核酸检测是在实验室的条件下,通过分析致病微生物DNA或者RNA基因学的序列,进行临床病因学的确诊。此种核酸检测的方法是利用PCR扩增的方法进行检测,需要很多的步骤,最快也要6个小时才能出结果。此种检测灵敏度高、成本高,完全手工操作,工作量非常大,同时要求实验室的条件也非常高。它是目前及早确定病人是否感染病毒,以及及早发现和及早治疗最有效的检测方法新型冠状病毒核酸检测的方法,目前采用的是实时PCR荧光法这种PCR荧光法也叫聚合酶链式反应,是通过一种分子生物学的技术用来放大这种极少见的RNA病毒。可以将新冠病毒RNA片段扩增到百万倍以上,这样更容易检测出新冠病毒
2. 核酸检测是怎样检测的
众所周知,新型冠状病毒肺炎(COVID-19)是一种烈性呼吸道传染病,其病原体为新型冠状病毒。若想证实已出现的感染症状是由本病毒所引起,最准确的方法是从患者体内分离出活病毒,并进行病毒培养。
然而,此方法并不适合大面积应用,在此次疑似病例的确诊工作中,也并不适用。这是因为病毒培养所需时间较长,需要的场所条件也很高(P3级实验室),时效性远远跟不上临床需要。
而核酸检测作为病原学的检测手段之一,效率很高,一般情况下几个小时就可以知道结果。因此,在此次疫情中,临床上取得病原学证据的主要方式并不是病毒培养,而是核酸检测。
核酸是遗传信息载体,是对DNA(脱氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)的统称。病毒则主要由遗传物质和蛋白质组成。而新型冠状病毒正是一种RNA病毒,其遗传物质是单链RNA。核酸检测的原理,正是检测在被测者的咽拭子等样本中,是否存在病毒的RNA。如果存在,说明被病毒感染。那么,我们是否已经获悉了病毒的RNA呢?
△RNA与DNA(图片来源网络)
在武汉疫情初期,中国疾病预防控制中心应用宏基因组学技术,在短时间内完成该病毒的鉴定,并获取了全基因组序列。在病毒全基因组序列公布后,实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)试剂被快速研发。
随后,核酸检测试剂盒被应用于临床,并为确诊新冠肺炎提供病原学证据。那么,应用试剂盒进行核酸检测,究竟是怎样的一个过程呢?
首先,检测人员需要在试剂的帮助下,将样本中的核酸提取出来。再把已经分离出来的核酸加到核酸扩增试剂中,然后将其放到核酸扩增仪内,一般两个小时内就会有结果。
事实上,在操作步骤中,扩增是很重要的一环。扩增的意义在于能让微量的遗传信息成指数增加。只要样本中有核酸基因片段,就能用PCR法加以放大,从而更清晰地与病毒全基因组序列实现比对。
实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法已在临床实验室应用多年,检测体系成熟,具有特异性强、灵敏度高、检测周期短和可定量检测的优点,而且还能对病毒感染程度和治疗效果进行动态监测。
中日友好医院呼吸与危重症医学科主任医师陈欣在记者采访中介绍道:核酸检测十分敏感,只要在被检者的分泌物样本中找到一部分病毒的核酸,就可以通过RT-PCR扩增的方式,整合成序列。
"虽然不确定核酸是否来自于活病毒,但对于有呼吸道感染症状的患者或疑似患者来说,如果其咽拭子有这种核酸,一般认为来源于活病毒的一部分,间接证实其体内存在着病毒的繁殖和感染。" 陈欣告诉记者。
核酸检测容易出现"假阴性"
虽然核酸检测有灵敏度高、检测周期短等优点,但也存在着一定的弊端。不同于从人体内直接分离出活病毒的方式,核酸检测采用的是一种间接的方式,有可能造成假阴性。
因为试剂盒存在最低检测限的问题,所以只有当采到的样本中,病毒的含量达到一定程度时才能检测出来。少数情况下,可能康复者并未康复,但由于样本中病毒载量低,故康复者核酸检测的结果呈阴性,也就是我们常说的"假阴性"。
因此,在《新型冠状病毒肺炎诊疗标准(试行第七版)》中,出院标准之一为连续两次痰、鼻咽拭子等呼吸道标本核酸检测阴性(釆样时间至少间隔24小时)。
而之所以选取呼吸道标本进行核酸检测,是因为新冠肺炎属于呼吸道传染病,故而优先考虑从呼吸道的分泌物中取得标本。呼吸道又分为上呼吸道和下呼吸道,前者主要包括鼻、咽、喉;后者主要包括气管、主支气管及肺内各级支气管。
相应地,现在对疑似患者检测病毒核酸,标本的采集一般有两大类,上呼吸道标本和下呼吸道标本。
上呼吸道标本主要包括口咽拭子、鼻咽拭子(NPS)、鼻咽吸取物(NPA);下呼吸道标本主要包括痰液、气管吸取物、支气管肺泡灌洗液(BALF)等。
3. 新冠病毒检测实验室的生物安全如何控制
说我安全控制就是防感染做好防护消毒洗手,戴口罩。
4. 核酸检测有哪些方法
新冠病毒核酸检测怎么做?
