水飞蓟素的检测方法

Ⅰ 水飞蓟提取物的质量规格

1. 主要产品规格标准 (见表7-4)
表7-4 水飞蓟提取物主要产品规格标准
规格 1 2 3
水飞蓟素 (HPLC) ≥50.0%
水飞蓟素 (UV) ≥80.0% ≥70.0%
组份
其它指标 Silibilin/Silymarin≥22/5
硫酸灰分≤2.0% Silibinin A+B≥30%
2.商品规格举例
Milk Thistle Powdered Extract(80%)
(1) Manufacturing data
Botanical name: Silybum marianus GAERTNER
Part of plant used: Fruit without pappus
Solvent for Extraction: Acetone
Carrier: Maltodextrin
Ratio of botanical to native extract: 20～35:1
(2) Quality data
1) Physical and chemical data
Appearance: oily extract
Color: Brown to brownish
Odor: Characteristic
Taste: Characteristic
Solubility: Dissolve in Ethanol
Particle Size: Not less than 95% thru 80 mesh
Loss on drying (2 h at 105C):Not more than 5%
Ash: NMT 10.0%
Identification by TLC:Complies to standard; Method: Corresponding to DAB 10～2. Suppl.
Quantitative determination: Not less than 80% Silymarin by HPLC
2) Safety Data
Microorganism:
Aerobic Bacteria: Not more than 5000 cfu/g (Total plate count)
Molds and Yeasts: Not more than 100 cfu/g (Total plate count)
Pseudomonas aeruginosa / Presence:None detected in 1 g
Staphylococcus aureus / Presence:None detected in 1 g
Escherichia coli / Presence:None detected in 1 g
Salmonella Spp / Presence:None detected in 1 g
Other hazardous substance:
Resies of pesticides, radioactivity and aflatoxins:The raw material to be extracted meets thelimits forcontrolled substances
Resial solvent (by GC) :Less than 0.05% acetone
(3) Package/Storage
Storage:Cool,dry area; well closed container
Shelf Life: 24 months unopened
(4) Remark
Health hazards: See Material-Safety-Data-Sheet

Ⅱ 求解释 DAB10是啥意思 我公司是做植物提取物的 这个貌似和水飞蓟素有关系

德国药典第10版，是一个检测标准。 这个不是和什么有关，是对药品规格的检测方法和指标，每个国家不一样。通过DAB10检测或者说满足DAB10就是说这个药品在这种检测方法下指标是合格的。 网上找了一下没有找到药典原文，估计需要购买。

