糖类鉴别化学方法苯酚硫酸法

① 苯酚-硫酸法测定多糖的原理

原理
多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。
试剂
1．
浓硫酸：分析纯，95.5%
2．
80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。
3．
6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。（每次测定均需现配）
4．
标准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）,或分析纯葡萄糖。
5．
15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
6．
5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
7．
6mol/L
氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。
8．
6mol/L
盐酸
操作
1．制作标准曲线：准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
2．样品含量测定：
①取样品1克（湿样）加1ml
15%TCA溶液研磨，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升离心管中，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液，重复3次。最后一次将残渣一起到入离心管。注意：总的溶液不要超出10毫升。（既不要超出离心管的容量）。
②离心，转速3000转/分钟，共三次。第一次15分钟，取上清液。后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。最后滤液保持18毫升左右。（测肝胰腺样品时，每次取上清液时应过滤。因为其脂肪含量大容易夹带残渣。）
③水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L
盐酸之后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。
④定容取样。水浴后，用流水冷却后加入2毫升6mol/L
氢氧化钠摇匀。定容至25毫升的容量瓶中。吸取0.2
ml的样品液，以蒸馏补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却室温放置20分钟以后于490nm测光密度。每次测定取双样对照。以标准曲线计算多糖含量。
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② 硫酸苯酚法与苯酚硫酸法测定多糖有什么区别

多糖类化合物是许多中草药的有效成分之一，但多糖多无法直接测定，苯酚�硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下，水解成单糖分子，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚形成有色化合物，再用分光光度计进行检测。苯酚�硫酸法是测定多糖含量的常用方法之一，具有简便、快速、准确、灵敏的特点，在实验中发现，该法中苯酚和浓硫酸的比例十分关键，须控制为1�5，同时应保证溶液中硫酸的浓度，故文中多糖溶液移取体积为1.00 mL。另外，硫酸的加入方法不同对显色结果也有影响，故在操作过程中尽量由同一试验人员进行操作。

