1. 检测细胞生物学活性有哪些方法
根据每细胞定重量设计用于单细胞、细胞及丝状体微物测定定体积品通离或滤菌体离经洗涤再离直接称重求湿重丝状体微物滤用滤纸吸菌丝间自由水再称重求湿重论细菌品丝状菌品放已知重量平皿或烧杯内于一05℃烘干至恒重取放入干燥器内冷却再称量求微物干重 要测定固体培养基放线菌或丝状真菌先加热至50℃使琼脂熔化滤菌丝体再用50℃理盐水洗涤菌丝按述求菌丝体湿重或干重 除干重、湿重反映细胞物质重量外通测定细胞蛋白质或DNA含量反映细胞物质量蛋白质细胞主要含量比较稳定其氮蛋白质重要组元素定体积品离细胞洗涤按凯氏定氮测总氮量蛋白质含氮量一陆％细菌蛋白质含量占细菌固形物50％吧0％般陆5％代表些细菌则占一三％一四％种变化由菌龄培养条件同所产总含氮量与蛋白质总量间关系按列公式计算： 蛋白质总量＝含氮量×陆.二5 核酸DNA微物重要遗传物质每细菌DNA含量相恒定平均吧.四×`一0^(-5)`NG定体积细菌悬液所含细菌提取DNA求DNA含量再计算定体积细菌悬液所含细菌总
2. 细胞免疫功能检测常用有哪几种方法
细胞免疫（CMⅠ）是由多种细胞相互作用的结果。免疫细胞间相互作用导致多种细胞因子的释放。因此细胞功能测定不仅涉及T细胞的数量和功能与包括各类因子活性测定，因此评价机体的细胞免疫功能不仅程序复杂，且很难标准化。
一、迟发型过敏反应的体外检测方法
皮肤试验和接触性过敏的诱发是检测迟发型过敏反应（DTH）的两种常用方法。皮肤试验中诱发对曾经使病人致敏的抗原的再次应答，而接触性过敏是测试受者对从未接触过的物质发生致敏的能力。
1．皮肤试验 用皮肤试验诊断DTH，常用的抗原有结核菌纯蛋白衍生物（PPD）、腮腺炎病毒、念珠菌素等，在人类试验时在前臂皮内注射少量可溶性抗原，24～48小后，测量红肿硬结的大小，硬结直径大于10mm即被看作为阳性。表明受试者对该病原菌有了一定的细胞免疫能力，若皮试无反应，可用更高浓度的抗原重复试验，若仍无反应即为阴性，需排除皮试技术误差，也可能受试者从未接触过此抗原，也可能由于细胞免疫功能缺损，或由于细胞免疫功能缺损，或由于严重感染（麻疹、慢性播散性结核）造成的无反应性。
2．接触性过敏常应用低分子量化合物如二硝基氯苯（DNCB）诱生接触性过敏。化合物与皮肤蛋白质结合而导至DTH反应。在动物试验时，初次皮肤上涂抹DNCB后间隔7～10天再激发刺激，则皮肤出现即为阳性。此试验人类已不使用。
二、细胞免疫的体外检测方法
体外检测淋巴细胞的数量和功能，最易采集的是血标本，首先需分离或纯化淋巴细胞，一般使用萄聚糖-泛影葡胺配成比重为1.077的淋巴细胞分层液，当将血液重叠于淋巴细胞分层液之上离心时，由于红细胞（1.092）、多形核白细胞（1.090）、淋巴细胞（1.070）的比重不同而相互分开。淋巴细胞和单核细胞在血浆和分层液交界处形成一薄层。仔细分出这一薄层的细胞，其中淋巴细胞占80%，单核细胞占20%，淋巴细胞中T细胞占80%，B细胞占4%～10%，其作为非DT、非B细胞。
1．T细胞计数
（1）E花环法：人类T细胞表面有SRBC受体（CD2）能与SRBC结合形成玫瑰花环样结构，将经分层液分离现的RBM悬液与SRBC在含有血清的平衡盐水中混合，经37℃培养5～10分钟放4℃过夜，取细胞悬计数，外周血淋巴细胞中约70%～80%淋巴细胞结成花环即为T细胞。目前此方法已用来分离T细胞，而不用做T细胞计数。
