血清中维生素d检测方法

A. 维生素D测定法简介

目录

• 1 拼音
• 1.1 第一法
• 1.2 第二法
• 1.3 第三法

1 拼音

wéi shēng sù D cè dìng fǎ

本法系用高效液相色谱法测定维生素D(包括维生素D<[2]>和D<[3]>,下同)及其制剂、维生素AD制剂或鱼肝油中所含维生素D及前维生素D经折算成维生素D的总量，以单位表示，每单位相当于维生素D0.025μg。

测定应在半暗室中及避免氧化的情况下进行。

无维生素A醇及其他杂质干扰的供试品可用第一法测定，否则应按第二法处理后测 定；如果按第二法处理后，前维生素D峰仍受杂质干扰，仅有维生素D峰可以分离时，则应按第三法测定。

1.1 第一法

对照品贮备溶液的制备

根据各制剂中所含维生素D的成分,精密称取相应的维生素D<[2]>或D<[3]>对照品25mg,置100ml棕色量瓶中，加异辛烷80ml，避免加热，用超声处理助溶1分钟使完全溶解，加异辛烷至刻度，摇匀，充氮密塞，避光，0℃以下保存。

测定维生素D<[2]>时，应另取维生素D<[3]>对照品25mg，同法制成维生素D<[3]>对照品贮哗数备溶液，供系统适用性试验用。

内标溶液的制备

称取邻苯二甲酸二甲酯25mg，置25ml量瓶中，加正己烷至刻度，摇匀。

色谱条件与系统适用性试验

用硅胶为填充剂，正己烷－正戊醇（997∶3）为流动相，检测波长为254nm。量取维生素D<[3]>对照品贮备溶液5ml，置具携轿塞玻璃容器中，通氮后密塞，置90℃水浴中加热1小时，取出迅速冷却，加正己烷5ml， 摇匀，置1cm具塞石英吸收池中，在2支8W主波长分别为254和365nm的紫外光灯下， 将石英吸收池斜放成45°,并距灯管5～6cm,照射5分钟,使溶液中含有前维生素D<[3]>、反式维生素D<[3]>、维生素D<[3]>和速甾醇D<[3]>；取此溶液注入液相色谱仪，测定维生素D<[3]>的峰值，先后进样5次,相对标准偏差应不大于2.0％；前维生素D<[3]>(与维生素D<[3]>的比保留时间约为0.5)与反式维生素D<[3]>(与维生素D<[3]>的比保留时间约为 0.6)以及维生素D<[3]>与速甾醇D<[3]>(与维生素D<[3]>的比保留时间约为1.1)的峰分离度均应大于1.0。

校正因子测定

精密量取对照品贮备溶液和内标溶液各5ml,置50ml量瓶中，加正己烷至刻度，摇匀；取一定量注入液相色谱仪，计算维生素D的校正因子f<[1]>。

另精密量取对照品贮备溶液5ml置50ml量瓶中，加入2,6－二叔丁基对甲酚结晶1粒,通氮排除空气后，密塞，置90℃水浴中加热1．5小时，取出迅速冷却至室温，精密加内标溶液5ml，加正己烷至刻度，摇匀；取一定量注入液相色谱仪，计算前维生素D折算成维生素D的校正因子f<[2]>。

