数
8.2.1 选取适宜的三个连续稀释度的样品液,每个稀释度接种两个灭菌平皿,每皿1mL。
另取1mL稀释剂加入一个灭菌平皿中,作空白对照。
8.2.2 将冷至45±0.5℃的结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)10～15mL倾注于每个平皿中。小
心旋转平皿,将培养基与样液充分混匀。
8.2.3 待琼脂凝固后,再加3～4mL VRBA覆盖平板表层。
8.2.4 翻转平板,置于36±1℃培养18～24h。
8.2.5 选用有30～150个菌落的平板,计数平板上出现的典型大肠菌群菌落。典型菌落为
紫红色,菌落周围有红色的胆盐沉淀环。菌落直径为0.5mm或更大。
8.2.6 证实
8.2.6.1 从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落,移种于BGLB肉汤管内, 36±
1℃培养24h和48h,观察产气情况。
8.2.6.2 将出现产气的肉汤管判为大肠菌群阳性。对形成菌膜的阳性管,应进行革兰氏
染色,以便排除革兰氏阳性杆菌。
8.2.7 结果报告
经最后证实为阳性(产气,革兰氏阴性杆菌) 的试管百分比乘以于8.2.5条中计数的平
板菌落数,再乘以稀释倍数,即为每克(毫升)样品中大肠菌群数。
例：10**-4样品稀释液1mL,在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落,挑取其中10个接
种BGLB肉汤管,证实有6个阳性管,则该样品的大肠菌群数为：
100×6/10×10**4/g(mL)＝6.0×10**5/g(mL)
附 录 A
培养基和试剂
(补充件)
A1 月桂基硫酸盐胰蛋白(月示)(LST)肉汤
胰蛋白(月示)或胰酪胨(Trypticase) 20g
氯化钠 5.0g
乳糖 5.0g
磷酸氢二钾(K2HPO4) 2.75g
磷酸二氢钾(KH2PO4) 2.75g
月桂基硫酸钠 0.1g
蒸馏水 1000.0mL
将各成分溶解于蒸馏水中。分装到有倒立发酵管的20mm×150mm试管中,每管10mL。
121℃高压灭菌15min。最终pH6.8±0.2。
A2 煌绿乳糖胆盐(BGAB)肉汤
蛋白胨 10.0g
乳糖 10.0g
牛胆粉(oxgall或oxbile)溶液 200.0mL
0.1％煌绿水溶液 13.3mL
蒸馏水
将蛋白胨乳糖溶于约500mL蒸馏水中,加入牛胆粉溶液200mL(将20.0g脱水牛胆粉溶于
200 mL蒸馏水中,pH7.0～7.5),用蒸馏水稀释到975mL,调pH7.4。再加入0.1％煌绿水溶
液13.3mL,用蒸馏水补足到1000mL,用棉花过滤后,分装到20mm×150mm试管(管内有倒立
的小发酵管)中,每管10mL。121℃高压灭菌15min。最终pH7.2±0.1。
A3 EC肉汤
胰蛋白(月示)或胰酪(月示) 20.0g
3号胆盐或混合胆盐 1.5g
乳糖 5.0g
磷酸氢二钾(K2HPO4) 4.0g
磷酸二氢钾(KH2PO4) 1.5g
氯化钠 5.0g
蒸馏水 1000.0mL
将以上成分溶解于蒸馏水中,分装16mm×150mm试管(管内有倒立的小发酵管),每管
8mL。121℃高压灭菌15min,最终pH6.9±0.1。
A4 伊红美蓝琼脂(EMB)
蛋白胨 10.0g
乳糖 10.0g
磷酸氢二钾(K2HPO4) 2.0g
琼脂 15.0g
伊红γ(水溶性) 0.4g或2％水溶液20mL
美蓝 0.065g或0.5％水溶液13mL
蒸馏水 1000.0mL
在1000mL蒸馏水中煮沸溶解蛋白胨、磷酸盐和琼脂,加水补足至原量。分装于三角烧
瓶中。每瓶100mL或200mL,高压灭菌15min。最终pH7.1±0.2。使用前将琼脂融化,于每
100mL琼脂中加5mL灭菌的20％乳糖水溶液、2mL的2％伊红γ水溶液和1.3mL0.5％的美蓝水
溶液,摇匀,冷至45～50℃倾注平皿。
A5 营养琼脂斜面