新型冠状病毒肺炎疫情期间,大家在做好个人防护的同时,对于疫情动态也十分关注。原本冬春交际时节就是普通感冒和流感高发的时间段,而控制疫情最重要的手段,就是从众多呼吸道患者中筛选出真正的新冠肺炎患者。那么,新冠肺炎是怎么诊断的呢?
新冠肺炎怎么诊断?
首先,新冠肺炎患者通常是有症状的,尽管有一些患者的症状很轻微。做了血常规以及胸部影像学检查,就可以提示是否有新冠病毒肺炎的可能性。当然,新冠肺炎的确诊还是要靠新冠病毒核酸的检测。不久之后还可能出现血液抗体的检测,以帮助确诊新冠肺炎。
新冠病毒核酸检测怎么做?
新型冠状病毒的核酸检测的取样方法既不需要开刀也不需要打针,只要“轻轻一抹”。
到了发热门诊或者是相应的检查室,医生会让病人张开嘴,用一个像棉签一样的拭子去擦拭扁桃体和咽隐窝附近的分泌物,也可以通过鼻腔取鼻咽后部的分泌物,然后放到试管里面,再交给检验科去做相应的病毒核酸的检查。
X光胸片是否能作为新冠肺炎的诊断手段呢?
其实X光胸片也是可以提示新冠病毒肺炎的。随着积累的病例的总结,可以发现新冠病毒肺炎在胸片上面的影像很淡薄,分布是周边的。因此在分布较好的胸片上也是可以看到的。
对于新冠肺炎最好、最敏感的影像学检查手段就是胸部CT。在胸部CT每个扫描后的层面,可以看到胸片看不到的某些角度以及更淡薄的影子,这样就可以早期提示患者可能患有病毒性肺炎。一旦出现这些特征,就要结合核酸的检测,对病人进行新冠病毒肺炎的确诊。
查血能否确诊新型冠状病毒肺炎呢?
有研究证明,新型冠状病毒肺炎患者的血液中查到病毒的核酸的比例较少,只有15%到20%。机体对新冠病毒入侵后,机体会产生特异性抗体,新冠病毒抗体IgM、IgG是可以在血液中检测到的。但是,病人感染新型冠状病毒后5天后才会先出现IgM,随后才会出现IgG。
目前,我们国家的科研人员做了大量的工作。对于新冠病毒血液检测的方面,现在我国的科研人员也在集中精力,加快提高检测的技术的优化,以提高它的特异性和敏感性。
5. 迄今为止,我国检测新冠病毒有哪些方法
1、荧光PCR法。PCR法指的是聚合酶链式反应,能将微量的DNA大幅增加。荧光PCR检测的原理为——随着PCR的进行,反应产物不断累积,荧光信号强度也等比例增加。最后通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。
2、联合探针锚定聚合测序法。这种检测主要是用专门的仪器检测测序载片上DNA纳米球携带的基因序列。这种检测的灵敏度高,不容易漏诊,但结果也容易受多种因素的影响而不准。
3、恒温扩增芯片法。检测原理是基于核酸之间的互补结合特性开发的一种检测方式,能够用于定性或定量测量存在于生物体内的核酸。
4、病毒抗体检测。抗体检测试剂是检测血清中由病毒进入人体后刺激人体产生的IgM或IgG抗体,IgM抗体出现较早,IgG抗体出现较晚。
5、胶体金法。胶体金法是用胶体金试纸进行检测,也就是常说的快速检测试纸。这种试纸经过特殊标记,上面有孔,用于滴入受检者的血清样本。
6、磁微粒化学发光法。化学发光法是一种高度敏感的免疫检测,凡具有抗原性的物质都可以用这种方法测定。
6. pcr核酸检测是什么意思方法及步骤
核酸检测是目前全球用来对是否携带新冠病毒进行确定的一种有效方式。目前大家主要使用的是鼻拭子、咽拭子以及抗体血清lgm进行参考。但是根据最新的新加坡入境要求是进行pcr核酸检测,那么pcr核酸检测是什么意思呢?