f<[2]>＝(A<[s]>·m<[r]>－f<[1]>m<[s]>A<[r1]>)／A<[r2]>·m<[s]>

式中

A<[s]>为内标的峰值；

m<[r]>为加入对照品的量；

f<[1]>为维生素D的校正因子；

m<[s]>为加入内标物质的量；

A<[r1]>为维生素D的峰值；

A<[r2]>为前维生素D的峰值。

含量测定

取各该制剂项下制备的供试品溶液进行测定,按下列公式计算维生素D及前维生素D折算成维生素D的总量。

mi＝(f<[1]>·A<[i1]>＋f<[2]>A<[i2]>)·m<[s]>／A<[s]>

式中

A<[i1]>为维生素D的峰值；

A<[i2]>为前维生素D的峰值；

m<[s]>为加入内标物质的量；

A<[s]>为内标的峰值。

1.2 第二法

精密称取供试品适量(相当于维生素D总量600单位以上，重量不超过2.0g)，置皂化瓶中，加乙醇30ml、抗坏血酸0.2g与50％(g／g)氢氧化钾溶液3ml[若供试量为3g，则加50％(g／g)氢氧化钾溶液4ml]，置水浴上加热回流30分钟，冷却后，自冷凝管顶端加水10ml冲洗冷凝管内壁，将皂化液移至分液漏斗中，皂化瓶用水60～100ml分数次洗涤,洗液并入分液漏斗中，用不含过氧化物的乙醚振摇提取3次，第一次60ml,以后每次40ml，合并乙醚液乱隐首，用水洗涤数次，每次约100ml，洗涤时应缓缓旋动，避免乳化,直至水层遇酚酞指示液不再显红色，静置，分取乙醚提取液，加入干燥滤纸条少许振摇除去乙醚提取液中残留的水分，分液漏斗及滤纸条再用少量乙醚洗涤，洗液与提取液合并，置具塞圆底烧瓶中，在水浴上低温蒸发至约5ml，再用氮气流吹干，迅速精密加入甲醇3ml，密塞，超声处理助溶后，移入离心管中，离心，取上清液作为供试品溶液A。

净化用色谱柱系统分离收集维生素D

精密量取上述供试品溶液A 500μl,注入以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的液相色谱柱，以甲醇－乙腈－水(50∶50∶2) 为流动相进行分离，检测波长为254nm，从计录仪上观察色谱图，要求维生素D与前维生素D为叠 峰，并能与维生素A及其他干扰含量测定的杂质分开；准确收集含有维生素D及前维生素D混合物的全部流出液，置具塞圆底烧瓶中，用氮气流迅速吹干,精密加入已知内标浓度的正己烷溶液适量(不少于2ml，并使每1ml中含维生素D为50～140单位,内标物质与维生素D的重量比约为4∶1)，密塞，超声处理助溶，即为供试品溶液B。

取供试品溶液B，按第一法进行含量测定，进样量为100～200μl。

1.3 第三法

供试品溶液的制备

取各该制剂项下制备的供试品溶液A,按上述第二法净化用色谱柱系统分离维生素D项下的方法处理,至“用氮气流迅速吹干”后, 加入异辛烷2ml溶解,通氮排除空气后，密塞，置90℃水浴中，加热1.5小时后，立即通氮在2分钟内吹干，迅速精密加入正己烷2ml，溶解后，即为供试品溶液C。

对照品溶液的制备

精密量取对照品贮备溶液适量,加异辛烷定量稀释制成每1ml中约含维生素D 50单位，精密量取2ml置具塞圆底烧瓶中，照供试品溶液制备项下的方法,自“通氮排除空气后”起，依法操作，得对照品溶液。

含量测定

B. 如果身体缺乏维生素ABCD，有什么办法可以自查

如果身体缺乏维生素ABCD，有什么办法可以自查？

维生素是体内必不可少的微量元素之一，如检查维生素缺乏，需要到正规的三甲医院挂内分泌科或者普内科行常规检查。

c

维生素是人体内必须的一种化合物质，缺乏维生素会导致人体出现各种各样的疾病例如表面皮肤干燥、缺乏弹性、人体内缺乏营养物质，甚至会导致胃肠道功能减退及对营养物质的吸收、代谢能力降低从而引发各种继发性疾病，引发胃溃疡、胃炎等疾病，除此之外会导致患者精神状态不佳、脾气暴躁、记忆力下降等精神系统疾病，幼儿缺乏维生素会导致身体发育障碍。所以，缺乏维生素应该进行血液检查，价格在20-50元不等，可以有效检查出身体内缺乏的维生素。