牛肉膏 3.0g
蛋白胨 5.0g
琼脂 15.0g
蒸馏水 1000.0mL
将各成分加于蒸馏水中,煮沸溶解。分装合适的试管。121℃高压灭菌15min。最终
pH7.3±0.1。灭菌后摆成斜面备用。
A6 色氨酸肉汤
胰胨或胰酪胨 10.0g
蒸馏水 1000.0mL
加热搅拌溶解胰胨或胰酪胨于蒸馏水中。分装试管,每管5mL。121℃高压灭菌15min。
最终pH6.9±0.2。
A7 MR-VP培养基
(月示)胨 7.0g
葡萄糖 5.0g
磷酸氢二钾(K2HPO4) 5.0g
蒸馏水 1000.0mL
将各成分溶于蒸馏水中,分装试管,121℃高压灭菌15min,最终pH6.9±0.2。
A8 Koser氏枸椽酸盐肉汤
磷酸氢铵钠(NaNH4HPO4·4H2O) 1.5g
磷酸氢二钾(K2HPO4) 1.0g
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2g
枸椽酸钠(含2H2O) 3.0g
蒸馏水 1000.0mL
将各成分溶解于蒸馏水中,分装试管,每管10 mL,121℃高压灭菌15min。最终pH6.7
±0.2。
A9 结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)
蛋白胨 7.0g
酵母膏 3.0g
乳糖 10.0g
氯化钠 5.0g
胆盐或3号胆盐 1.5g
中性红 0.03g
结晶紫 0.002g
琼脂 15～18g
蒸馏水 1000.0mL
将上述成分溶于蒸馏水中,静置几分钟,充分搅拌,调至pH7.4±0.1。煮沸2min,将
培养基冷至45～50℃倾注平板。临用时制备,不得超过3h。
A10 Butterfield氏磷酸盐缓冲稀释液
贮存液
磷酸二氢钾(KH2PO4) 34.0g
蒸馏水 500mL
将磷酸二氢钾溶于蒸馏水中,用1 mol/L氢氧化钠约175 mL调至pH7.2。用蒸馏水加至
1000mL贮存于冰箱。
稀释液
取贮存液1.25mL, 用蒸馏水稀释至1000mL,分装于合适容器后,121℃高压灭菌15min。
A11 生理盐水
氯化钠 8.5g
蒸馏水 1000.0mL
将氯化钠溶于蒸馏水中,121℃高压灭菌15min。
A12 革兰氏染色液
结晶紫染色液：
结晶紫 1.0g
95％乙醇 20.0mL
1％草酸铵水溶液 80.0mL
将结晶紫完全溶解于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合。
革兰氏碘液：
碘 1.0g
碘化钾 2.0g
蒸馏水 300.0mL
将碘与碘化钾先行混合,加入蒸馏水少许充分振摇,待完全溶解后,再加蒸馏水至
300mL。
沙黄复染液：
沙黄 0.25g
95％乙醇 10.0mL
蒸馏水 90.0mL
将沙黄溶解于乙醇中,然后用蒸馏水稀释。
染色法
a. 将涂片在火焰上固定,滴加结晶紫染液,染1min,水洗。
b. 滴加革兰氏碘液,作用1min,水洗。
c. 滴加95％乙醇脱色约15～30s,直至染色液被洗掉,不要过分脱色,水洗。
d. 滴加复染液,复染1min,水洗、待干、镜检。
结果：革兰氏阳性菌呈紫色,革兰氏阴性菌呈红色。
A13 Kovacs氏靛基质试剂
对二甲氨基苯甲醛 5.0g
戊醇 75.0mL
盐酸(浓) 25.0mL
将对二甲氨基苯甲醛溶于戊醇中,然后慢慢加入浓盐酸即可。
A14 甲基红指示剂
甲基红 0.1g
95％乙醇 300mL
将甲基红溶解于300mL乙醇中,加水稀释至500mL。
A15 Voges-Pros kauer(V-P)试剂
甲液
α-萘酚 5.0g
无水乙醇 100.0mL
乙液
氢氧化钾 40.0g
用蒸馏水加至 100.0mL
附 录 B
1g检样中最近似值(MPN)表
(补充件)
使用三管法,接种量分别为0.1,0.01和0.001g。
━━━━━━━━━┳━━━━┳━━━━━━━━━━┳━━━━
阳 性 管 数 ┃ ┃ 阳 性 管 数 ┃
