⑴ 什么是最小抑菌浓度(MIC)
最小抑菌浓度简称MIC,MIC90是抑制90%细菌生长的最低药物浓度。
最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration)单位以μg/ml或mg/L来表示,为最小抑制病原微生物繁殖或杀灭病原微生物生存的药物浓度,用于衡量抗感染药(包括抗生素、抗菌药、化学合成药)抵抗病原微生物的能力。
使用抗感染药治疗的目的是根除人体被感染部位的病原微生物,从微生物学角度看是通过达滚宴到和维持一定的抗感染药的浓度来实现的,抗感染药在体内或体外的浓度要达到或超过MIC,才能抑制病原微生物的生长;浓度要达到或超过MBC,才能杀灭病原微生物。
与此相对应的有MIC50或MIC90、MBC50或MBC90,分别为抑制50%或90%病原微生物繁殖或杀灭50%或90%病原微生物生存的最小浓度。
(1)检测药物mic常采用的方法为扩展阅读:
中文名:最小抑菌浓度
外文名:minimal inhibit concentration
简写:MIC
释义:试管稀释法测定细菌对药物敏感性
影响因素:药物和亮好细菌的种类不同
测量方法:试管稀释法
⑵ MIC MIC50和MIC90 分别指的是什么
MIC50和MIC90是指在一批试嫌念验中能抑制50%和90%受试菌生长所需的MIC。
最小抑菌浓度(minimal inhibit concentration)指用试管稀释法测定细菌对药物的敏感性。完全抑制细菌生长的最高稀释管1毫升所含的药量。亦即被测细菌对该药的敏感度。因药物和细菌的种类不同,需具体规定药物的稀释范围使用培养基的种类、加菌量,培养条件和判定结果的时间。
实验目的
1、掌握细菌培养技术,包括细菌的分离、培养,含菌量的测定。
2、掌握细菌分离培养过仔陵程中的无菌操作。
3、掌握微量肉汤二倍稀释法测定抗菌药物MIC的基本步骤。能准确测出各种抗菌药物的MIC值,了解单药的抗菌活性。
4、为棋盘法设计棋念者戚盘做准备,求取棋盘法的中心浓度。
⑶ 药敏试验的报告上标明抗菌药的MIC是什么含义
如果药敏试验拍银衡的报告上标明抗菌药的MIC,说明该药敏试验采用的搏亮是试管法、琼脂稀释法或微量法,即这些方法都可以定量地测定出药物对某病原菌的最低抑菌浓度。MIC越低说明该药物对相应的病原菌的作用越强。MIC只表示一种药物对某一株细菌抗菌作用的强弱,如果测定的是几十株或几百株甚至上千株的同一种类的细菌,例如袭做测定头孢菌素Ⅰ对大肠杆菌的MIC,可以根据百分位数,来计算MIC50,MIC90,即能抑制50%或90%的大肠杆菌的头孢菌素Ⅰ的浓度是多少。也就可以从总体上反映头孢菌素Ⅰ对大肠杆菌抗菌作用的强弱。
⑷ 最低抑菌浓度的几种测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)方法
1.1.1.抗菌药物贮存液制备 抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。抗菌药物直接购自厂商或相关机构。所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。例如:需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液,所用抗生素为粉剂,其药物的有效力为750μg/mg。用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。根据公式计算所需稀释剂用量为:(182.6 mg×750μg/ml)/1280μg/ml=107.0ml,然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境,保存期不超过6个月。 1.1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围 根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准,药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值,特殊情况例外。
1.1.3. 培养基 NCCLS推荐使用Mueller-Hinton(MH)肉汤,pH7.2~7.4。需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时,应在肉汤中加入2%(W/V)氯化钠,按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤,肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。
1.1.4.接种物的制备 有2种方法配制接种物,一是细菌生长方法,用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个,接种于4-5ml的水解酪蛋白(MH)肉汤中,35℃孵育2-6h。增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准,约含1~2×108CFU/ml。二是直接菌落悬液配制法,对某些苛养菌,如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株,推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。用MH肉汤将上述菌悬液进行1∶100稀释后备用。注意应在15分钟内接种完配制好的接种物,并取一份接种物在非选择性琼脂平板上传代培养,以检查接种物纯度。