C. 25羟基维生素d

25-羟基维生素D水平低增加大动脉硬度的潜在作用; ; 作者:国际循环;日;期:9/28/2010;3:13:10;PM;点击：346;;;;第0期; 国际循环网版权所有，谢绝任何形式转载，侵犯版权者必予法律追究。 目地：越来越多的证据表明，维生素D对心血管系统发挥重要的病理生理影响。有一些关于低维生素D水平与心血管风险增加有关的报告。我们的目的是建立与维生素D及动脉血管硬化的关联。由于机制合理，我们也旨在证明，基质金属蛋白酶9（MMP9）多态性是否在该关联中发挥协同作用。 ;;;;方法：576位受试者，基于postMONICA普通人群的随机子样本被列入该横断面研究。使用Sphygmocor设备通过主动脉脉搏波速度（APWW）量化动脉硬度。使用试剂盒测定血清中25-维生素;D(25(OH)-D3;)。两个MMP9的多态性（C1569T和G836A）通过PCR技术进行了估算。 ;;;;结果：在我们的试验中，我们发现APWW在25（OH）-;D3四分位中有明显下降趋势。处于25-(OH)-D3四分位底部受试者（

D. 人体维生素怎样检测

人体缺少维生素会有以下几个症状，要是有这几个症状就说明缺少维生素。

1、皮肤粗糙

体内缺乏维生素会令皮肤粗糙,甚至还会长痘痘。此时,应该保持规律、均衡的饮食生活习惯,并及时补充维生素B、C、E等。比如多吃瘦肉、鱼、鸡蛋、牛奶等食物。当体内有足够的维生素后可使毛细血管畅通,并不断供给皮肤所需要的营养,以促进健康和柔嫩肌肤的成长。

2、口腔溃疡

口腔溃疡属于常见口腔疾病,常与人体中缺乏维生素有密切关系。这类维生素主要是维生素B群,其中重要的是维生素B2,维生素C,应及时补充。如果长时间不能痊愈,日常生活中需要注意饮食的调理。尽量保持清淡饮食,多吃些容易消化的食物,不可以吃辛辣刺激、生冷的食物,多吃新鲜的蔬菜水果。

3、掉发脱发严重

掉发、脱发严重也是体内维生素缺乏的表现。经常掉发脱发的人,可能是由于体内缺乏维生素B7造成的。维生素B7是一种维持人体自然生长、发育和正常人体机能健康必要的营养素。在缺乏后,容易引起神经功能失调,会使人头皮屑增多,出现掉发、少年白发等症状。

4、记忆力减退

记忆力逐渐减退并不是只有年龄增大这一条原因,如果营养不足、维生素缺乏也会影响到我们的记忆力。通常,可以对抗大脑老化,提高记忆力的维生素主要包括维生素B1、B6、B12和叶酸等。

此外,补充抗氧化维生素也可以帮助大脑对抗衰老,维生素C、维生素E和β-胡萝卜素可以消除大脑产生的自由基,避免大脑功能受损,尤其是维生素E格外重要,具有保护脑神经细胞、预防老年痴呆症的功能,是大脑的保护剂。

(4)血清中维生素d检测方法扩展阅读：

还有长皮疹，掉头发。如果脸上长鳞屑红斑性皮疹，头发掉得也异常多，说明人体可能缺乏维生素B7，这是一种水溶性维生素，容易流失，需要人体每日从饮食中摄取，如果有吃生鸡蛋习惯，更会雪上加霜，因为生鸡蛋的蛋白质会抑制人体吸收维生素B7。

肌肉抽筋。如果平时经常自觉腿部肌肉抽筋，这表明可能缺乏钾、钙、镁等矿物质。若同时是运动爱好者，大运动量会通过出汗令人体流失更多这些矿物质，从而加重症状。

参考资料来源：人民网-出现这些征兆,说明身体内缺乏维生素

E. 维生素d检查之前吃饭喝水吗

维生素d检查之前可以吃饭喝水，对检查结果没影响，但是不能用食用维生素D3的维生素片等，检查时要求应放松心情，配合医生做好检查。
维生素D(vitamin D)是类固醇的衍生物，分为迅此竖维生素D2和维生素D3。检测维生素D主要通过以下方法测定：
1、血清25-羟维生素D3测定：25-羟维生素D3是维生素D3的主要代谢产物，测定其具有早期诊断的价值。
2、血亩大液生化检查：其改变比X线影像显示的骨扒御骼改变早。