━━━━━━━━━┫ MPN ┣━━━━━━━━━━┫ MPN
0.1 0.01 0.001 ┃ ｜ 0.1 0.01 0.001 ┃
━━━━━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━
0 0 0 ┃ ＜3 ┃ 2 0 0 ┃ 9.1
0 0 1 ┃ 3 ┃ 2 0 1 ┃ 14
0 0 2 ┃ 6 ┃ 2 0 2 ┃ 20
0 0 3 ┃ 9 ┃ 2 0 3 ┃ 26
0 1 0 ┃ 3 ┃ 2 1 0 ┃ 15
0 1 1 ┃ 6.1 ┃ 2 1 1 ┃ 20
0 1 2 ┃ 9.2 ┃ 2 1 2 ┃ 27
0 1 3 ┃ 12 ┃ 2 1 3 ┃ 34
0 2 0 ┃ 6.2 ┃ 2 2 0 ┃ 21
0 2 1 ┃ 9.3 ┃ 2 2 1 ┃ 28
0 2 2 ┃ 12 ┃ 2 2 2 ┃ 35
0 2 3 ┃ 16 ┃ 2 2 3 ┃ 42
0 3 0 ┃ 9.4 ┃ 2 3 0 ┃ 29
0 3 1 ┃ 13 ┃ 2 3 1 ┃ 36
0 3 2 ┃ 16 ┃ 2 3 2 ┃ 44
0 3 3 ┃ 19 ┃ 2 3 3 ┃ 53
━━━━━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━
1 0 0 ┃ 3.6 ┃ 3 0 0 ┃ 23
1 0 1 ┃ 7.2 ┃ 3 0 1 ┃ 39
1 0 2 ┃ 11 ┃ 3 0 2 ┃ 64
1 0 3 ┃ 15 ┃ 3 0 3 ┃ 95
1 1 0 ┃ 7.3 ┃ 3 1 0 ┃ 43
1 1 1 ┃ 11 ┃ 3 1 1 ┃ 75
1 1 2 ┃ 15 ┃ 3 1 2 ┃ 120
1 1 3 ┃ 19 ┃ 3 1 3 ┃ 160
1 2 0 ┃ 11 ┃ 3 2 0 ┃ 93
1 2 1 ┃ 15 ┃ 3 2 1 ┃ 150
1 2 2 ┃ 20 ┃ 3 2 2 ┃ 210
1 2 3 ┃ 24 ┃ 3 2 3 ┃ 290
1 3 0 ┃ 16 ┃ 3 3 0 ┃ 240
1 3 1 ┃ 20 ┃ 3 3 1 ┃ 460
1 3 2 ┃ 24 ┃ 3 3 2 ┃ 1100
1 3 3 ┃ 29 ┃ 3 3 3 ┃＞1100
━━━━━━━━━┻━━━━┻━━━━━━━━━━┻━━━━
注: ①本表采用3个稀释度 [0.1g(mL)、0.01g(mL)和0.001g(mL)],每个稀释度接种3管。
②表内所列检样量如改用1g(mL)、0.1g(mL)和0.01g(mL)时,表内数字应相应降低10
倍；如改用0.01g(mL)、0.001g(mL)和0.0001g(mL)时,则表内数字应相应增加10倍,其余
类推。
━━━━━━━━━━━
附加说明：
本标准由中华人民共和国国家进出口商品检验局提出。
本标准由中华人民共和国秦皇岛进出口商品检验局、安徽进出口商品检验局、山西进
出口商品检验局负责起草。
本标准主要起草人李桂生、汤鹏飞、于桂华。
本标准主要参考美国公职分析化学家协会(AOAC)法定分析方法第14版第46章(1984年)。
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中华人民共和国国家进出口商品检验局1992-12-28批准 1993-05-01实施
⑵ 碳酸饮料的大肠菌群怎么检测 操作过程 需要哪些材料 一定要全面
进入无菌室步骤
1．
进入无菌室前应打开紫光灯进行灭菌，时间为0。5—1小时。
2．
关灯后0•5小时后放可进入。
3．
进入更衣间更换衣服，佩带口罩、帽子、鞋套
实验步骤
1，
进入无菌室后，先把酒精灯点燃，然后在用酒精棉进行手部消毒。（酒精棉是用75%的酒精加入脱脂棉中制成）
2，
准备双料管3根，单料管6根，培养皿7个。
3，
直接从原液中吸取10ml放入双料管，（3根每根各10ml）
4，
再吸取原液1ml放入单料管中（3根每根各1ml）
5，
