① 细菌内毒素检测鲎试剂实验方法有哪些
鲎试剂法就是细菌内毒素检测方法,它包括凝胶法和光度测定法。
凝胶法又分为限度实验和半定量实验。
光度测定法是定量实验,分为浊度法和显色法,其中浊度法又分为动态浊度法和终点浊度法,显色法又分为动态显色法和终点显色法还有重组鲎试剂法
② 细菌内毒素的检测
细菌内毒素是革兰氏阴性菌的细胞壁成分,当细菌死亡或自溶后便会释放出内毒素。因此,细菌内毒素广泛存在于自然界中。如自来水中含内毒素的量为1至100EU/ml。当内毒素通过消化道进入人体时并不产生危害,但内毒素通过注射等方式进入血液时则会引起不同的疾病。内毒素小量入血后被肝脏枯否细胞灭活,不造成机体损害。内毒素大量进入血液就会引起发热反应—“热原反应”。因此,生物制品类、注射用药剂、化学药品类、放射性药物、抗生素类、疫苗类、透析液等制剂以及医疗器材类(如一次性注射器,植入性生物材料)必须经过细菌内毒素检测试验合格后才能使用。由于家兔对热原的反应与人基本相似,所以半个世纪以来用家兔来检测热原,为保障药品质量和用药安全发挥了重要作用。
1956年美国人Bang发现美洲鲎血液遇革兰氏阴性菌时会产生凝胶。其后Levin和Bang又搞清楚微量革兰氏阴性菌内毒素也可以引起凝胶反应,从而创立了鲎试剂检测法。由于鲎试剂法简单﹑快速﹑灵敏﹑准确,已广泛用于临床、制药工业药品检验等方面。
在美国,鲎试验被称作为“细菌内毒素试验(Bacterial Endotoxin Test)收载于1980年20版美国药典。随后英、德、意、日以及中国相继在药典中收载了这一检查法。此后鲎试验逐渐替代家兔热原试验,但由于部分药品由于自身特殊性无法通过稀释法消除干扰,因此鲎试验还无法完全取代家兔热原试验。2005年版中国药典规定168个品种进行细菌内毒素检查法,并收录了2种细菌内毒素检查法:包括凝胶法和光度测定法两种方法。前者利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素,后者包括浊度法和显色基质(比色)法,系分别利用鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化及产生的凝固酶使特定底物释放出呈色团的多少来定量测定内毒素。比色法又可分为终点显(比)色法和动态比色法。该方法灵敏度、精密度高。国内如厦门鲎试剂厂早在05年即有显色基质(终点显色)鲎试剂盒上市。
③ 内毒素的检测
由于内毒素是细菌死亡裂解或自溶引起的,因此环境中大量存在内毒素。当内毒素通过机体消化道等方式时并无危害,少量通过注射等方式进入血液后被肝脏枯否细胞灭活,不造成机体损害。内毒素大量进入血液就会引起发热反应—“热原反应”。内毒素大量进入、集聚于血液中,超过机体各自卫系统的清除能力,则可导致不同程度的内毒素血症。对于易于引入内毒素的药品医疗器械等必须通过内毒素检测。内毒素的检测常用家兔热原法和鲎试验法。中国药典收录的细菌内毒素检查法包括2种方法:凝胶法和光度法,使用鲎试剂来定性或定量检测内毒素。
④ 室内甲醛检测方法哪种精准
酚试剂分光光度法检测甲醛,数据的高低、精准与否除了与密闭时间长短、检测环境有直接关系外,还与如下7个因素有关系。
1、检测环境因素。GB/T18883-2002要求夏冬两个极端季节温湿度条件分别为,夏季温度保持22-28℃,相对湿度40-80%RH;冬季温度保持16-24℃,相对湿度30-60%RH。所以检测时一定要关注现场实际环境,尽最大努力让室内环境达到或者接近规范所要求的检测条件。
2、酚试剂因素。检测所用的酚试剂主要成分为:盐酸3-甲基苯并瞻唑胺,为采样时吸收甲醛的主要耗材,无论是单点位的配置还是多点位的配置,其配比的浓度会绝对影响数值的精准。所以一定要严格按照实验室要求的浓度进行配比。
3、酚试剂配比的纯水因素。酚试剂为粉末状,用于采样时需用纯水稀释至固定单位液体使用,所以水的纯净度也至关重要,自来水、瓶装水、桶装水多少都会含有部分杂质或添加物,实验室一般都用蒸馏水做为稀释液。
4、大气采样仪的因素。大气采样仪为采集甲醛的主要设备,流速的稳定性决定采集10L大气量的精准性,所以采样流速及时间的设定会决定最终的采样空气量,一般采集甲醛流速设定0.5L/min,时间设定为20min。
5、显色液的因素。显色液的主要成分为硫酸高铁铵溶液,与采样后的生成物嗪(甲醛与酚试剂反应生成物)发生反应生成蓝绿色化合物,这种颜色的化合物是通过分光光度计最终得到甲醛数值的主要依据,所以显色液的浓度配比及滴入嗪中显色液的量,决定着是否能够完全反应呈现最精准的蓝绿色。
6、比色皿的因素。比色皿为分光光度计比色分析所用的器皿,透光度决定着光度计分析数据的精准性,考虑到玻璃的易磨损、透光度等问题,一般比色皿都选用石英材质。
7、分光光度计的因素。分光光度计是最终测定甲醛含量的主要仪器,充当判官角色,嗪与酚试剂的氧化产物反应生成蓝绿色化合物,在波长630nm处用分光光度法测定甲醛数值,一般测得最大数值1.2mg/m³,最小数值为0.01mg/m³。因光度计涉及检测领域较广,检测不同物质会用到不同波段,所以每年需进行校验才能确保波长稳定数据更精准。
⑤ 内毒素测定的测定方法
1,凝胶法
2,动态浊度法
3,终点显色法
4,动态显色法
凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。凝胶法鲎试剂常见规格为0.1ml/支或0.5ml/支或者更大装量,使用时应加除热原水(细菌内毒素检查用水)复溶后使用。凝胶法是通过观察有无凝胶形成作为反应的终点。此法操作比较简单,经济,不需要专用测定设备,可以进行定性或半定量测定。
动态浊度法、终点浊度法、动态显色法、终点显色法,这四种方法都是定量检测内毒素的。