1.1.5.稀释抗菌药物的制备及菌液接种 取无菌试管(13×100mm)13支,排成一排,除第1管加入1.6mlMH肉汤外,其余每管加入MH肉汤1ml,在第1管加入抗菌药物原液(如1280μg/ml) 0.4ml混匀,然后吸取1ml至第2管,混匀后再吸取1ml至第3管,如此连续倍比稀释至第11管,并从第11管中吸取1ml弃去,第12管为不含药物的生长对照。此时各管药物浓度依次为256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25μg/ml。然后在每管内加入上述制备好的接种物各1ml,使每管最终菌液浓度约为5×105CFU/ml。第1管至第11管药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、05、0.25、0.125μg/ml。
1.1.6.孵育 将接种好的稀释管塞好塞子,置35℃普通空气孵箱中孵育16~20h;嗜血杆菌和链球菌在普通空气孵箱中孵育20~24h;对可能的耐甲氧西林葡萄球菌和耐万古霉素肠球菌应持续孵育满24h。
1.1.7.结果判断与解释 在读取和报告所测试菌株的MIC前,应检查生长对照管的细菌生长情况是否良好,同时还应检查接种物的传代培养情况以确定其是否污染,质控菌株的MIC值是否处于质控范围。以肉眼观察,药物最低浓度管无细菌生长者,即为受试菌的MIC。甲氧苄胺嘧啶或磺胺药物的肉汤稀释法终点判断,与阳性生长对照管比较抑制80%细菌生长管药物浓度为受试菌MIC。
根据NCCLS推荐的分界点值标准,判断耐药(resistant, R)、敏感(susceptible, S)或中介(intermediate, I)。S表示被测菌株所引起的感染可以用该抗菌药物的常用剂量治疗有效,禁忌症除外。R指该菌不能被抗菌药物的常用剂量在组织液内或血液中所达到的浓度所抑制,或属于具有特定耐药机理(如β-内酰胺酶),所以临床治疗效果不佳。I是指MIC接近药物的血液或组织液浓度,疗效低于敏感菌。还表示被测菌株可以通过提高剂量(如β-内酰胺类药物)被抑制,或在药物生理性浓集的部位(如尿液)被抑制。另外,中介还作为“缓冲域”,以防止由微小的技术因素失控,所导致较大的错误解释。 1.2.1.抗菌药物和培养基制备 同常量肉汤稀释法。
1.2.2.MIC板制备 无菌操作,将倍比稀释后不同浓度的抗菌药物溶液分别加到灭菌的96孔聚苯乙烯板中,第1至第11孔加药液,每孔10μl,第12孔不加药作为生长对照,冰冻干燥后密封,-20℃以下保存备用。
1.2.3.接种物制备 将用生长法或直接菌悬液法制备的浓度相当于0.5麦氏比浊标准的菌悬液,经MH肉汤1∶1000稀释后,向每孔中加100μl,密封后置35℃普通空气孵箱中,孵育16~20h判断结果。当试验嗜血杆菌属,链球菌属时,孵育时间为20~24h,试验葡萄球菌和肠球菌对苯唑西林和万古霉素的药敏试验时孵育时间必须满24h。此时,第1孔至第11孔药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125μg/ml。
1.2.4.结果判断 以在小孔内完全抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。当阳性对照孔(即不含抗生素)内细菌明显生长试验才有意义。当在微量肉汤稀释法出现单一的跳孔时,应记录抑制细菌生长的最高药物浓度。如出现多处跳孔,则不应报告结果,需重复试验。通常对革兰阴性杆菌而言,微量肉汤稀释法测得的MIC与常量肉汤稀释法测得的结果相同或低一个稀释度(1孔或2倍)。
2. 琼脂稀释法是将不同剂量的抗菌药物,加入融化并冷至50℃左右的定量MH琼脂中,制成含不同递减浓度抗菌药物的平板,接种受试菌,孵育后观察细菌生长情况,以抑制细菌生长的琼脂平板所含最低药物浓度为MIC。本法优点是可在一个平板上同时作多株菌MIC测定,结果可靠,易发现污染菌;缺点是制备含药琼脂平板费时费力。
2.1.培养基制备 使用MH琼脂,按商品说明书进行配制,pH7.2~7.4。淋病奈瑟菌使用GC琼脂基础加1%添加剂;其它链球菌使用含5%(V/V)绵羊血的MH琼脂(当试验磺胺药时,使用溶解的马血)。
2.2.含药琼脂平板制备 根据实验设计,将已倍比稀释的不同浓度的抗菌药物分别加入已加热溶解,并在45~50℃水浴中平衡的MH琼脂中,充分混匀倾倒灭菌平皿,琼脂厚度3~4mm。通常按1∶9比例配制药物琼脂平板,根据需要来选择药物浓度范围。配制好的含药琼脂平板应装入密封塑料袋中,置2~8℃冰箱可贮存5天。
2.3.接种物制备与接种 制备浓度相当于0.5麦氏标准比浊管的菌悬液,再1∶10稀释,以多点接种器吸取制备好菌液(约1~2μl)接种于琼脂平板表面,每点菌数约为104CFU,形成直径为5~8mm的菌斑。接种好后置35℃孵育16~20h(甲氧西林耐药葡萄球菌、万古霉素耐药肠球菌孵育时间应满24h),观察结果。奈瑟菌属、链球菌属细菌置5%二氧化碳、幽门螺杆菌置微需氧环境中孵育。
2.4.结果判断 将平板置于暗色、无反光物体表面上判断试验终点,以抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。在含甲氧苄胺嘧啶或磺胺琼脂平板上可见轻微细菌生长,与生长对照比较抑制80%以上细菌生长的最低药物浓度作为终点浓度。
如果出现有2个以上菌落生长于含药浓度高于终点水平的琼脂平板上,或低浓度药物琼脂平板上不长而高浓度药物琼脂平板上生长现象,则应检查培养物纯度或重复试验。
3.