再吸取原液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml）
6，
再吸取原液1ml放入盐水管中制成－1梯度的样液
7，
更换一根吸管，从－1梯度的样液吸取1ml样液放入单料管中（3根每根各1ml）
8，
再吸取－1梯度样液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml）
9，
再把每个培养皿中到入营养琼脂平铺底部摇允（注另作3个培养皿：空气空白，把培养皿打开十分钟倒入营养琼脂平铺底部摇匀。琼脂空白，把培养皿中倒入营养琼脂平铺底部摇匀。盐水空白，吸1ml生理盐水放入培养皿中，倒入营养琼脂平铺底部摇匀。）
10，
把全部作好的放入培养箱中，温度36C＋－1×C，大肠24H＋－2H，菌落48H＋－2H，（待培养皿中的琼脂凝固后反转过来放入培养箱中）
11，
梯度：－1梯度为1ml原液加入9ml生理盐水配成
－2梯度为1ml－1梯度样液加入9ml生理盐水配成
－3梯度－4梯度配制方法和－1、－2梯度的配制方法一样
12，
如果大肠初发酵产生气泡，用接种笔沾一个产气的液在伊红美兰平板上画之字形然后放入培养箱中36C，24H＋－2H
。（接种笔在每次使用前必须在酒精灯上消毒。所画之形不能划破伊红美兰琼脂表面）
13，
取出后在用接种笔在伊红美兰平板之字形上挑菌，放入乳糖复发酵管中
，然后再培养36C＋－1C，24H＋＋－2H。
14，
再在伊红美兰平板之字形上挑菌，放到载玻片上作镜检。（方法见标准）
15，
只有镜检成紫红色和乳糖复发酵管产气同时成立的情况下，才能断定这根管是不合格。
16，
清洗消毒这根试管前必须进行消毒霉菌，121C，0。5小时同时不能放气。
⑶ 怎样用便捷的方法检测大肠杆菌超标的自来水
检测原理：
大肠菌群是一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。食品中的大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
2.仪器设备与器具：
2.1 恒温培养箱：36±1℃。
2.2 1000ml三角烧瓶、1ml、10ml移液管。
2.3 接种针。
2.4 显微镜。
2.5 超净工作台。
2.6 玻片、酒精灯、洗耳球、试管架。
2.7 天平：感量0.01g。
2.8 灭菌釜。
2.9 培养皿（直径为90mm）、试管，经121℃、30分钟灭菌。
2.10试管夹、酒精灯、秒表、载玻片 3.培养基及试剂：
3.1 乳糖胆盐发酵管：按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。
3.2 伊红美兰琼脂平板： 按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。
3.3 乳糖发酵管： 按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。
3.4 革兰氏染色液。
3.4.1 结晶紫染色液：
结晶紫 1g
95%乙醇 20ml
1%草酸铵水溶液 80ml
将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
3.4.2 革兰氏碘液：
碘 1g
碘化钾 2g
蒸馏水 300ml
将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300 ml。
3.4.3 沙黄复染液：
沙黄 0.25g
95%乙醇 10ml
蒸馏水 90ml
将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。
3.5 生理盐水。
4.检验程序：
检样
↓
稀释
↓
乳糖胆盐发酵管，36±1℃，24±2hr
↓ ↓
不产气 产气
↓ ↓
大肠菌群阴性 伊红美兰琼脂平板，36±1℃，24±2hr
↓
报告 ↓ ↓
革兰氏染色 乳糖发酵管，36±1℃，24±2hr