PCR的意思是聚合酶链式反应,能够用来扩增DNA,从而将微量的DNA扩增到能够检测的程度。有些病毒的核酸是DNA,需要采用这个方法进行检测。所以PCR并不是进行的检查,而是检测DNA的一种方法。比如乙肝病毒DNA定量,用的就是这一种方法。检查DNA的目的,一方面是可以诊断疾病,如果连病原体的DNA都能检测到,就说明感染了这种病原体;另一方面是判断病毒复制的多少,从而判断病情严重程度或者治疗效果。
进行核酸检验,需要经过取样、留样、留存、核酸提取、上机检测五个步骤。
核酸检测的第一步就是采集人体分泌物,用鼻试子或咽试子擦拭鼻腔或咽后壁及双侧咽扁桃体处。
第二步医务人员进行留样,将试子头浸入细胞保存液中,折断尾部后立即旋紧管盖。
第三部要将样本放入密闭袋中,保存好并及时送检。
第四步将样本送进实验室,提取核酸。
第五步,将提取物进行荧光PCR扩增反应。
核酸(nucleicacid),是一类由核苷酸(nucleotide)构成的生物大分子,分为核糖核酸(ribonucleic
acid,宴前者RNA)和脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic
acid,DNA)两类,其中RNA多为单链结构,DNA多为双链结构。除朊病毒(prion)外,核酸是构成生命所必需的生物大分子,其主要作用是构成生命体的遗传信息载体,除此之外,还有部分核酸可作为及参与构成具有生物活性的酶分子或晌薯其他分子机器
。
核酸检测顾名思义就是针对核酸开展检测。
核酸检测有何独特的优势呢?为何能作为新冠病毒确诊的“金标准”呢?
其实每一种检测方法都有其擅长的应用场景。以病毒检测为例,通常的免疫学检测方法(胶体金、ELISA、化学发光等)的检测对象是病毒的抗原或抗体,相当于“侧面描绘”。由于从感染到可检测存在一个时间窗口期,因此免疫学检测方法一般不合适作为早期诊断。
1、假阳性
假阳性通常比较少。一般实验室人员操作不当会导致样本间交叉污染或扩增产物的遗留污染,该种情况下可能会导致假阳性。
不过假阳性可以通过严格控制检测流程、以及执行若干个阴性样本随机参与检测的策略而有效规避。
2、假阴性
在这里需要说明的是,PCR检测的假阴性与临床的假阴性实际上不是一个概念。
以网络上激烈讨论的新冠病毒的诊断为例,临床假阴性是指临床症状和影像学高度疑似被感染、但PCR检测却多次或始终为阴性的情况;而PCR检测假阴性是指所采集样本中存在足够量的新型冠状病毒但却没有检出悔简的情况。
避免核酸检测的假阴性,主要需要解决:(1)被感染者的细胞中有足量的病毒、(2)采集样本中可以采集到含有病毒的细胞、以及(3)检测出样本中的病毒这三个环节。
其中PCR试剂盒的技术参数优劣主要影响第三个检测环节。
仅针对第三个检测环节,若样本中病毒数量低于一个程度(低于最低检测限),PCR试剂盒就无法检出。从这个角度看,PCR检测的假阴性是无法完全避免的。这也是为何需要补充开发病毒的特异抗体检测的原因所在。
实验室建设坚持高标准、严要求,严格按照国家《医学生物安全二级实验室建筑技术标准》进行建设,建设面积100余平方米,分为试剂贮存和准备区、标本制备与提取区、扩增和产物分析区三个区域。实验室内配置全自动核酸提取仪、实时荧光定量PCR仪、扩增仪、高压灭菌器、B2型生物安全柜、超净工作台、超低温冰箱等仪器,消毒和防护设施齐全,符合相关生物实验室安全标准。为防止实验室外的区域被污染,实验室的气压均为负压,有效降低感染风险。此外,实验室配备了污水处理系统,达到了废液的合理排放和处理。
*目前我国多地区建设了PCR核酸检测实验室用以进行新冠病毒核酸检测