用酶检测表面抗原方法

Ⅰ 乙肝病毒表面抗原酶联免疫法检测的实验报告怎么写

酶免疫技术的基本原理是用酶标记的抗体（或抗原）与标本中的相应抗原（或抗体）特异性结合，用酶催化底物反应的生物放大作用显示免疫复合物的存在，提高检测检测抗原抗体复合物的敏感性，基于上述基本原理，临床的应用发展主要有酶免疫组化技术和酶免疫测定技术两种。
酶免疫测定技术根据抗原抗体反应是否需要分离结合酶标记物与游离酶标记物又分为均相测定和异相测定。其中异相测定又根据反应介质的物理状态分为液相没免疫测定和固相酶免疫测定。
你所讲的检测乙肝病毒标志物的酶联免疫法(全名：酶联免疫吸附试验 英文名：ELISA)就属于固相酶免疫测定。它的基本原理是：将抗原（或抗体）吸附在聚苯乙烯（载体）反应板上后，加入酶标记抗体（或酶标记抗原）与相应抗原（或抗体）特异性结合；使得酶也结合到载体上，洗去游离的酶标记抗体（或酶标记抗原），加入底物显色，根据颜色的深浅和有无进行定性或定量分析。从它的原理看出此方法它有三大必备要素：1、固相抗原或抗体2、酶标记抗体或抗原3、底物。
ELISA法有几种类型，有双抗体夹心法、双抗原夹心法、双位点一步法、间接法、竞争抑制法、捕获法。类型不同具体的操作步骤和反应原理又不同。检验结果的判定也不同。请参考专业临床医学检验教科书或检验试剂里的说明书。

Ⅱ 乙肝表面抗原携带者

乙肝表面抗原携带者

乙肝表面抗原携带者，在日常生活中，相信大家都听说过乙肝这种病症，这种病症是会传染的，乙肝表面抗原携带者如果不加注意，以后不容乐观。下面分享乙肝表面抗原携带者的文章。

乙肝表面抗原携带者1

每一个病都会有导致其发生的原因，那么乙肝的发病原因是什么呢？诱发乙肝的原因之一在于急性肝炎，急性肝炎会诱发乙肝主要是因为当人体感染乙肝病毒后，体内的T细胞会攻击肝脏细胞，并使其释放入血的乙肝病毒，并与特异性抗体所结合，使得干扰素生成增多。

乙肝表面抗原的亚型

一起来了解一下乙肝表面抗原的亚型吧，乙肝病毒的表现型是其血清亚型（subtype），由外膜主蛋白上的一些残基决定。主蛋白携带两对相互排斥的亚型决定簇 d/y 和 w/r ，由此组成乙肝表面抗原的4个主要亚型：adw、adr、ayw、ayr。adr亚型主要分布历伍雀在东亚地区，与这一地区流行的C基因型一致。

乙肝表面抗原的测定方法

乙肝的测定方法在我国是比较成熟的，也是比较科学准确的。中国最常使用的测定表面抗原的方法是酶联免疫吸附试验（ELISA），其次是放射免疫试验（RIA）。ELISA简单、方便、快速，进口试剂盒可测到的血清表面抗原最低浓度为0.2ng/ml，国产试剂盒目前能达到0.5ng/ml。

乙肝表面抗原需要注意很多

如果患上了这样的症状，我们需要去注意很多的事情在我们的生活中。中国有1.2亿乙肝表面抗原携带者，尽管乙肝表面抗原携带者没有明显的肝炎症状和体征，肝功能也基本正常，除了部分工作（如饮食服务、幼教保育人员）从业受限制外，其他完全可以与正常人一样地工作学习。因此，乙肝表面抗原携带者在日常生活中需要注意很多的问题。

乙肝表面抗原携带者2

乙肝表面抗原阴性是什么

乙肝表面抗原是感染乙肝病毒的一个指标。乙肝表面抗原是乙肝病毒的外壳，它本身不具有传染性，但它的存在表示人体已经感染了乙肝病毒。乙肝表面抗原阴性则代表没有乙肝病毒感染，若是乙肝五项全阴，应及时的注射乙肝疫苗。

检查结果为乙肝表面抗原阴性的患者也不能放松警惕，尤其是一些乙肝患者乙肝表面抗原呈阴性，过了一段时间后又复发了，这种情况是乙肝病毒变异所造成。此时的乙肝表面抗原阴性是一种假象，必须定期检查乙肝表面抗原定量，及时的进行抗病毒治疗。