（2）用单克隆抗体计数T细胞：将人的PBM分成三等份，分别用小鼠抗人CD3、CD4和CD8的单克隆抗体作第一抗体与细胞结合，再用FITC标记的兔抗小鼠IgG抗体作第二抗体进行间接免疫荧光染色，在荧光显微镜下或流式细胞仪检测结果，在PBM中被CD3抗体染上荧光的细胞称为CD3 细胞即总T细胞。正常人在PBM中T细胞占70%～80%。正常人的CD4 细胞和CD8 细胞之和应与CD3 细胞数一致。CD4 细胞与CD8 细胞的比值正常人约为2/1而艾滋病患者则比值小于1.7。
2．T细胞活化试验 T细胞能被非特异的物质称为有丝分裂原所激活而向淋巴母细胞转化。T细胞转化过程可伴随有DNA、RNA、蛋白质的合成增加，最图导致细胞分裂。在光学显微镜下可计数转化后的淋巴细胞数，也可用氚标记的胸腺嘧啶核苷（3HTdR）掺入正在分裂的淋巴细胞，用液闪测定仪检查掺入正在分裂的淋巴细胞，用液测量仪检查掺入的3H-TdR的多少确定淋巴细胞转化率。最近有一种不用同位素，又可用仪器测量的淋巴细胞增殖反应的检查法，称为MTT检测法，MTT是一种甲氮唑盐，它是细胞线粒体脱氢酶的底物，细胞内的酶可将MTT分解产生蓝黑色甲（fromazan）产物。该产物的多少与活性细胞数正相关。结果可用酶标检测仪（595mm）测量汇丰银行密度，做为MTT法的检查指标。此法的结果与3H-TdR掺入法平行，并能反应试验中的活细胞数。
3．细胞毒试验 TC细胞、NK细胞、LAK细胞、TIL细胞对其靶细胞有直接的细胞毒（杀伤）作用。常用的栓测细胞毒效应的方法是51Cr-Na2Cro4盐水溶液与靶细胞胞混合，于37℃培养1小时左右，51Cr即可进入靶细胞，与胞浆蛋白结合，洗去游离的51Cr后，即可得到51Cr标记的靶细胞，将待检细胞毒性的细胞与51Cr标记的靶细胞混合（比例约为50：1或100：1）靶细胞被杀伤越多，释放到上清液中的液游离的51Cr越多，且不能被其他细胞吸收。用γ射线测量仪检测上清液中的cpm值，即可计算出待检细胞杀伤活性的高低。
细胞毒试验检测Tc细胞效应功能是否健全，及经IgG介导的ADCC效应，或NK细胞在抗肿瘤免疫中的作用是有意义的。
4．混合淋巴细胞的反应（MIR） 是体外研究T细胞的较好的方法，双向MLR常被用来筛选骨髓移植的供体。来自不同供体的淋巴细胞分别与病人的淋巴细胞混合培养4～5天，在最后8小时掺入51TdR掺入法测T细胞的反应性。或用细胞毒法观察受刺激的T细胞与活的靶细胞混合（靶细胞来自与刺激细胞相同的个体）如果T细胞受刺激后产生了细胞毒T细胞，可杀死活的细胞，根据靶细胞释放51Cr的多少算出T细胞移动抑制因子）和LIF（白细胞移动抑制因子）来评估细胞免疫功能。近年来应用测定IL-2的免疫酶技术，操作简单，并能定量以取代了MIF和LIF的测定。单个核细胞与分裂原一起培养24小时，然后测定清液中的IL-2活性。在细胞免疫功能缺损时，特别是AIDS病人，IL-2分泌明显降低。而有些疾病，如多发性硬化、类风湿关节炎、移植排斥反应等病人体内血清中IL-2水平升高，表明病人T细胞活性增高。发生移植排斥反应的病人尿中IL-2也可升高。