↓
↓ ↓ ↓ ↓
G+ G-，无芽孢杆菌 产气 不产气
↓ ↓
大肠菌群阴性 大肠菌群阴性
↓ ↓ ↓
报告 大肠菌群阳性 报告
5.测定方法：
5.1 检样稀释：
5.1.1 以无菌操作将检样25ml(或25g)放于含有225ml灭菌生理盐水的灭菌塑料烧杯中，经充分振摇成1：10均匀稀释液。
5.1.2 用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌生理盐水的 试管中，振摇成1：100稀释液。
5.1.3 重复5.1.2的操作，使成1：1000稀释液。
5.2乳糖胆盐发酵试验：根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择二个稀释度，每一稀释度接种3管，接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管。1ml及1ml以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。然后置于36±1 ℃培
养箱内，培养24±2hr，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌
群阴性；如有产气者，则可按以下程序进行。
5.3分离培养：将产气的发酵管分别接种于伊红美兰琼脂平板上，置36±1℃温箱内，培养24hr后取出，观察菌落形态，并作革兰氏染色。
5.4证实试验：在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1～2个进行革兰氏染色同时接种乳糖发酵管，置于36±1℃温箱内培养24±2hr，观察产气情况。乳糖发酵管产气，革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。
5.5报告：根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100ml(g)大肠菌群的最可能数。
⑷ 大肠菌群的检验是比较常见的微生物检验，但谁能给个详细的操作步骤或者图片啊，越详细越好！
在这里有比较详细的，大肠菌群显色培养基是青岛海博生物公司改良的培养基，用于食品、水、牛奶、冰激凌和肉制品中大肠菌群的快速检测。大肠菌群显蓝绿色，其它菌显黄色或无色，革兰氏阳性菌被抑制。
成份 (g/L)
特殊营养物质 47.55
显色剂 0.35
琼脂 13.0
pH 7.0-7.2 25 ℃
此配方可以进行改良或增加营养成份以获得最佳的结果。
注意
此培养基仅供实验室使用。
用法
称取本品 47.9g 加入 1000ml 蒸馏水，加热溶解并不停搅拌，煮沸不要超过 1 分钟。分装三角瓶， 116 ℃ 高压灭菌 15 分钟。取 1ml 制备好的样品液加入直径为 9cm 无菌平皿中心，倾入冷却至 45 -50 ℃ 培养基约15ml ，混匀，凝固后， 36 ± 1 ℃ 倒置培养 18 ～ 24h 。或冷却至 45-50 ℃时，倾入无菌平皿，琼脂完全凝固后，在 37 ℃的培养箱中倒置放置 1-2 小时，加入适当稀释度的样品液 1ml ，涂布于培养基上， 36 ± 1 ℃培养 18 ～ 24h 。
贮存
制备好的平板应立即使用，应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处， 保存温度 2-8 ℃，注意避光保存。
失效
干燥培养基超过保质期、结块和颜色变化都不能使用。
操作步骤
1 、按国家标准、 SN 标准、 FDA 标准或其它方法制备样品液
2 、取样品液 1ml 加入 冷却至 45-50 ℃显色培养基中混匀或 涂布于平板上
3 、 36 ± 1 ℃ 培养 18 ～ 24h ，选用有 30 ～ 200 个菌落的平板，计数平板上出现的典型大肠菌群菌落。大肠菌群典型菌落为蓝绿色，其它细菌为无色或黄色菌落。
总大肠菌群 = 蓝绿色菌落