乙肝表面抗原是什么意思

乙肝表面抗原（HBsAg）是乙肝病毒的外壳蛋白，本身不具有传染性，但它的出现常伴随乙肝病毒的存在，所以它是已感染乙肝病毒的标志。在不同的医院，乙肝表面抗原正常值范围会有很大不同。乙肝表面抗原正常值的范围采用不同的表示方法，其值也有所不同。乙肝表面抗原正常值主要有以下几种表示方法：

1、ng/ml表示法

如果乙肝表面抗原正常值（ng/ml）大于0.18ng/ml，那么就表示该患者体内有乙肝病毒，橘凯乙肝表面抗原而被视为阳性结果，反之被认为是阴性。

2、S/CO值表示法

如果乙肝表面抗原正常值（S/CO）大于1S/CO，那么就表示该患者体内有乙肝病毒，乙肝表面抗原而被视为阳性结果，反之被认为是阴性。

3、S/N值表示法

AXSYM免疫分析仪得到S/N的值，如果乙肝表面抗原正常值（S/N）大于2.1S/N，那么就表示该患者体内有乙肝病毒，乙肝表面抗原而被视为阳性结果，反之被认为是阴性。

乙肝表面抗原阳性

乙型肝炎表面抗原阳性，表示体内已感染乙肝病毒。在急性感染中，乙肝表面抗原一般持续存在1-6个月，如果之后乙肝表面抗原转阴表明急性乙肝已经治愈，若仍肢早然为阳性，便变成慢性乙肝，若乙肝表面抗原出现过多，便成为爆发性急性肝炎。乙肝表面抗原（HBsAg）阳性是体内存在乙肝病毒感染的标志之一。

1、乙肝潜伏期。人体感染乙肝病毒后，在感染者血清中最早出现的乙肝表面抗原阳性。一般在乙肝发病前2-3周已呈阳性，发病时达高峰，80%的感染者在发病后4周内消失。

2、体检或验血偶然发现乙肝表面抗原阳性，可能是无症状的乙肝病毒携带者，亦可能是感染后因症状轻微而未及时诊治，发现时肝功能已恢复正常，但HBsAg阳性。此类人群需经常检查肝功能，出现异常及时治疗。

3、慢性乙肝。有症状和体征，不仅乙肝表面抗原阳性，同时有乙肝病毒e抗原（HBeAg）阳性，且血清转氨酶又经常升高，这种情况表示患者体内病毒在繁殖，对肝脏不断损伤，最后可发展为肝硬化，少数可发生肝癌，应积极治疗。

乙肝表面抗原弱阳性

在乙肝两对半检查中，乙肝表面抗原（HBsAg）阳性是已经感染病毒的标志。乙肝表面抗原弱阳性表示感染了乙肝但是乙肝病毒数量少，病毒复制慢，传染能力较弱。

1、乙肝表面抗原弱阳性对于正在进行治疗的乙肝患者来说，是一种好的'现象，它表明乙肝表面抗原正在进行血清转化，即表面抗原阴转，表面抗体阳转，这是一个转变的过程。说明患者的病情正在好转，应该坚持积极的治疗。

2、乙肝表面抗原弱阳性是代表人体感染了乙肝，但是病毒复制比较慢，传染性较弱。出现乙肝表面抗原弱阳性绝对不能轻视，尤其是乙肝小三阳患者。这种情况应该及时的进行治疗，否则病情会进一步加重，最后演变成为肝硬化或者是肝癌。

乙肝表面抗原携带者

很多人不明白乙肝表面抗原携带者，总是将乙肝表面抗原携带者和乙肝病毒携带者混淆在一起，认为二者是一个意思，其实这样理解是错误的。

乙肝表面抗原携带者是指血液中单项乙肝表面抗原（HBsAg）阳性超过半年，但没有肝炎症状和体征，各项肝功能检查指标正常的人。而乙肝病毒携带者是指人体血液中感染了乙肝病毒，病程超过半年，但没有肝炎病状和体征，各项肝功能检查指标正常，乙肝五项检查可能是乙肝大三阳或乙肝小三阳。

