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蝶豆花花青素含量检测方法

发布时间:2023-06-10 03:58:55

① 花青素含量的测定

方法1:原花色素的测定方法(分光光度法)
本方法适用于各种植物组织、器官及其制剂(如葡萄子与松树皮提取物)中原花色素含量的测定。
1. 方法提要
原花色素(也称缩合单宁)是黄烷-3-醇的寡聚体与多聚体,属多酚类化合物。与其他酚类化合物不同,黄烷醇(缩合单宁,单体,双体等)在酸性介质中可与香草醛反应,生成在500nm处有最大吸收的有色物质,可通过比色测其含量。
2. 仪器
分光光度计。
3. 试剂
所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
(1)香草醛、甲醇、浓盐酸均为分析纯级。
(2)提纯的原花色素或儿茶素。
(3)4%香草醛甲醇液。
(4)标准使用液:将提纯的原花色素溶于蒸馏水,制成1mg/mL储备液,将储备液稀至浓度为1×10-2mg/mL至1mg/mL的标准使用液。标准使用液应于测定当天配制。
如无提纯的原花色素,可用儿茶素代替,配制方法同上。
4. 测定步骤
(1)样品中原花色素的制备:植物材料经4倍体积丙酮+水(7+3,体积比)或者经60%甲醇提取,40℃以下减压蒸馏去除有机溶剂,水相再经乙醚洗涤后定容。
冰冻干燥的固体原花色素制剂,直接溶于水中(先加少量甲醇助溶)制成原花色素液。
原花色素液于5℃下暗环境中保存备用。
(2)样品测定:用锡箔将试管(14mm×20mm)包裹严,仅留管口用于加样。向管内加入试样0.5mL,再加3.0mL 4%香草醛甲醇液混合,然后加入1.5mL浓盐酸,彻底混匀,室温下显色15min。也可在暗环境下进行以上操作。最后在500nm处比色。
可按以上操作步骤制得标准曲线(即0.1mg原花色素在500nm处的吸收值为0.55)。
5. 结果计算
计算原花色素量的公式,
原花色素(1×10-3mg)=A500nm÷0.55×100×V
式中 V——试样稀释体积(倍数)。
6. 注释
(1)本方法的检测范围为(5~500)×10-3mg/0.5mL样液。精密度与准确度大于1×10-3mg。
(2)反应试管应用清洁剂浸泡24h,彻底洗涤干净。
(3)进行比色时,用水作空白。
(4)500nm处的OD值应控制在3以下。
(5)试样中原花色素含量较高时,应从香草醛存在下所测A500nm值中减去无香草醛时所测值。
(6)显色液应避光放置。

方法2:保健食品中原花青素含量的测定方法
1、原理
原花青素易溶于含羟基的溶剂如甲醇等,本方法是将样品中的前花青素,用甲醇提取,加入盐酸家温水解后将其转化为深红色氰定(C15H10O6·HCL)后进行高压液向色谱测定。

2、试剂:
2.1二氯甲烷 分析纯
2.2甲醇 色谱纯
2.3异丙醇 分析纯
2.4甲酸 分析纯
2.5盐酸 分析纯

3、检验方法
3.1样品 称取约500mg油溶性样品于100ml锥形瓶中,加入5.0ml二氯甲烷,振摇使其溶解。加入45.0ml甲醇,振摇5min后过20μm滤膜。取5.0ml滤液于25ml容量瓶中,加入5.0ml3mol/L盐酸,振摇并用异丙醇定容至刻度。立即过5μm滤膜,取出一部分置于试管中,塞紧瓶塞并在100±5℃烘箱中放置45min进行水解,取出后放置至室温后进行液相色谱分析。
3.2标准 除称取25.0mg标准品于100ml锥形瓶中外,其余步骤均同样品。
3.3定量方法 标准曲线外标法定性定量分析。

4、色谱分析条件
4.1流动相:水:甲醇:异丙醇:甲酸=73:13:6:8
4.2检测波长:525nm
4.3色谱柱:岛津Shim-Pak CLC ODS 15cm×6mm
4.4柱温:35℃
4.5流速:1ml/min

② 花青素检测

平时,我们会见到一些植物的叶子是红色的,比如,红苋菜、秋海棠、糖萝卜等,它们也是能够进行光合作用的。生物书上解释说,这是由于这些植物的叶子里也含有很多的叶绿素,只不过其中还含有大量的花青素(呈红色),掩盖了绿色而已。但如何向学生证明叶子里也含有很多的叶绿素呢?

可以用这样的一个小实验来证明:取一片(或几片)红色叶子,放到一杯清水里面,加热清水至沸腾,再煮5min左右,用镊子取出叶子,可发现叶片的红色已基本褪尽,而呈现出一片绿色。原因是,花青素是一种很容易溶于水的物质,而叶绿素则比较稳定,不易溶解于水中。经热水一烫,花青素便迅速地溶入了水中,故叶子上的红色便褪去了,露出了叶绿素的绿色。

为了证实溶解在水中的是花青素,可加入稀HCl或稀NaOH来调节水的pH值,让溶液分别呈酸、中、碱性。可发现,当为酸性时,溶液呈红色;当为中性时,溶液呈紫色;当为碱性时,溶液呈蓝色。这三种颜色正是花青素在酸、中、碱性水溶液中的表现。所以,在这些叶子中,花青素的红色确实是将叶绿素的绿色掩盖住了。

不但这些红叶子有这样的特性,凡含有花青素的(一般是呈大红、紫、蓝色的,不是呈橙、黄色的)花、果,如木棉、紫荆、牵牛、荔枝、葡萄、李子等的花,都有类似的表现;甚至连一些秋天会变红的树叶,如黄栌、枫、乌柏、黄连木等的叶子,经煮后也会褪尽红色,而露出了橙、黄色。

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