也可用酶联免疫吸附试验测定各种体液中活化的T细胞脱落的IL-2受体（CD25），一般来说IL-2的水平和IL-2受体水平是平行的，IL-2和IL-2受体的检测可用于对某些疾病的监测，如移杆排斥、自身免疫病以及接受免疫抑制治疗的病人。
对体外培养的细胞进行细胞因子产生能力检测是检查细胞培养上清液中细胞因子的生物活性或抗原性。现已可用核酸杂交技术，即从组织中或细胞中提取RNA，与同位素或酶标记的该种细胞因子的cDNA探针作分子杂交试验，即印迹（dot blotting）或Northern印迹，若查出有某种因子的mRNA存在，即说明该细胞在所处培养条件下有产生某种细胞因子的能力。
3. 细胞因子的检测有哪些常用的方法
一、免疫学检测方法包括 1.ELISA检测方法 2.RIA检测方法 3.免疫荧光技术
二、生物学检测方法包括体内和体外两种方法。体内法采用动物模型来检测细胞因子的含量,反映的是动物体内的生物学活性,参考价值大,但操作比较繁琐、成本高、影响因素多、实验周期长,故很少用。体外法主要是利用来源于白血病病人或实验性白血病动物模型的细胞株,根据细胞因子与细胞株之间作用原理不同又分为不同的检测方法。
三、分子生物学检测方法主要包括 1.Northern杂交法 2.反转录PCR(RT/PCR)法。
4. 测定微生物细胞活性的方法都有哪些
根据每个细胞有一定的重量而设计的。它可以用于单细胞、多细胞以及丝状体微生物生长的测定。将一定体积的样品通过离心或过滤将菌体分离出来，经洗涤，再离心后直接称重，求出湿重，如果是丝状体微生物，过滤后用滤纸吸去菌丝之间的自由水，再称重求出湿重。不论是细菌样品还是丝状菌样品，可以将它们放在已知重量的平皿或烧杯内，于105℃烘干至恒重，取出放入干燥器内冷却，再称量，求出微生物干重。
如果要测定固体培养基上生长的放线菌或丝状真菌，可先加热至50℃，使琼脂熔化，过滤得菌丝体，再用50℃的生理盐水洗涤菌丝，然后按上述方法求出菌丝体的湿重或干重。
除了干重、湿重反映细胞物质重量外，还可以通过测定细胞中蛋白质或DNA的含量反映细胞物质的量。蛋白质是细胞的主要成分，含量也比较稳定，其中氮是蛋白质的重要组成元素。从一定体积的样品中分离出细胞，洗涤后，按凯氏定氮法测出总氮量。蛋白质含氮量为16％，细菌中蛋白质含量占细菌固形物的50％一80％，一般以65％为代表，有些细菌则只占13％一14％，这种变化是由菌龄和培养条件不同所产生的。因此总含氮量与蛋白质总量之间的关系可按下列公式计算：
蛋白质总量＝含氮量×6.25
核酸DNA是微生物的重要遗传物质，每个细菌的DNA含量相当恒定，平均为8.4×`10^(-5)`NG。因此从一定体积的细菌悬液中所含的细菌中提取DNA，求得DNA含量，再计算出这一定体积的细菌悬液所含的细菌总数。
5. 微生物细胞生长的测定方法