1、乙肝表面抗原携带者应定期到医院随访检查。如果在检查发现e抗原阳性，则表明有较强的传染性，应进一步检查治疗。如果发现疲乏无力、食欲不振，就要及时到医院就诊。

2、乙肝表面抗原携带者孕妇在孕育时，应对新生儿在出生后24小时内注射高效价乙肝免疫球蛋白和乙肝疫苗，并且尽量不要母乳喂养。

3、乙肝表面抗原携带的饮食要注意“三高一低”，即较高的碳水化合物、维生素、蛋白质和较低的脂肪。同时禁止烟酒，节制性生活，养成良好的生活习惯，运动要适度。

乙肝表面抗原携带者如果不加注意，预后不容乐观。据了解大多数乙肝表面抗原携带者的肝细胞都有受到不同程度的损伤。因此，乙肝表面抗原携带者必须时刻注意检查治疗。

Ⅲ 酶联免疫吸附法怎么检测血中igm用什么载体

1）HBsAg双抗体夹心法，载体（多是塑料制品）吸附乙肝表面抗体与血清中HBsAg和酶结合物（抗体）形成抗体-抗原-酶结合物复合物，酶复合物分解底物（供氢体多是四甲基联苯胺）生成蓝色复合物。2）HBsAb双抗原夹心法，载体吸附乙肝表面抗原与血清HBsab和加入酶结合物（酶抗原）形成抗原-抗体-酶抗原复合物，复合物分解底物产生蓝色复合物。3）HBeAg双抗体夹心法，原理则大同HBsAg4）HBeAb竞争法，载体吸附槐销抗原与血清中HBeAb结合形成复合物，再加入酶铅盯游结合物（抗体），由于载体没有多余抗原结合位点，酶结合物处于游离状态，在洗版时，酶结合物被洗掉，不能分解底物而无颜色反应，无色是阳性的结果；如果血清没有HBeAb，载体抗原与酶结合物结合能分解底物显L蓝色，结果为阴性。5）HBcAb竞争法同HBeAb

Ⅳ 乙型肝炎表面抗原检查简介

目录

• 1 拼音
• 2 允许进行乙型肝炎表面抗原检查的职业

1 拼音

yǐ xíng gān yán biǎo miàn kàng yuán jiǎn chá

乙型肝炎表面抗原检查是最常用的检验乙型肝炎病原体的试验。以前又称澳大利亚抗原或肝炎协同抗原。乙型肝炎病毒是DNA病毒。在乙肝病人血清中可发现3种形态不同的病毒颗粒。即大球形颗粒（Dane颗粒）、小球形及管状颗粒。前者为完整的乙肝病毒颗粒，含有病毒的表面抗原（HBsAg）、核心抗原、e抗原及DNA 多聚酶等；后两者的主要成分为HBsAg。HBsAg是一种含糖的脂蛋白，由6种多肽组成。有共同的抗原决定簇“a”和几种亚型抗原决定簇d、y、w、r，按不同组合构成多种亚型。我国以adr型为多见。HBsAg有免疫原性，能 *** 机体产生抗体，起抵抗乙肝病毒的作用。HBsAg是乙型肝炎的一个重要诊断指标，多数急性乙型肝炎病人在疾病的潜伏期即可检出HBsAg，在急性期达高峰，以后迅速下降。慢性活动性肝炎、慢性迁延性肝炎、肝炎后肝硬化、原发性肝癌等，也可检出HBsAg。HBsAg携带者的血清中HBsAg阳性结果持续时间可能很长，但并不表现出疾病。HBsAg的检查方法很多，有琼脂免疫扩散法、对流电泳法、反向被动血凝法（RPHA）、酶联免疫法、固相放射免疫法等。但前二者灵敏度不够，已很少用。RPHA法操作简单快速，不需特殊仪器，灵敏度高于前二者，为枣手目前应用较多之方法，但其灵敏度与特异性仍不如酶联免疫法，故将会被酶联免疫法所取代。放射免疫法虽然灵敏、特异，但须同位素标记，试剂来源不足，不宜推广。肝炎病毒对干燥与紫外线耐力强。可用高压灭菌法或过氧乙酸浸泡等方法消毒。

2 允许进行乙型肝炎表面抗原检查的职业

经卫生部核准的乙肝表面抗原携带者不得从事的职业和可以开展相关检测的行业有：

1.根据人力资源和社会保障部发布的《公务员体检特殊标准（试行）》，“乙肝病原散岩没携带者，特警职位，不合格。”

2.根据《卫生部关于民航空勤人员体检鉴定乙肝检测调整意见的复函》要求，民航招收飞行学生体检鉴定乙肝项目检测，可以保留体检鉴定乙肝项目检测。

3.血站从事采血、血液成分制备、供血等业务工作的员工。根据《卫生部关于修订<血站质量管理规范>“8·4”条的通知》(卫医政发〔2010〕69号)要求，血站应“建立员工健康档案。对从事采血、血液成分制备、供血等业务工作的员工，应当每年进行一次经血传播病原体感染情况的检测。对乙型肝炎病毒表面抗体阴性者，征求本人意见冲纳后，应当免费进行乙型肝炎病毒疫苗接种。”（卫生部政务公开办公室2011年2月17日发布）