4 、对可疑大肠菌群菌落可划线接种到营养琼脂平板上， 36 ± 1 ℃ 培养 12-16 小时，挑取单菌落做大肠菌群 BGLB 发酵试验。
质量控制
1 、外观
此干燥培养基的粉末均匀，具有良好的流动性，呈乳白色。制备好的平板呈透明无色固体培养基。
2 、微生物试验
在 36 ± 1 ℃ 培养 18 ～ 24h 小时：
质控菌株 ATCC 生长情况 菌落颜色
单增李氏菌 27853 -/+ 无色
金黄色葡萄球菌 25923 -/+ 无色
大肠杆菌 25922 +++ 蓝色
沙门氏菌 +++ 无色
大肠菌群 +++ 蓝色
方法的局限性
本培养基鉴定 大肠菌群 ，少数情况下可能会出现假阳性，但不会出现假阴性，有时可能需做其它补充试验。
典型特征
大肠菌群典型菌落为蓝绿色，其它细菌为无色或黄色菌落。
如果要采购的话在青岛海博商城里也有 http://www.hopebiol.com/shop52/
⑸ 食品卫生微生物学检验.大肠菌数测定
微生物
一、大肠菌群的检测GB4789.3-2010
第一法 大肠物宽察菌群MPN计数法 第二法 大肠菌群平板计数法
1.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤:称取35.6g溶于1000ml蒸巧拆馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10ml，121℃高压灭菌15min后备用。双料除蒸馏水外其他成分加倍。
1.2煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤：称取30g溶于1000ml蒸馏水中分装 ，经115℃15min高压灭菌备用。
1.3无菌生理盐水：称取8.5gNaCl溶于1L蒸馏水中。分装于250ml的锥形瓶中，121℃高压灭菌15min后备用
1.4结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）：称取41.6g溶于1L蒸馏水中，充分摇匀，加热煮沸2min冷却至50℃，倾注平板。
无菌 1 mol/L NaOH：称取40 g氢氧化钠溶于1 000 mL蒸馏水中，121 ℃高压灭菌15 min。
无菌 1 mol/L HCl：移取浓盐酸90 mL，用蒸馏水稀释至1 000 mL，121 ℃高压灭菌15 min。
二、大肠菌群的检测GB4789.3-2003 第一法 大肠菌群MPN计数法
2.1称取乳糖胆盐发酵培养基35.0g溶于1000ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10ml，115℃高压灭菌15min后备用。双料除蒸馏水外其他成分加倍。
2.2伊红美蓝琼脂平板：称取伊红美蓝琼脂37.5g溶于1000ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装、115℃高压灭菌15min后备用。
2.3乳糖发酵管：称取乳糖发酵培养基35.0g溶于1000ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10ml，115℃高压灭菌15min后备用
2.4无菌生理盐水：称取8.5gNaCl溶于1L蒸馏水中。分装于250ml的锥形瓶中，121℃高压灭菌15min后备用
2.5革兰氏染色按GB/T4789-2003中罩茄2规定。
⑹ 食品中大肠杆菌的检测
用大肠杆菌显色培养基，检测原理：蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化钠可维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂;十二烷基硫酸钠抑制革兰氏阳性菌;混合显色底物分别与大肠菌群和大肠杆菌所对应的酶发生特异性反应，水解底物，释放出显色基团，在淡黄色平板上大肠菌群产生橙红色的菌落，大肠杆菌产生蓝绿色的菌落。
资料出自环凯官网。