Ⅲ 水飞蓟提取物的分析方法

1. 分光光度法测定水飞蓟素的含量
精密称取本品粉末适量, 置50ml容量瓶中, 加入无水乙醇40ml溶解后, 定容, 摇匀, 精密吸取5ml置100ml容量瓶中, 加入无水乙醇至刻度, 摇匀, 同时做一空白对照。紫外分光光度计在288nm处测定吸光度。按下式计算含量:
水飞蓟素含量%= (以水飞蓟宾计)×100%
A: 样品吸光值; M: 取样量 (g); V: 样品稀释倍数; 470: 水飞蓟宾的吸光系数。
注:本方法源于辽宁省地方标准,适用于HPLC法测定值不低于60%的水飞蓟提取物的含量测定。
2. 分光光度法测定水飞蓟素的含量
精密称取提取物精制品约250mg, 置50ml容量瓶中, 加入适量甲醇溶解后, 定容至50ml, 摇匀, 溶液即为被测液。
取1ml被测液于10ml容量瓶中, 加入2ml 2, 4-二硝基苯肼试剂, 摇匀, 塞上塞子,在50℃时加热50分钟, 冷却, 加入氢氧化钾的甲醇液至刻度, 摇匀, 静置2分钟。取1ml此液于离心试管中, 加入20ml甲醇, 摇匀, 离心。将红棕色上清液倒入50ml的容量瓶中, 残渣再加入20ml甲醇离心, 合并上清液, 用甲醇稀释至刻度。
精密吸取1ml甲醇置10ml容量瓶中, 从“加入2ml 2, 4-二硝基苯肼试剂”起同法操作, 作为空白对照。
以空白溶液为对照,在490nm处测定被测浓度的吸光度A值,以E=537计算水飞蓟素的含量。
3.分光光度法测定水飞蓟素的含量(德国药典DAB-9版1997)
标准溶液的制备:精密称取水飞蓟宾标准品25mg,置于5ml容量瓶,加甲醇溶解并定容至刻度,即得浓度为5mg/ml的标准品溶液。
样品溶液的制备:称250mg的水飞蓟素至50ml容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,备用。
显色溶液的制备:2,4-二硝基苯肼(2,4-dinitrophenylhydrazine)试液:称此试剂500mg置于50ml容量瓶中,加H2SO41ml,用甲醇稀释至刻度即得。
10%KOH溶液:称10gKOH置于100ml容量瓶中。加水30ml,用甲醇稀释至刻度即得。
测定法:取标准溶液、样品溶液、甲醇各1 ml分别置10ml容量瓶中,并分别加入2ml的2, 4二硝基苯肼试液,三个容量瓶在水浴中50～55℃下反应50min,用自来水快速冷却后,加KOH溶液至刻度,分别吸取上述三种反应后的溶液1 ml于10ml的具塞试管中,加甲醇10ml混匀,离心10min,上清液分别倾于50ml容量瓶中,离心沉淀再加甲醇10ml混匀,离心,上清液再分别倾于同一50ml容量瓶中,并重复一次,将三个50ml容量瓶均加甲醇至刻度。摇匀,于紫外分光光度计490nm处测定吸光度值。
上式的计算是基于取样操作严格按上述要求进行称量的。如果称量不能精确达到文中要求,则按如下公式计算:
A1:样品吸光值;A2:标准品吸光值;W1:样品取样量(g);W2:标准品取样量(g);V1:样品稀释体积;V2:标准品稀释体积
4.分光光度法测定水飞蓟素的含量(美国药典)
试液:将约1.0g的2、4-二硝基苯肼(2,4-dinitrophenylhydrazine),真空干燥8小时,精确称重,溶于2ml的硫酸中,临时配置该溶液。
标准溶液的制备:将精确称重的USP水飞蓟宾标准品溶于甲醇中,制成约2.0mg/ml浓度的溶液。
样品液制备:将约5.0g的水飞蓟精细粉末精确称重,置于一个提取套管,用小棉球塞住。将提取套管与连有连续提取装置、含150ml的己烷250ml的圆底烧瓶连接,套管上加热4小时,然后,将含己烷的圆底烧瓶与提取装置分离,弃去溶剂,干燥去除残余溶剂。再将提取套管与连有可连续热提取装置、含100ml乙酸乙酯的250ml的圆底烧瓶连接,套管上加热回流8小时,减压条件下,40℃旋转蒸发仪上挥发溶剂至干。将残余物用25ml甲醇溶解,定量过滤至一50ml的烧瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀。(注:此制备方法适用于药材)
检测: 分别将1.0ml的标准制备液和样品制备液加入2个琥珀色的10ml烧瓶中, 准确标记, 分别加入2ml的试液, 混合。塞上瓶塞, 保持在50±1℃, 缓慢搅拌50分钟。冷却, 用甲醇稀释溶液至刻度, 混合。分别取上述溶液2.0ml, 移至一100ml烧瓶中, 并加入3.0ml的羟化四氢铵甲醇溶液 (25%) [注意: 羟化四氢铵临时配制, 透明、无色溶液]。用甲醇稀释至刻度, 使烧瓶静置30分钟。同时在1cm吸收池、490nm处测定标准制备液和样品制备液的吸收度, 甲醇溶液作空白, 并用以下公式计算水飞蓟宾和水飞蓟素的百分含量:
5000(C/W) (Au/As)