Ⅳ 酶标仪原理_酶标仪使用说明

酶标仪的检测原理

光是电磁波，波长100nm～400nm称为紫外光， 400nm～780nm之间的光可被人眼观察到，大于780nm称为红外光。人们只所以能够看到色彩，是因为光照射到物体上被物体反射回来。绿色植物之所以是绿色，是因为植物吸收了光中的红色光谱。酶标仪测定的原理是在特定波长下，检测被测物的吸光值。

检测单位：

光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。

检测单位用OD值表示， OD是optical delnsity（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度， OD＝1og（1／trans），其中trans为检测物的透光值。根据Bouger-amberT-beer法则，OD值与光强度成下述关系：

E＝OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度， Ι0 为在检测物之前的光强度，Ι为从被检测物出来的光强度。

OD值由下述公式计算：

E＝OD=C×D×E

C为检测物的浓度

D为检测物的厚度

E为摩尔因子

在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长，在此波长下，此物质能够吸收最多的光能量。如果选择其它的波长段，就会造成检测结果的不准确。因此，在测定检测物时，我们选择特定的波长进行检测，称为测量波长。

但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收，为了消除这种非特异性吸收，我们再选取一个参照波长，以消除这个不准确性。在参照波长下，检测物光的吸收最小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。

Anthos 酶标仪检测值计算

仪器中的检测器接收透过被检测物的光能量，转换成二进位数字信号，最大为4095。仪器定义没有光源下的透光值为 0％，没有检测物的透光值为100％。则实际检测中，检测物的透光值均在 0％一100％之间。透光值

的计算如下：

T＝（Meas—Min）／（Max—Min）

其中T为透光值， Meas为检测的二进位数值， Min为在 0％的情况下检测的二进位数值， Max为在100％的情况下检测的二进位数值，举例如下：

MaX=3600 Mn=20 Meas＝30

T=（30-20）/3600-20)＝0．0028

OD＝1og（1/T）=1og（1/0.0028）=2.552

Anthos 酶标仪的中心定位

仪器会自动对酶标孔进行中心定位，中心定位是要消除酶标孔底的凸凹引起的厚薄不均伍茄差带来检测的不准确。在对每一个酶标仪进行检测时，仪器其实要进行35个点的测量，选取最中间的5个点的均值为本孔的OD值。

光源的参照通道

参照通道是用来校准由于电压不稳或灯泡磨损带来的影响。

酶标仪的用途和其它提示

用于ELISA试剂的测定，广泛用于各种实验室，包括临床实验室。

质量控制

质量控制是试剂检测的重要因素。请按照试剂说明书的要求进行质量控制腔皮。 空白校正

有一些试剂盒的说阴书将空白孔设置为空气，其它大多数空白孔的设置是用试剂来设置的，请按照试剂盒的说明书要求进行。

检测结果的解释

由于有相当多的因素会影响检测的结果，如不同的酶标板，检测试剂的体积，都会造成OD值的不，因此，只有使用同一酶标板反应的试剂检测结果才能比较和分析。对结果的临床解释请依照试剂盒的说明书进行。

酶标仪的使用注意事项

1、工作环境

酶标仪是一种精密的光学仪器，因此良好的工作环境不仅能确保其准确性和稳定性，还能够延长其使用寿命。根据DIN VDE 0871条例，仪器应放置在无磁场和干扰电压的位置。依据DIN 45 635 －19条例：

仪器应放置在低于40分贝的环境下。

为延缓光学部件的老化，应避免阳光直射。

操作时环境温度应在15℃－40℃之间，环境湿度在15％－85％之间。

操作电压应保持稳定。

操作环境空气清洁，避免水汽，烟尘。

保持干燥、干净、水平的工作台面，以及足够的操作空间。

2、操作注意事项

酶标仪的功能是用来读取酶联免疫试剂盒的反应结果，因此要得到准确结果，试剂盒的使用必须规范。许多医院在使用酶标仪之前是通过目测判断结果，操作过程随意性较大，在使用酶标仪后如果不能及时纠正操作习惯，会造成较大误差。在酶标仪的操作中应注意以下事项：

使用加液器加液，加液头不能混用。

洗板要洗纳高干净。如果条件允许，使用洗板机洗板，避免交叉污染。

严格按照试剂盒的说明书操作，反应时间准确。

在测量过程中，请勿碰酶标板，以防酶标板传送时挤伤操作人员的手。

请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部，操作完成后请洗手。

如果使用的样品或试剂具有污染性、毒性和生物学危害，请严格按照试

剂盒的操作说明，以防对操作人员造成损害。

如果仪器接触过污染性或传染性物品，请进行清洗和消毒。

不要在测量过程中关闭电源。

对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差，应根据实际情况及时修改参数，以达到最佳效果。

使用后盖好防尘罩。

出现技术故障时应及时与厂家联系，切勿擅自拆卸酶标仪。

酶标仪及洗板机选购指南

酶标仪（Microplate Reader）是对酶联免疫检测（ EIA）实验结果进行读取和分析的专业仪器。酶联免疫反应通过偶联在抗原或抗体上的酶催化显色底物进行的，反应结果以颜色显示，通过显色的深浅即吸光度值的大小就可以判断标本中待测抗体或抗原的浓度。 酶标仪广泛地应用在临床检验、生物学研究、农业科学、食品和环境科学中，特别在近