F. 维生素D3有那些方法学可以检测出来

方法名称：
维生素D3的测定—高效液相色谱法
应用范围：
本方法采用高效液相色谱法测定维生素D3的含量。
本方法适芹启用维生素D3。
方法原理：
供试品和内标均制成甲醇溶液，进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长254nm处检测维生素D3（C27H44O）和内标邻苯二甲酸二甲酯的吸收值，计算出其含量。嫌友如
试剂：
1.异辛烷
2. 正己烷
3. 正戊醇
仪器设备：
1. 仪器
1.1 高效液相色谱仪
1.2 色谱柱
硅胶为填充剂，维生素D2峰与内标物质峰的分离度应符合要求。
1.3 紫外吸收检测器
2. 色谱条件
2.1 流动相：正己烷+正戊醇= 997 3
2.2 检测波长：254nm
2.3 柱温：室温
试样制备：
1. 称取供试品
精密称取本品25mg，置100mL棕色量瓶中。
2. 对照品溶液的制备
精密称取维生素D3对照品和维生素D3对照品25mg，置100mL棕色量瓶中，加异辛烷80mL，避免加热，超告游声处理1分钟使完全溶解，并加异辛烷至刻度，摇匀，冲氮密塞，避光，0℃以下保存。
3. 内标溶液的制备
取邻苯二甲酸二甲酯25mg，置25mL量瓶中，加正己烷溶解并稀释至刻度，即得。
4. 供试品溶液的制备
上述供试品加三甲基戊烷80mL，避免加热，用超声处理1分钟使溶解，加三甲基戊烷稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。
操作步骤：
分别精密吸取上述供试品溶液与对照品溶液，20μL 注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长254nm处测定维生素D3和内标邻苯二甲酸二甲酯的吸收值，按内标法以峰面积计算，即得。

G. 药明奥测维生素D检测创新解决方案好不好

目前，全国多地正在推进疫情常态化，这促进了诊疗场景的进一步拓展，在社区、在第三方检测机构、在轿慧尘家中，方便快捷地采集、检测，已成为广大人民群众的普遍需求。药明奥测维生素D检测创新解决方案，开创性地利用了干血斑样本（dried blood spot，DBS）进行血清总25-羟维生素D水平检测，检测者无需去医院抽血，⌄在院外即可轻松完成采样。其“金标准”质谱法，碧扮结果精准、过程便捷，DBS样本与血液样本检测结果一致性达95%以上，打破了诊疗场闭禅景的局限，实现了高质量医疗服务的更广覆盖。

H. 如何检查维生素D

这说数历明：维生素D对直肠癌的预防有一定积极作用。而整日在写字楼内不见阳光、出门又乘汽车的磨亮白领，体内维生素D的含薯游搜量肯定有限。既然缺乏由阳光合成的维生素D，

I. 维生素D的测定

病情分析：你好，你说的情况发我看见了，25-羟维生素d3是胆固醇的衍生物，也称胆钙化醇，主要是参与血钙代谢，你的宝宝是69.31，应该是正常值。
指导意见：你好，建议你1正常的25-羟维生素d3含量为40——90你的宝宝在正常值之内。

J. 如何判断孩子是否缺乏维生素D

如果需要到医院检查维生素D是否缺乏，歼掘州可以通过血清25-羟维生素D3测定，以及血液生化检查两种医疗手段获得答案。但是，一般只要饮食均衡，身体健康，加上有氏蔽适当的运动，再配合合理的日照时间来帮助合成维生素D。散型