C: 为标准溶液中水飞蓟宾的浓度 (mg/ml); W: 样品制备液中所用干燥水飞蓟的重量 (mg); Au和As分别为样品制备液和标准制备液的吸收度。
5. HPLC法测定水飞蓟素的含量 (INA法)
色谱条件: 柱: YMC-Mark ODS C18 5u 4.6×150mm(或Phenomenex Luna C18 5u 4.6×150mm); 流动相: A液: 5ml磷酸加入995ml甲醇-水溶液(20:80), B液: 5ml磷酸加入995ml甲醇-水溶液 (80:20), 按表7-1程序洗脱; 流速: 1.0ml/min; 柱温: 40C; 检测波长: 288nm; 进样量: 10μl。
标准品溶液的制备: 精密称取真空干燥的水飞蓟宾10.00mg, 用甲醇溶解, 并定容至25ml, 即为对照品溶液。按1:2, 1:10, 1:25, 1:50比例稀释。
供试品溶液的制备: 药材 精密称取约10g药材细粉, 用100ml己烷于索氏提取器在水浴上提取4小时至色淡 (或无色), 提取液弃, 药渣挥干溶剂, 残渣加入90ml甲醇置水浴上回流提取8小时, 提取液冷却后定量至100ml, 稀释25倍, 过滤, 滤液即为供试品溶液。
提取物 精密称取提取物粉末70mg(精确至0.1mg), 加70ml甲醇超声提取20分钟,冷却, 定容至100ml, 滤过。
测定法: 对照品溶液、提取溶剂、供试品溶液分别进样, 见图7-2。以标准品峰面积对浓度绘制曲线, 水飞蓟宾A、B的线性相关系数应不小于0.999, 分离度不小于1.8。各组份的相对保留时间见表7-2。
表7-2 各组分的相对保留时间
组 分 YMC-Park Luna
计算:按上述各组分的总峰面积以水飞蓟宾计量。
6. HPLC法测定水飞蓟提取物中SilibininA、B的含量
色谱条件:预柱:2cm Bondapak C18/37-50Micron;柱:25cm RP18,5μm;流动相及洗脱程序见表7-3;流速:1.0ml/min;检测波长:288nm;进样量:10μl。
表7-3 流动相洗脱程序
时间 (分钟) 5%醋酸甲醇溶液 5%醋酸
图7-2 水飞蓟提取物HPLC图
供试液: 取0.05g提取物 (30%)溶于100.0ml甲醇中, 用0.45μm滤膜滤过即得。
对照液: 用甲醇配成含Silibinin约0.15mg/L的溶液。
以SilibininA+B峰面积外标 (%) 法计算。
7. 气相色谱法 (顶空进样) 测定水飞蓟提取物中己烷和乙醇的残留量
内标溶液: 精密称取250mg戊烷, 加二甲苯定容于10ml量瓶。
校正液: 精密称取100mg乙醇、己烷、戊烷, 加二甲苯定容于10ml量瓶。移取10μl溶液至顶空进样瓶, 密封。
供试液: 精密称取0.1～0.5g干提取物, 置一个顶空进样瓶, 加10μl内标液(相当于250mg戊烷), 密封。
顶空进样参数: 温度: 110℃; 温度调节时间: 10分钟; 压力调节时间: 1分钟。
色谱条件: 柱: DB-1硅胶毛细管, 30m×0.25mm内径, 厚0.1μm。炉温: 40℃保持7分钟; 然后12℃/分钟, 至180℃; 保持0.5分钟; 30℃/分钟至280℃, 然后保持10分钟。进样器: 150℃; 检测器: FID250℃; 载气: 氮气(5psi); 分流比: 1:5; 积分停止时间: 25分钟。
以内标色谱峰积分值进行定量, 按下式计算:
F=Ac×Ms/(Mc×As)
Ac: 参照标准品色谱峰面积; Ms: 内标的数量 (μg/μl); As: 内标的色谱峰面积;Mc: 参照标准品的数量 (μg/μl)。
含量 (mg/kg) =Ac×Ms×100/ (F×As×E)
Ac: 供试液中溶剂的色谱峰面积; Ms: 供试液中内标的数量; As: 供试液中内标的色谱峰面积; E: 取样量。
注:检测限:均为1ppm:保留时间:乙醇约5.5分钟、己烷约10分钟。
限度: 乙醇不得过0.5%、己烷不得过10ppm。
8. 气相色谱法测定水飞蓟提取物中丙酮残留量
内标溶液: 精密称取丙酮, 加水定容至6.00mg/ml。
校正液: 精密称取丙酮, 加水定容至0.30mg/ml。
供试液: 精密称取5g干提取物, 加120ml水, 加热, 加2滴消泡剂和5.00ml内标溶液。蒸发至约80ml。
色谱条件: 柱: OV101, 50m, 内径0.32mm, 厚0.1μm; 炉温: Sotherm at 30℃; 进样器: 250℃; 检测器: FID 250℃; 载气: 氦气; 流速: 1ml/min; 分流比: 1:70。
以外标色谱峰积分值进行定量。
注:检测限:丙酮0.1 ppm;定量限:丙酮1.0ppm;保留时间:丙酮约4.7分钟。
限度: 丙酮不得过20ppm