几年中，由于大量的酶联免疫检测试剂盒的应用，使得酶标仪在生殖保健领域中应用越来越广泛，同时促进了生殖健康技术水平提高 。

目前国内许多计生站系统开展了酶免检测项目，如：乙肝五项、爱滋病检测、优生优 育系列检测、激素检测等。过去多数采用目测方法，报出的结果缺乏科学的依据。例如：某弓形虫检测试剂盒中，临界值规定为：阴性对照品的 OD 值×2.5，通过目测无法判断标本孔的反应颜色是否超过临界值。肉眼进行两孔之间的颜色比较可能还行，但比较一孔的颜色是否超过另一孔颜色的2.5倍就不可能。

国内多家权威机构，如卫生部临床检验中心和计划生育系统等多次强调酶标仪的重要性，并要求酶联免疫检测试剂应使用酶标仪判读，酶免试剂的质控也应使用酶标仪，并提供酶标仪测定的原始数据，而各厂家的试剂盒说明书没有是让用目测的。同时酶免检测的 项目往往是一些实质性的感染和病变（如：肝炎、爱滋病、优生优育等），判读更要求严谨，由误诊引起的纠纷很难处理。另外，住院手术病人术前的丙肝、爱滋等 EIA 试剂检测是避免因输血引起感染引发的医疗事故纠纷的必要手段，正逐渐被许多单位所采用。

我国免疫诊断方法主要有如下三种：酶免（EIA）、放免（RIA）和发光，在市场上的情况如下：

方法 所处市场周期

放免 衰退期

酶免 成长期

发光 进入期

放免技术由于试剂的污染和有效期等问题在国际和国内市场逐渐被淘汰，而化学发光试剂和设备比较昂贵，使得其在国内的普及特别在计生系统普及需要较长时间，EIA 技术稳定，试剂价格合理，供应充，酶免技术在中国市场处于成长期，因此购买酶标仪正合适宜。 尤其要提到的是，在中国的计划生育和妇幼保健系统配备酶标仪已经迫在眉睫。早在几年以前, 世界卫生组织已建议对孕妇进行 TORCH五项常规筛查，但是遗憾的是由于缺乏酶标仪和洗板机等设备，RCH的检测在中国还未能普遍开展。TORCH 感染在围产医学中称为TORCH综合症，由于孕妇, 胎儿和新生儿都易被感染, 它已受到全世界妇产科和儿科的极大重视。妊娠期感染不仅危害母体，往往还可对胎儿和新生儿产生严重影响。通过胎盘可引起子宫内感染而导致流产、早产、死胎或胎儿生长迟缓和畸形，通过产道和母乳可引起新生儿感染。如累及神经系统可造成不同程度的智力障碍以及各种瘫痪、失聪、失明等严重后遗症，影响人口素质，因而 TORCH 感染与优生优育有极为重要的关系。因此，RCH（IgG和gM）检查通常也称为优生优育十项检查。目前，TORCH的检测方法主要有放免（RIA）和酶免(EIA)。由于放免方法需要特殊仪器，且有放射危害，目前正被酶免（EIA）方法取代。EIA方法具有特异性强，灵敏度高，简单快速，成本低等优点，只要配备有酶标仪和其他相应的设备 ，多数普通实验室均可方便地开展 。 很显然, 尽快在计生系统普及酶标仪等设备是一个迫切的需求。

这项工作的落实将有助于提高诊治水平，降低母婴发病率，从而提高整个国民的健康素质。目前市场上提供的EIA试剂越来越多，如：T3、T4、TSH、TORCH 系列、不孕系列、各种癌症标志物、伤寒、副伤寒等，另外通过母婴传播的性传播疾病(如淋病、梅毒、HIV)和肝炎（如HBV、HCV)，以及胎儿的抗体，新生儿TSH的测定，疫苗反应等，市场上也都有成套 EIA 试剂盒供应。使用酶标仪有利于拓展检测项目，提高检测水平，其社会效益和 经济效益并举。