硫酸苯酚法测定云芝多糖含量的效果
摘要 云芝多糖成分复杂,测定比较困难。试验表明,硫酸苯酚法是测定云芝多糖含量的一种理想方法。其具有快速、稳定、灵敏度高和重现性好等优点。
关键词 云芝多糖 含量测定 硫酸苯酚法
云芝属担子菌亚门多孔菌科云芝菌属的真菌。从云芝菌子实体中提取的云芝多糖具有抗肿瘤、抗乙肝病毒、提高人体免疫功能等作用,同时对人体无毒副作用,长期食用无不良反应。因此,除可用作治疗乙肝和癌症病人在放疗、化疗过程中理想的辅助药物外,还可作为延缓老年性疾病发生的保健食品。目前,人们多从云芝菌子实体中提取云芝多糖,加工成各类制剂。衡量此类药品质量的标准主要是看其云芝多糖含量的多寡。鉴于云芝多糖成分较为复杂,目前国内尚无理想的测定其含量的方法,特此用硫酸苯酚法对云芝多糖含量进行了测定试验。1 试验材料1.1 仪器UV-756分光光度计(上海第三分析仪器厂产品)。1.2 试剂云芝多糖样品由上海莱福多糖制品有限公司提供,其它化学试剂均为国产分析纯。云芝多糖纯品的制备详见文献2。2 测定方法2.1 葡萄糖标准溶液的配制精确称取105℃干燥恒重的葡萄糖200mg,置于100ml容量瓶中,定容,摇匀。取1ml溶液于50ml容量瓶中定容,摇匀(含葡萄糖40mg/L),备用。分别吸取葡萄糖标准溶液0.4,0.6,0.8,1.0,1.2,1.4,1.6,1.8ml,用蒸馏水补充至2.0ml,加入6%的苯酚溶液1ml,静止10分钟,摇匀,室温下放置20分钟,于490nm处测定吸光度(以2.0ml蒸馏水作为空白对照),求得回归方程为:A=-0.06161+3.4190C1 (r=0.9990)其中,A表示吸光度,C1为葡萄糖浓度。2.2 换算因子的测定精确称取云芝多糖纯品150mg,配成适当浓度,依照标准曲线方法测定吸光度。根据回归方程计算换算因子f=W/(C2×D),其中f为换算因子,W为样品重量,C2为供试液相当于葡萄糖浓度(g/L),D为稀释倍数,测得f=1.38。2.3 待测云芝多糖溶液制备精确称取云芝多糖样品0.3000g,加80℃热溶解,定容100ml(可适当再稀释),摇匀,备用。2.4 云芝多糖含量测定吸待测样溶液2.0ml,加入6%苯酚1ml,静置10分钟,摇匀,室温下放置20分钟,在490nm处测吸光度。按下式计算多糖含量。云芝多糖含量(%)=C2×D×f/W×100%2.5 云芝多糖吸收曲线确定用葡萄糖标准溶液和云芝多糖纯品按测定方法分别显色,全波长扫描。扫描图谱见附图。附图 葡萄糖和云芝多糖的扫描图谱 由附图看出,云芝多糖经硫酸苯酚法显色后,几个秋萝卜品种(系)的农艺性状比较李先芳(郑州牧业工程高等专科学校,郑州450008)刘艳波(郑州市蔬菜研究所) 1996年我们在郑州市蔬菜研究所进行了新育秋萝卜品种(系)比较试验,旨在为河南省萝卜区域试验和示范推广提供优良品种。1 材料与方法供试秋萝卜品种(系)6个,详见表1试验采用随机区组排列,3次重复。株行距26cm×33cm,小区面积4.32m2,每小区27株,周围设保护行。田间管理方法同大田生产。1996年8月14日播种,播后观察记载各品种(系)生育期、植物学性状、病害等,收获时分区计产,折算亩产。2 结果与分析2.1 各品种(系)的生育时期6个品种(系)均8月18日出苗,9月16日定苗,11月10日收获,生育期86天。其中,90-12、90-13、丰光一代、大青皮破肚和定桩比德日2号、国光一号早1天(表1)。2.2 各品种(系)植株性状从表2看出,除90-13为板叶外,其余均为花叶,但大青皮、德日2号、国光一号杂板叶较多,一般于苗期分苗时将其拔除。丰光一代株形较大,其次为德日2号;90-13和90-12株形较1999-03-20收稿。其最大吸收峰为490nm,与葡萄糖基本相同。2.6 显色时间以云芝多糖纯品为样品,在20℃下显色不同时间,分别测定吸光度,结果见表1。表1 云芝多糖显色不同时间吸光度显色时间(min)吸光度10.51550.515100.515150.516200.516250.516300.517350.517400.517显色时间(min)吸光度450.518500.519550.519600.519650.521700.522750.524800.524850.525显色时间(min)吸光度900.526950.000.5271050.5271100.5271150.5281200.5291250.5301300.530 从表1可以看出,显色时间在30分钟内吸光度非常稳定。2.7 样品回收率测定精确称量云芝多糖样品0.2000g,加入一定量的云芝多糖纯品,按测定步骤显色,测吸光值,计算其含量,并计算出样品回收率为101.8%,说明该测定方法相当准确。3 方法精确度测定分别取称0.3000g云芝多糖样品5份,用本法分别测定其云芝多糖含量,结果见表2。经计算其RSD=1.12%,说明本法测定精确度较高。表2 云芝多糖含量测定方法精确度测定结果项目样品号12345云芝多糖含量(%)51.2947.4448.8049.7248.724 小结研究结果表明,用硫酸苯酚法测定云芝多糖含量,快速、稳定、灵敏度高、重现性好。而其它测定方法对云芝多糖含量的测定效果还有待进一步研究

③ 测定糖类的主要方法有哪些

4种糖的测定方法
总结：
1、 直接滴定法。
原理为 糖还原天蓝色的氢氧化铜为红色的氧化亚铜。缺点：水样中的还原性物质能对糖的测定造成影响。
2、 高锰酸钾滴定法。
所用原理同直接滴定法。缺点：水样中的还原性物质能对糖的测定造成影响，过程较为复杂，误差大。
3、硫酸苯酚法。
糖在浓硫酸作用下，脱水形成的糠醛和羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10-100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。
缺点：如果水样呈橙红色（大部分水样为黄色），会对比色法造成较大的干扰。
4、蒽酮法
糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛和羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的测定。
缺点：，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅。
综合比较；采用蒽酮法能将最为准确地测定尾水中糖的含量。

④ 硫酸苯酚法测多糖有什么要特别注意吗

1、制作标准线宜用相应的标准多糖，如用葡萄糖，应以校正系数0.9校正μg数。

2、对杂多糖，分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算。

3、测定时根据光密度值确定取样的量。光密度值最好在0.1——0.3之间。比如：小于0.1之下可以考虑取样品时取2克，仍取0.2ml样品液，如大于0.3可以减半取0.1ml的样品液测定。

(4)糖类鉴别化学方法苯酚硫酸法扩展阅读：

苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10～100ug范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。

苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。