微生物生长的测定方法有多种，根据研究对象或目的选择。(一)微生物细胞数目的检测方法1．总细胞计数法 显微镜直接记数法和比浊法(1)血球计数板法 血球汁数板中央有一个体积一定的计数室( 0.1mm3)。将菌悬液或孢子悬液在显微镜下计数，然后再按一定公式计算出细菌总数。 (2)涂片计数法 将一定体积(0.1ml)的样品，均匀地涂在载片的一定面积内(1cm2)。在显微镜下计算细胞数量，推算1cm2所含细胞数目。（3）比浊法：菌体细胞培养液混浊，在一定范围内，菌体数量与浑浊成正比，故可通过分光光度计或比色计求出浑浊度，通过与标准曲线对比，求出样品中菌液浓度，算出个体数。特点：所得结果包括死菌和活菌。2. 活菌计数法（平板菌落记数法）：是通过测定样品在培养基上形成的菌落数来间接确定其活菌数的方法．故又称平板计数法。特点：计算的结果是活菌落。注意：样品稀释度。一个活细胞形成一个菌落。（1）涂布平板法 用灭菌的涂布器将一定体积(不大于0.1ml)的适当稀释度的菌液涂布在琼脂培养基的表面，然后保温培养有到菌落出现，记录菌落的数目并换算成每毫升试样中的活细胞数量。（2）倒平板法 将样品稀释到一定浓度，取一定体积(0.1—1ml)倒入冷却至45℃的固体培养基混合，制成平板，培养后，出现菌落，由菌落数推算出的菌总数。3 滤膜过滤法：样品同过微孔滤膜后，细菌收集在滤膜上，然后将滤膜放在培养基中培养，通过菌落计数求出样品活菌落。 (二)微生物生长量和生理指标的测定方法测定微生物生长量及相关的生理指标，常用以下方法：1．湿重法：将单位体积微生物培养液离心，收集沉淀物，然后再称重。2．干重法：将离心得到的细胞沉淀物，置于100---105℃的烘箱中干燥过夜除去水分，然后再称重。特点：适合与菌体浓度高的样品。表示菌体生长量。3、测定细胞内菌种化学成分：方法难，操做困难，但较准确。细胞内菌种化学成分多少（∝），反映群体中菌体数量的多少。（1） 测定含氮量：N在细胞内稳定，测定总N量，粗蛋白=N*6.25g。（2） 测定DNA：微生物细胞DNA含量稳定，采用荧光指示剂或染色剂与菌体DNA作用荧光比色或分光光度法测得DNA的含量。（3） 其他生理指标：如测定碳、磷、RNA、ATP、DAP(二氨基庚二酸)的含量等。 (二)丝状微生物菌丝长度的测定方法 对于丝状微生物。特别是丝状真菌，通常是通过测定菌丝的长度变化来反映它们的生长速率。方法有： 1．培养基表面菌体生长速率测定法 主要测定一定时间内在琼脂培养基表面的菌落直径的增加值。 2．培养料中菌体速率测定法主要测定一定时间内在固体培养料中菌丝体向前延伸的距离。如：栽培食用菌的培养料。 3．单个菌丝顶端生长速率测定法 在显微镜下借助目镜测微尺测定在一定时间内单个菌丝的伸长长度。
6. 常用的细胞因子检测方法有哪些
（1）生物学检测法：又称生物活性检测，是根据细胞因子特定的生物活性而设计的检测法。生物活性检测法又可分为： 1、细胞增殖法； 2、靶细胞杀伤法； 3、细胞因子诱导的产物分析法； 4、细胞病变抑制法。
（2）免疫学检测法：细胞因子均为蛋白或多肽，具有较强的抗原性，可利用抗原抗体特异性反应的特性，用免疫学技术定量检测细胞因子，常用的方法包括ELlSA、RlA及免疫印迹法
（3）分子生物学方法：目前公认的细胞因子的基因均已克隆化，较容易地得到某一细胞因子cDNA探针或根据已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探针。常使用斑点杂交、Northernblot、逆转录PCR，细胞或组织原位杂交等。具有灵敏、快速等优点，甚至从l～10个细胞中就可检出其中的特异mRNA