酶标仪单、双波长检测的比较

发布时间04年05月10日 13时59分

邹荣良

在用酶联免疫法测定抗原或抗体时，不论是定量试验还是定性试验都要求使用酶标仪进行测定。一般的酶标仪在测定中均有单波长和双波长的模式，并且采用的都是垂直光路。但在日常工作中有时会不太重视单波长和双波长的选择，对使用单、双波长给测定结果带来的较大差异也不很了解，并且实际工作中也出现了使用单波长检测导致抗HCV部分弱阳性的漏检。因此，本人就酶标仪在选择单、双波长使用方面谈谈个人的体会，供同道参考。

一 材料和方法

1.材料 由上海科华公司提供的乙肝表面抗原测定试剂盒；eppendorf 20-20ul的移液器。

2.仪器 上海科华公司的ST-360酶标仪和BIO-RAD 550酶标仪。

3.方法 底物液配制：底物液A、B各5ml混合，加入微量酶标记物，再加入5ml终止液，呈微黄色，混匀待用；利用上海科华公司提供的乙肝表面抗原试剂盒的酶标板，用94孔中准确加入150ul配制好的上述底物液，另2孔中加入150ul已终止的空白底物液作空白。在BIO-RAD 550酶标仪上分别进行450nm单波长和450nm及655nm（无630nm）的双波长检测，在ST-360上分别进行450nm单波长和450nm及630nm的双波长检测吸光度各两次。

二 结果

1.分别对所得结果进行统计，发现单、双波长测定结果有较大的差异，双波长测定结果的CV值远小于单波长测定，结果见表1。

2.对ST-360两次重复测定结果进行分析，结果基本一致，见表2。

表1 酶标板吸光度在两台酶标仪上的测定统计结果

表2 ST-360酶标仪两次吸光度测定统计结果

三 讨论

1.酶标仪与分光光度计、自动生化分析仪等的吸光度测定有所不同，一般分光光度计是水平光路，而酶标仪则是垂直光路，但测定原理相同，都是使用朗伯-比耳定律，测定的都是样本的吸光度。垂直光的特点是标本吸光度受液体浓缩或稀释的影响小，不足之处是受被测样本液面是否水平、酶标板透光性、孔底是否平整等的影响较大。

2.酶标仪在用单波长测定吸光度时，除受到测定干扰（样本的浊度、干扰色等）和电路干扰（包括噪音、漂移、电压等）等因素外，受液体表面张力的影响也很大。在检测过程中，由于液体表面张力的作用，液体的表面不是一个平面，而是形成一个凹面，从侧面看似凹透镜，这样不可避免会影响光路的正常通过。由于凹液面的影响，光线在通过液体时，除正常被液体吸收一部分外，尚有部分被折射和反射（如光线通过凹透镜那样），影响吸光度的检测。而酶标仪使用的又是通过光导纤维传播的点光源，如果每次能在同一部位检测，吸光度的重复性将得到保证，但由于机械运动等造成的误差，不可能保证每孔都在相同部位被检测，因此造成了孔与孔之间有一定的差异。结果见表1，整块板单波长检测的CV在3%以上，吸光度最高值和最低值的相对误差达17%以上。

3.在双波长测定中，减少了测定干扰和电路干扰，因此测定结果明显好转，结果见表1，整块板样本的CV在2%以下。ST-360在进行稳定性观察中，如表2所示，两次检测结果基本一致，这表明ST-360的稳定性较好。同时，从表1也可以看到，科华公司生产的ST-360与BIO-RAD 550的检测结果一致，两者的检测性能基本相同。

4.由于液体表面张力的不同，导致单波长测定时的误差较大。并且用不同的洗涤剂会影响到最后加入底物和终止液后的液面情况，用加入表面活性剂的洗涤液清洗后，形成的液面更凹，对单波长检测的影响更大，并且与表面活性剂的浓度成正比。而且中性蒸馏水洗涤后，单、双波长检测的结果基本一致。

5.在酶联免疫法测定抗原抗体中，由于所使用的底物不论是邻苯二胺（OPD）-H2O2，还是四甲基联苯胺（TMB）-H2O2，显色终止后，在630nm和655nm处的吸光度值都只有吸收峰处（492nm/450nm）吸光度值的1%以下，因此，利用双波长检测，不会影响检测灵敏度。建立在进行酶联免疫检测时，酶标仪比色应该首选双波长。这样可以提高临界值处标本的分析正确度，减少实验误差。

Ⅵ 请问医院所化验的乙表即为乙肝表面抗原吗

目前国内最常使用的测定表面抗原的方法是酶联免旁逗亩疫吸附运森试验（ELISA），其次是放射免疫试验（RIA）。
指头取一点血属于末梢血！
末梢血含有的红细胞很多，而乙肝病毒表面抗原和抗体可存在于患者的血液、唾液、乳汁、汗液、泪水指桥、鼻咽分泌物、精液及阴道分泌物中。而且在感染乙肝病毒后可在血清中测到阳性结果。所以乙表也可以指的是乙肝表面抗原也可以是乙肝表面抗体！
用末梢血化验相对来说灵敏度和特异性很底！