⑸ 如何做药敏试验
用药敏实验进行药物敏感度的测定,以便准确有效的利用药物进行治疗。但由于药敏试验要求比较严格,条件比较高,仅仅在大中专院校或科研单位有条件的可以操作,一些养殖厂或一些门诊难有条件进行药敏试验的操作。针对这个问题,农业部动物检疫所青岛易邦生物工程有限公司动物疫病诊疗中心经过几年的总结和实践,逐渐总结出几套适合基层进行药敏试验的操作方法。目前,临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法,稀释法(包括琼脂和肉汤稀释法),抗生素浓度梯度法(E-test法),和自动化仪器等。
纸片扩散法
该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上,纸片中的药物在琼脂中扩散,随着扩散距离的增加,抗菌药物的浓度呈对数减少,从而在纸片的周围形成浓度梯度。同时,纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长,而抑菌范围外的菌株则可以生长,从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈,不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同,抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度,并与该药物对测试菌的MIC呈负相关。
稀释法
稀释法药敏试验可用于定量测试抗菌药物对某一细菌的体外活性,分为琼脂稀释法和肉汤稀释法。实验时,抗菌药物的浓度通常经过倍比(lg2)稀释,能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度成为最小抑菌浓度(MIC),一个特定抗菌药物的测试浓度范围应该包含能够检测细菌的解释性折点(敏感、中介和耐药)的浓度,同时也应该包含质控参考菌株的MIC.
⑹ 畜牧兽医药理学的MIC是啥意思
最小抑菌浓度是指(Minimum inhibitory
concentration)或(Minimal inhibition concentration)的缩写,
测定抗菌药物抗菌活性大小的一个指标,指在体外培养细菌18~24小时后能抑制培养基内病原菌生长的最启旁低药物浓度,该实验通过在Nuns
96孔板上进行抗菌培养实验得到测试化合物悄搏橡的抗菌能力大小。
几种测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)方法
1常量肉汤银告稀释法
2微量肉汤稀释法
3琼脂稀释法
43.E试验(E-test)
⑺ 如何采用试管二倍稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)
1,准备10只试管,分别向十只试管中加入1ML营养肉汤。
2.往第一只试管中加入1ML药品混匀,吸1ML加入第二只试管中,混匀,在第2只试管中吸1ML加入第3只‘’‘’‘’‘以此类推,直到第十只,在第十只中弃去1ML。
3.再往10只试管中分别加入1ML菌液(10000FU/ML)混匀。
4.放入保温箱培养16到24小时,拿出观察直到哪只试管还澄清,哪只试管的药物浓度就是MIC。
⑻ 微量肉汤二倍稀释法应注意哪些环节才能准确测定mic
注意用册野移液枪吸取药液时候,不能有气泡,枪头要伸进液体里面,而且要慢。
MIC可册卜以州姿喊肉眼判断也可以测OD,很多文献都是在波长600nm处检测,测定的时候要混匀,因为本来检测原理就是利用细菌的光学性质,样本不混匀放置时间长了细菌会沉降的,结果会受影响的。另外,对于那些有颜色的药,测OD会受干扰。
出现负值是常有的事,微孔板检测的时候孔间差异,加入样品对体系的影响,系统误差,长时间放置后细菌先后沉降(很多酶标仪带振荡功能,可以先振荡几秒钟再测)等都可能造成这样的结果。
(8)检测药物mic常采用的方法为扩展阅读:
MIC:最低抑菌浓度,在微生物鉴定的稀释法中以在试管内或小孔内完全抑制细菌生长的最低药物浓度为最低抑菌浓度。与之相关的还有最低(小)杀菌浓度MBC。
一个最低抑菌浓度通常被视为对生物抗菌剂的活性最基本的实验室测量。由于较低的最低抑菌浓度值表明,少的药物是必需的,以抑制生长的生物体,具有较低的最低有效浓度分数的药物是更有效的抗菌剂。有几个基于网络的、可自由访问的最小抑制浓度数据库。最低抑菌浓度分数是重要的诊断实验室,以确认抗微生物的抗菌剂,也监测新的抗菌剂的活性。