通俗一点说： 末梢血化验这样的方法不是化验乙肝的金标准。乙肝表面抗原还是乙肝表面抗体并不能排除有或者没有这方面的感染！
建议注射乙肝免疫球蛋白的同时化验乙肝5项标志物的检测！

Ⅶ 酶联免疫检测的几种方法及其原理

（1）酶联免疫吸附试验（enzyme
linked
immunosorbent
assay,ELISA）：是将抗原或抗体吸附在固相载体表面。使抗原抗体反应在固相载体表面进行。可用间接法、双抗体夹心法或竞争法测定抗原或抗体。
（2）夹心法（sandwich
assay）:将已知的特异抗体包装在固相载体（塑料板凹孔或纸片上），加入待检标本，标本中的抗原即可与载体上的抗原结合，洗去未结合的材料后加入该抗原的酶标记抗体，洗去未结合的酶标抗体，加底物显色，用酶免疫检测仪测量颜色的光密度，可定量测定抗原。
间接法（indirecr
ELISA）常用于检查特异抗体。先将已知特异抗原包被固相载体，加入待检标本（可能含有相应抗体），再加入酶标抗Ig的抗全（即第二抗体），经加底物显色后，根据颜色的光密度计算出标本中抗体的含量。
（3）BAS-ELISA：近年来对酶免设分析法的改进是使用生物素-亲合素-过氧化物酶复合物作为指示剂，组成一新的生物放大系统进一步提高检测的敏感度。可用来检测多种抗原抗体系统如细菌、病毒、肿瘤细胞表面抗原等。一个亲合素（avidin）分子可以结合4个生物素分子（biotin）。结合非常稳定。亲合素和生物素都可与抗全、酶、荧光素等分子结合，而不影响后者的生物活性。一个抗体分子可偶联90个生物素分子，通过生物素又可连接多个亲合素。因此大提高检测的敏感度。目前应用生物-酶标亲合素系统（biotinavidin
system-
ELISA,BAS-ELISA），它是通过生物素标记抗体连接免疫反应系统，同时借助生物素化酶或酶标亲合素引入酶与底物反应系统。

Ⅷ 酶联免疫法的检测步骤

ELISA用血清来检测，首先血液要经过至宏乱少半个小并庆时的凝集，然后取血清。将酶复合物用稀释液稀释后，加血清及阴性、阳性对照，还有就是质控品（这是严格的要求，它的范围必须在质控范围内）。经过一个小时的孵育，然后洗板，加底物，半个小时避光反应后加终止绝绝握液即完成反应部分，然后就是读数。由数值来判断结果的阴性或阳性。

Ⅸ 酶联免疫法的检测方法

双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：
一、将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。
二、加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。
三、加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。
四、加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。
根据同样原理，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物，即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。
在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要获得针对受检抗原的异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗血清，包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体，一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性，而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应，作一步法检测。
在一步法测定中，当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象，此时反应后显色的吸光值（位于抗原过剩带上）与标准曲线（位于抗体过剩带上）某一抗原浓度的吸光值相同，如按常法测读，所得结果将低于实际的含量，这种现象被称为钩状效应（hook effect），因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时，反应甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）时，应注意可测范围的最高值。用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。
假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇，例如HBsAg的a决定簇，也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。但在HBsAg的检测中应注意亚型问题，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型，显然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性，这也是用单抗作夹心法应注意的问题。
双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子（RF）的干扰。RF是一种自身抗体，多为IgM型，能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF，它可充当抗原成份，同时与固相抗体和酶标抗体结合，表现出假阳性反应。采用F（ab'）或Fab片段作酶结合物的试剂，由于去除了Fc段，从而可消除RF的干扰。双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响，已被列为这类试剂的一项考核指标（参见6.2）。
双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。
双抗原夹心法测抗体
反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法。本法关键在于酶标抗原的制备，应根据抗原结构的不同，寻找合适的标记方法。 在双抗体夹心法测定抗原时，如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。这种双位点一步不但简化了操作，缩短了反应时间，如应用高亲和力的单克隆抗体，测定的敏感性和特异性也显着提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELISA提高到新水平。
在一步法测定中，应注意钩状效应（hookeffect），类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。 间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下：
⑴将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。
⑵加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他抗体及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。
⑶加酶标抗抗体：与固相复合物中的抗体结合，从而使该抗体间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体，可用酶标羊抗人IgG抗体。
⑷加底物显色：颜色深度代表标本中受检抗体的量。
本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。
间接法成功的关键在于抗原的纯度。虽然有时用粗提抗原包被也能取得实际有效的结果，但应尽可能予以纯化，以提高试验的特异性。特别应注意除去能与一般健康人血清发生反应的杂质，例如以E.Coli为工程酶的重组抗原，如其中含有E.Coli成份，很可能与受过E.Coli感染者血清中的抗E.Coli抗体发生反应。抗原中也不能含有与酶标抗人Ig反应的物质，例如来自人血浆或人体组织的抗原，如不将其中的Ig去除，试验中也发生假阳性反应。另外如抗原中含有无关蛋白，也会因竞争吸附而影响包被效果。
间接法中另一种干扰因素为正常血清中所含的高浓度的非特异性抗体。病人血清中受检的特异性IgG只占总IgG中的一小部分。IgG的吸附性很强，非特异IgG可直接吸附到固相载体上，有时也可吸附到包被抗原的表面。因此在间接法中，抗原包被后一般用无关蛋白质（例如牛血清蛋白）再包被一次，以封闭（blocking）固相上的空余间隙。另外，在检测过程中标本须先行稀释（1:40~1:200），以避免过高的阴性本底影响结果的判断。 竞争法可用于测定抗原，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。操作步骤如下：
⑴将特异抗体与固相载体连接，形成固相抗体。洗涤。
⑵待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液，使之与固相抗体反应。如受检标本中无抗原，则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。如受检标本中含有抗原，则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合，竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会，使酶标抗原与固相载体的结合量减少。参考管中只加酶标抗原，保温后，酶标抗原与固相抗体的结合可达最充分的量。洗涤。
⑶加底物显色：参考管中由于结合的酶标抗原最多，故颜色最深。参考管颜色深度与待测管颜色深度之差，代表受检标本抗原的量。待测管颜色越淡，表示标本中抗原含量越多。一般情况，是通过方波伏安法，检测培养体系的峰电流，通过峰电流与抗原抗体的线性关系来最终确定体系的最终检测目标的浓度。
当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应。如抗原为高纯度的，可直接包被固相。如抗原中会有干扰物质，直接包被不易成功，可采用捕获包被法，即先包被与固相抗原相应的抗体，然后加入抗原，形成固相抗原。洗涤除去抗原中的杂质，然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应。竞争法测抗体有多种模式，可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合，抗HBc ELISA一般采用此法。另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合，洗涤后再加入酶标抗体，与结合在固相上的抗原反应。抗HBe的检测一般采用此法。 血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在，后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗体多用捕获法，先将所有血清IgM（包括异性IgM和非特异性IgM）固定在固相上，在去除IgG后再测定特异性IgM。操作步骤如下：
⑴将抗人IgM抗体连接在固相载体上，形成固相抗人IgM。洗涤。
⑵加入稀释的血清标本：保温反应后血清中的IgM抗体被固相抗体捕获。洗涤除去其他免疫球蛋白和血清中的杂质成分。
⑶加入特异性抗原试剂：它只与固相上的特异性IgM结合。洗涤。
⑷加入针对特异性的酶标抗体：使之与结合在固相上的抗原反应结合。洗涤。
⑸加底物显色：如有颜色显示，则表示血清标本中的特异性IgM抗体存在，是为阳性反应。 亲和素是一种糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每个分子由4个亚基组成，可以和4个生物素分子亲密结合。维生素H，分子量244.31，存在于蛋黄中。用化学方法制成的衍生物，生物素－羟基琥珀亚胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）可与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大小分子形成生物素化的产物。亲和素与生物素的结合，虽不属免疫反应，但特异性强，亲和力大，两者一经结合就极为稳定。由于1个亲和素分子有4个生物素分子的结合位置，可以连接更多的生物素化的分子，形成一种类似晶格的复合体。因此把亲和素和生物素与ELISA偶联起来，就可大提高ELISA的敏感度。
亲和素－生物素系统在ELISA中的应用有多种形式，可用于间接包被，亦可用于终反应放大。可以在固相上先预包被亲和素，原用吸附法包被固相的抗体或抗原与生物素结合，通过亲和素－生物素反应而使生物素化的抗体或抗在相化。这种包被法不仅可增加吸附的抗体或抗原量，而且使其结合点充分暴露。另外，在常规ELISA中的酶标抗体也可用生物素化的抗体替代，然后连接亲和素－酶结合物，以放大反应信号。 在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。ELISA中有三个必要的试剂：免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：
⑴已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；⑵酶标记的抗原或抗体（结合物）；
⑶酶的底物；
⑷阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；
⑸酶联物（结合物）及标本的稀释液；
⑹洗涤液；
⑺酶反应终止液。